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       【摘要】 
       目的研究防己渗漉提取的最佳工艺。方法以防己总碱和粉防己碱为考察指标，采用正交实验法对防己的渗漉工艺进行研究。结果确定了最佳工艺条件为浸渍24 h，60%乙醇6倍量渗漉，渗漉速度为快速。结论工艺合理可行，可应用于生产。
       【关键词】  防己 渗漉 正交实验 总生物碱 粉防己碱
       Study on the Optimum Percolation Processes of Radix Stephaniae Tetrandrae
       TIAN Ji，HE Bing，QIU Huarong
       (Institute of Materia Medica of Luzhou Medical College，Luzhou, Sichuan 646000, China)
       Abstract：ObjectiveTo study the optimum percolation conditions for Radix Stephaniae Tetrandrae.MethodsThe percolation process of Radix Stephaniae Tetrandrae was studied by orthogonal design，and the content level of total alkaloids and tetrandrine were used as indexes. ResultsThe optimum percolation conditions for Radix Stephaniae Tetrandrae were as follows： the concentration of ethanol was 60 % , the time of soak was 24h , the rate of percolation was 5ml·min-1·kg-1，and the volume of solvent was 6 times. ConclusionThe method is reasonable and feasible，and can be applied to batch production.
       Key words：Radix Stephaniae Tetrandrae；  Percolation；  Orthogonal design；   Total alkaloids；   Tetrandrine
       防己为防己科植物粉防己Stephania tetrandra S. Moore的干燥根。具有利水消肿、祛风止痛的功效。临床上用于水肿脚气，小便不利，湿疹疮毒，风湿痹痛，高血压病等［1］。本品是一味临床常用的中药，在许多成药中均有使用，其主要有效成分为生物碱类，以苄基异喹啉型生物碱为主，为脂溶性有效成分，另外也包含少量水溶性季铵碱类［2］。所以，为保证有效成分的充分提取，生产上通常采用醇提工艺，以渗漉法和回流法为主。为降低成本，提高收率，为大生产提供实验依据，我们对防己的乙醇渗漉工艺进行了优选考察。实验采用正交设计法，分别以总生物碱、粉防己碱为考察指标，以乙醇浓度、浸泡时间、乙醇倍数、渗漉速度为考察因素进行研究，获得了较为理想的优选工艺。现报道如下。
       1  仪器与材料
       高效液相色谱仪， P680A，美国戴安；UV-1100紫外分光光度计，北京瑞利分析仪器有限公司；751G分光光度计，上海分析仪器厂；电子天平，0.000 1 g/0.000 01 g, XR205SM-DR，瑞士普利赛斯。渗漉筒，500 ml，自制。
       防己，购于成都市荷花池药材市场，产地：浙江，含粉防己碱1.13%；粉防己碱对照品，含量测定用，批号0711-20005，中国药品生物制品检定所产品；乙醇，医用，95%，购于宜宾保康药业泸州分公司；其余试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  方案设计经验及预实验结果表明，渗漉工艺的主要影响因素为乙醇浓度、浸泡时间、乙醇倍数、渗漉速度等，故选定以上4个考察因素，每个因素设三水平，以防己总碱、粉防己碱的提取率为评价指标（权重系数均为0.5），按L9(34)正交表实验，表头设计见表1。表1  因素水平（略）
       称取防己粗粉100.0 g，加入1倍量相应浓度的乙醇，搅拌均匀，密闭放置2 h,待药粉充分膨胀和润湿后，装筒，按《中国药典》2005年版渗漉法［1］实验，加入相应浓度的乙醇，浸泡12～48 h，开始渗漉，流速1～5 ml·min-1·kg-1，收集相应量的渗漉液，并用相同浓度的乙醇定容到1 000 ml，得样品液（含生药0.1 g/ml）。
       2.2  总生物碱的含量测定
       2.2.1  贮备液的制备精密称取5 mg粉防己碱对照品，至10 ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀（0.496 mg/ml）。
