文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的优选黄连最佳纯化工艺。 方法对影响总生物碱纯化效果的因素进行了系统考察。结果黄连总生物碱的最佳纯化工艺为10倍量0.5%稀硫酸，用石灰乳调pH 9，静置2h，滤过，滤液用盐酸调pH1，加氯化钠使含盐量达10%，静置24h，滤过，沉淀水洗至pH 5。结论 优选的黄连总生物碱纯化工艺稳定可行。
       【关键词】  黄连 盐酸小檗碱 总生物碱 纯化
       Purification Technology of Total Alkaloids from Rhizoma Coptidis
       XU Peihu, GAO Yuan*, ZHANG Xueqiong, ZHANG Liang, XU Ke
       Department of Chemical Engineering, Wuhan University of Technology,China
       Abstract:ObjectiveTo optimize the best purification process of total alkaloids from Rhizoma Coptidis.MethodsThe factors that affect the result of purification to total alkaloids were determined.ResultsThe optimum isolation process was as follows, adding 10 time of 0.5% sulphuric acid into Rhizoma Coptidis extract, adjusting to pH 9 by lime cream, standing for 2 hours, filtering, adjusting to pH 1 by hydrochloric acid, adjusting the salinity of solution up to 10% by sodium chloride, standing for 2 hours, washing the precipitation by distilled water to pH 5. ConclusionThe optimum purification technology of total alkaloids from Rhizoma Coptidis is simple, stable and feasible.
       Key wordsRhizoma Coptidis;   Berberine hydrochloride;   Total alkaloids;   Purification
       
       黄连为毛莨科植物黄连Coptis chinensis Franch.三角叶黄连Coptis deltoidea C.Y. Cheng et Hsiao或云连Coptis teeta Wall.的干燥根茎。黄连主要含原小檗碱型生物碱，其中小檗碱含量最高, 可达10%。有清热燥湿、泻火解毒的功效，对溃疡性结肠炎也有疗效［1,2］。酸沉法是根据小檗碱的硫酸盐在水中的溶解度较大，盐酸盐溶解度较小的原理设计的，此法成本低、收率高，所得产品质量好，是实际生产中常用的方法。本实验对酸沉法中对影响总结分离效果的因素进行单因素考察，确定最佳纯化工艺，为生产提供依据。
       1  材料与仪器
       黄连药材购于湖北省中药材公司。盐酸小檗碱对照品购于中国药品生物制品检定所，批号110713-200208。Agilent 1100型高效液相色谱仪，UV1101型紫外分光光度仪（上海天美科学仪器有限公司），旋转蒸发仪（上海亚荣生化仪器厂），超声清洗器（天津赛恩斯科学仪器有限公司）所用试剂均为分析纯。
       2  方法及结果
       2.1  黄连总生物碱的测定［3］
       2.1.1  对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品28.7  mg，置25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取0.5 ～25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度即得。
       2.1.2  标准曲线的制备精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5 ml，至10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，以1%盐酸甲醇液为空白对照，于349 nm波长处测定吸收度。以对照品浓度为横坐标，吸收度为纵坐标，绘制标准曲线，经回归处理，回归方程为：A=0.084 3C＋0.013 6，r=0.999 4。盐酸小檗碱的浓度在2.296 ～11.48μg/ml的范围内线性关系良好。
       2.1.3   测定取黄连提取物约0.05 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入50 ml 1%的盐酸甲醇液，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，用1%的盐酸甲醇液补足重量，滤过，精密量取续滤液0.2 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。以1%盐酸甲醇液为空白对照，于349 nm波长处测定吸收度，从标准曲线上读出供试品溶液中盐酸小檗碱的浓度，计算，即得。
       2.2   盐酸小檗碱的测定
       2.2.1  对照品溶液的制备精密称取盐酸小檗碱对照品28.7 mg，至25 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取2 ml至25 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，即得。
       2.2.2  标准曲线的制备精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5 ml置10 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别吸取各稀释液10 μl，注入高效液相色谱仪，测定峰面积。以进样量和峰面积的进行回归计算，计算回归方程为Y=2 076.9X+5.44，r=0.999 8。结果表明在0.091 84 ～0.459 2 μg范围内，盐酸小檗碱峰面积值与进样量有良好的线性关系。
       2.2.3  测定取黄连提取物约0.05 g，精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，精密加入50 ml甲醇，称定重量，超声处理30 min，取出，放冷，再称定重量，用甲醇补足重量，滤过，精密量取续滤液0.5 ml，置25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀。测定峰面积，从标准曲线上读出供试品溶液中盐酸小檗碱的浓度，计算，即得。
       2.2.4  黄连提取物的制备黄连药材粉碎成粗粉，分别加10倍量70%乙醇回流提取3次，1 h/次，分次过滤，合并滤液。于60℃下减压浓缩，干燥（60℃）。
       2.3  纯化条件考察
       2.3.1  硫酸浓度考察提取小檗碱时，以稀硫酸为溶媒，使其转换成硫酸盐，增大在水中的溶解度，提高提取效率，稀硫酸的浓度从0.1%到1%不等［4］，因此，必须先对稀硫酸的浓度进行考察。
       称取黄连提取物3份，每份约3 g，精密称定，分别加入10倍量的0.1%，0.5%，0.9%的硫酸作为溶媒，超声提取30 min，过滤，取续滤液。同前法测定盐酸小檗碱及总生物碱的含量。结果见表1。表1  稀硫酸浓度实验结果（略）
       实验结果表明，同等量，不同浓度的稀硫酸中，0.5% H2SO4中，盐酸小檗碱及总生物碱的含量最高，因此，确定稀硫酸的浓度为0.5%。
       2.3.2  硫酸用量考察提取小檗碱时，溶媒的用量也为一个影响因素，因此，必须对稀硫酸的用量进行考察。
         
       称取黄连提取物3份，每份约3 g，精密称定，分别加入8，10，12倍量的0.5%硫酸作为溶媒，超声提取30 min，过滤，取续滤液。同前法测定盐酸小檗碱及总生物碱的含量。结果见表2。表2  硫酸用量考察结果（略）
       实验结果表明，等同浓度的稀硫酸作为溶媒，12倍量0.5% H2SO4中盐酸小檗碱及总生物碱含量最高，但10倍量0.5% H2SO4中盐酸小檗碱及总生物碱含量与12倍量中的相差不大，考虑到工业成本，确定0.5% H2SO4用量为干膏的10倍量。
       2.3.3  石灰乳中和条件考察将小檗碱转换成硫酸盐，增大其在水中的溶解度，再用石灰乳中和，使硫酸根离子转换成难溶性的硫酸钙而除去。
       称取黄连提取物4份，每份约2.5 g，加入10倍量0.5%硫酸溶解，滤过，滤液分别用石灰乳调pH5，6，7，9，11，滤过，滤液分别置于100 ml量瓶中，稀释至刻度，同前法测定盐酸小檗碱及总生物碱的含量。结果见表3。表3  石灰乳中和硫酸实验结果（略）
       实验结果表明，石灰乳中和硫酸，随pH升高，盐酸小檗碱及总生物碱含量也升高，调pH 5时盐酸小檗碱及总生物碱的损失最小，但在pH5，6，7时，溶液中生成难于过滤的粘性溶液，增加了提取操作中的困难，因此，确定石灰乳中和硫酸的pH为9。
       2.3.4  酸沉条件考察将提取物的硫酸水提液用石灰乳中和后，利用小檗碱的盐酸盐几乎不溶于水的性质，加盐酸使其转化为盐酸盐，降低在水中的溶解度，结合盐析法，制得沉淀物。
       称取黄连提取物9 g，加入10倍量0.5%硫酸溶解，滤过，滤液分别用石灰乳调pH 9，滤过，滤液平均分为3份，用盐酸分别调pH1～2，2～3，3～4，每份样品均加氯化钠使含盐量达10%，摇匀，静置24 h，滤过，沉淀水洗至pH5，干燥（60℃），称重，计算提取物收率，并同前法测定盐酸小檗碱及总生物碱含量。结果见表4。
       