       2.2.2  最大吸收波长的选择精密称取粉防己碱对照品1 mg，置25 ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，精密吸取0.2 ml，置10 ml量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀。采用紫外分光光度法，在波长200～400 nm处进行扫描，结果见图1。粉防己碱的最大吸收波长为282 nm。
       2.2.3  标准曲线的绘制分别精密量取贮备液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 ml，置10 ml容量瓶中，用乙醇稀释至刻度，摇匀。以乙醇为空白，在282 nm处测定吸收度，根据测定结果绘制标准曲线，并求得回归方程：A=12.949 309C-0.063,相关系数r=0.999 98。
       2.2.4  样品的测定分别精密量取样品溶液5 ml,置100 ml烧杯中，水浴蒸干，残渣加混合溶剂（乙醚：氯仿：乙醇：10%氨水，25∶8∶2.5∶1）40 ml，搅拌后浸泡10 min，超声处理10 min，放置片刻，倾滤，残渣用混合溶剂洗涤3次，5 ml/次，滤液水浴蒸干，残渣用乙醇溶解并定容至25 ml，精密量取上述溶液1 ml，置10 ml容量瓶中，加乙醇至刻度，摇匀，以乙醇作空白，于282 nm处测定吸收度，计算总生物碱含量。结果见表2。
       2.3  粉防己碱含量测定
       2.3.1  色谱条件色谱柱为Dikma Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈∶甲醇∶0.06%二乙胺溶液（60∶20∶20），检测波长282 nm，流速1.0 ml/min,进样量10 μl。
       2.3.2  对照品溶液的制备精密称取粉防己碱对照品10mg，置10ml棕色量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀（1mg/ml）。
       2.3.3  供试品溶液的制备精密量取样品液10 ml，置50 ml蒸发皿中，水浴蒸干，残渣，用流动相溶解，转入25 ml量瓶，加流动相至刻度，摇匀，离心，取上清液，0.22 μm滤膜过滤。
       2.3.4  标准曲线的制定取上述对照品溶液用流动相稀释，制备成每毫升含0.05，0.10，0.25，0.50，0.75，1.00 mg粉防己碱的系列标准溶液，按上述色谱条件分别进样5 μl，以粉防己碱的峰面积A为纵坐标，浓度C为横坐标作图，求得粉防己碱的回归方程为：A=63.873 8C-0.311 8，r=0.999 8，粉防己碱浓度在0.05～1.0 mg范围内与峰面积线性关系良好。
       2.3.5  测定分别精密吸取对照品溶液(0.25 mg/ml)与供试品溶液各10 μl,注入液相色谱仪，测定，按外标法计算含量，即得。液相色谱图见图2～3，测定结果见表2，方差分析见表3。表2  防己渗漉正交实验表及结果（略）表3  方差分析（略）
       直观分析及方差分析表明，乙醇浓度对防己的渗漉工艺有极显著影响，故选择最佳浓度A1，而B，C，D因素对工艺的影响较小，从方便生产、节约成本的角度，选择浸泡24h,(B2)，收集6倍量渗漉液（C1），渗漉速度为快速（D3）。即A1B2C1D3。据此条件，验证3批。结果见表4。表4  验证实验（略）
       3  讨论
       在方法学研究中，参照文献资料我们考察了∶甲醇-水(40∶60)，甲醇-水-二乙胺(82∶18∶0.2)，甲醇-水(83∶17，含0.5 g/L的三乙胺)，甲醇-乙腈-水-二乙胺(65∶25∶10∶0.08)，甲醇-乙腈-0.003 moL/L KH2PO4-二乙胺(55∶25∶20∶0.06)等多种流动相系统，结果表明本文方法分离度好，分离效能高。流动相中加入少量二乙胺，能较好地改善分离度，并使峰形更好。
       验证实验的结果表明，优选工艺收得率与正交实验结果接近，但优选工艺节约了乙醇，减少了时间，降低了生产成本，粉防己碱的提取率达到了83%，说明本工艺合理可行，适用于大生产。
       从实验结果看，随着防己总碱提取率的增高，粉防己生物碱的提取率也相应增高，说明两者的含量之间有一定对应关系。
       防己总碱的检测参照文献方法［3］，采用了混合溶剂。可以有效地避免杂质干扰。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：101，附录IV.
       
       ［2］阴 健，郭力弓.中药现代研究与临床应用Ⅰ［M］.北京：学苑出版社，1995：322.
       
       ［3］施大文，王志伟，毕兆岐，等.中药粉防己碱中生物碱含量的薄层-分光光度法评价［J］.上海第一医学院学报，1984，11（4）：284.