       实验结果表明,黄连提取液酸沉时，pH越低，提取物中盐酸小檗碱及总生物碱的含量越高，提取物的收率亦越高，pH为1～2，盐酸小檗碱的含量为56.96%，总生物碱的含量为94.67%，因此，确定黄连提取液酸沉条件：用盐酸调pH1～2。表4  盐酸调pH实验结果（略）
       2.3.5  盐析条件考察文献资料报道［5］，盐酸小檗碱酸沉时盐析浓度为5%～15%，为此，对盐析浓度进行了考察。
       称取黄连提取物9g，加入10倍量0.5%硫酸溶解，滤过，滤液分别用石灰乳调pH 9，滤过，滤液用盐酸分别调pH1～2，均分为3份，分别加氯化钠使含盐量达5%，10%，15%，摇匀，静置24 h，滤过，沉淀水洗至pH 5，干燥（60℃），称重，计算提取物收率，并同前法测定盐酸小檗碱及总生物碱的含量。结果见表5。表5  盐析条件考察结果（略）
       可见，盐析时氯化钠的浓度在5%时，盐酸小檗碱及总生物碱的含量最高，可达96.23%，但提取物收得率较低，仅为9.14%；氯化钠的浓度在15%时，提取物收得率最高，可达14.16%，但盐酸小檗碱及总生物碱的含量较低，只有75.05%，因此，综合考虑，黄连提取物盐析时，氯化钠浓度控制在10%，这样既保证提取物中盐酸小檗碱及总生物碱有较高的含量，同时收得率亦较高。
       因此，黄连提取物的纯化工艺确定为：称取黄连提取物，加入10倍量0.5%硫酸溶解，滤过，滤液分别用石灰乳调pH 9，滤过，用盐酸分别调pH1～2，加氯化钠使含盐量达10%，摇匀，静置24h，滤过，沉淀水洗至pH 5，干燥（60℃）。
       3  讨论
       用紫外分光光度仪对盐酸小檗碱对照品溶液进行扫描以确定最大波长，结果发现，盐酸小檗碱在229，265，及349 nm处均有较强吸收，但229 nm及265 nm处其他杂质峰比较多，最后确定349nm为测定波长。
       本实验HPLC法中所用流动相是为多次实验摸索而得，可使盐酸小檗碱与其他成分达到基线分离，峰形及保留时间均较合适。
       盐酸小檗碱遇高温易被破坏，并且受热时间延长，可致黄连中其他生物碱分解［6］，因此，在处理样品全过程中应尽量避免高温。低温时，生物碱较稳定，室温贮藏一段时间后总生物碱含量基本保持不变。
       【参考文献】
         　　［1］余园媛，王伯初，彭 亮，等. 黄连的药理研究进展［J］.重庆大学学报（自然科学版），2006，29(2)：107.
       
       ［2］舒德忠，万先惠，刘华蓉，等. 黄连总碱对实验性溃疡性结肠炎的作用研究［J］.儿科药学杂志，2005，11(3)：7.
       
       ［3］赵庆国，吴素体，王 颖. 不同品种和产地黄连的总生物碱含量测定［J］.时珍国医国药，2001，12（11）：974.
       
       ［4］刘圣，唐丽琴，陈礼明，等. 正交试验优选黄连中小檗碱提取工艺的研究［J］.中国药房，2004，15（1）：18.
       
       ［5］杨宏健，肖美凤. 正交实验优选三颗针中小檗碱的提取工艺［J］.中国药师，2005，8（8）：673.
       
       ［6］黄传俊，李其兰，高申蓉. 正交试验优选黄连提取工艺［J］.中国药师，2005，8（8）：699.