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       【关键词】  百合；,,酚酸甘油苷；,,Regaloside,C；,,Regaloside,A；,,反相高效液相色谱法
       摘要：目的测定百合中酚酸甘油苷Regaloside C及Regaloside   A的含量。方法色谱柱为 Alltima C18 (4.6 mm ×250 mm ,5 μm)，以甲醇-水（27∶73）作为流动相，流速1.0 ml・min1，检测波长325 nm。结果百合鲜品中 Regaloside C和Regaloside A平均回收率分别为99.8％和97.4％，其 RSD分别为0.67％和1.36％；干品中 Regaloside C和Regaloside A平均回收率分别为100.6％和102.5％，其 RSD 分别为1.37％和1.16％。结论 该方法快速,重现性和稳定性好,可用于百合中该物质的含量测定。
       关键词：百合；  酚酸甘油苷；  Regaloside C；  Regaloside A；  反相高效液相色谱法
       Determination of Two Phenolic Glycosides in Lily by RP-HPLC
       HU Wen-yan, DUAN Jinao*,QIAN Dawei, Zhu Lingying,QIAN Shihui
       (School of Pharmacy of Jiangsu University,Zhenjiang 212000,China; Nanjing University of Traditional Chinese Medicine,Nanjing 210029,China; Jiangsu Institute of Chinese Traditional Medicine, Jiangsu Engineering Research Center for Modern Chinese Drugs Preparation, Nanjing 210028,China)
       Abstract：ObjectiveTo determine two phenolic glycosides, regaloside C and regaloside A in lily.MethodsThe separation was performed on a Alltima C18 column(4.6 mm ×250 mm ,5 μm).MeOHH2O(27∶73)was used as mobile phase. The flow rate was 1.0ml・min1.The detection wavelength was at 325nm.ResultsIn fresh lily, the average recoveries of regaloside C and regaloside A were 99.8％ ,97.4％, RSD were 0.67％,1.36％,respectively. In dried lily, the average recoveries of regaloside C and regaloside A were 100.6％ ,97.4％,RSD were 1.37％,1.16％,respectively. ConclusionThis method is accurate, rapid and reproducible, can be used to determine the phenolic glycosides in lily.
       Key words：Lily;  Phenolic glycosides;  Regaloside C；  Regaloside A；  RPHPLC
   
　　百合为常用药食两用植物，《中国药典》2005年版收载的来源为百合科植物卷丹 Lilium lancifolium Thunb.、百合 Lilium brownii F.E.Brown var.viridulum Baker或细叶百合 Lilium pumilum DC.的干燥肉质鳞叶［1］，卷丹主产于江苏宜兴。近年来国内外在百合化学成分、药理作用、临床应用方面进行了大量的研究［2,3］，但对于其成分含量测定以及质量控制的报道却很少［4～6］，有关酚酸甘油苷的含量测定未见报道。本文建立了卷丹中酚酸甘油苷 Regaloside C和 Regaloside A的高效液相色谱含量测定方法，以期为控制百合的质量提供科学依据。
       　　1  器材
       1.1   仪器 Waters2695高效液相色谱系统，996光电二极管阵列检测器。Empower色谱数据工作站；Mettler百万分之一天平；Millipore纯水器。
       1.2   试药 对照品 Regaloside C和 Regaloside A为自制，结构经 MS，1H-NMR，13CNMR 确证，纯度经HPLC分析≥98%。甲醇为色谱纯，水为纯净水。
       1.3   药材 实验样品采自江苏宜兴，经段金廒教授鉴定为百合科植物卷丹 Lilium lancifolium Thunb.。
       　　2  方法与结果
       2.1   色谱条件  色谱柱Alltima C18（4.6 mm ×250 mm, 5 μm）；流动相为水甲醇（73∶27）。流速1.0 ml・min-1 ，检测波长325 nm，柱温30℃，进样量10 μl。在此条件下：样品中 Regaloside C和 Regaloside A与其他成分达到基线分离，理论塔板数 Regaloside C为5 982.078，Regaloside A为8 606.925。分离效果见图1~2。
       1．Regaloside C     2．Regaloside A
       图1  对照品（a）和百合样品（b）的HPLC色谱图（略）
       1. 标准品          2. 样品
       图2  Regaloside C和 Regaloside A光谱图（略）
       根据 DAD检测器的的特点，我们比较了对照品和样品中 Regaloside C和 Regaloside A的光谱曲线，从图中可以看出，两条光谱图曲线完全吻合，说明在该色谱条件下分离效果好，无杂质干扰。
       2.2  线性关系考察取对照品 Regaloside C 2.338 mg和 Regaloside A 6.174 mg，精密称定,分别置25 ml 量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得 Regaloside C 0.093 5 g・l1，Regaloside A 0.246 9 g・L1的储备溶液。分别精密吸取两种对照品储备溶液1 ，5，10，15，20，25 μl，分别进样，以进样量（X）为横坐标，对照品 Regaloside C和Regaloside A峰面积积分值（Y）为纵坐标进行回归， Regaloside C在0.10～2.62 μg范围内线性良好，Y＝2.12×106 X1.95×104 (r = 0.999 961)； Regaloside A在0.31～7.86  μg 范围内线性良好，Y =1.65×106X -5.59×104(r =0. 999 998)。
       2.3   精密度实验　分别吸取0.093 5 g・L1的 Regaloside C和0.246 9 g・L1的 Regaloside A储备溶液,重复进样5次，进样10 μl/次，测定 Regaloside C和 Regaloside A峰面积，RSD分别为0.352%，0.359%。
       2.4  供试品制备　取粉碎后的百合鲜品(洗净，晾干) 约20 g ，干品约3 g（鲜品105℃蒸气加热6 min，55℃烘干），精密称定，置于圆底烧瓶中，加40 %甲醇于80℃水浴上热回流提取2 次，提取时间为1 h/次。滤过，合并滤液，减压回收溶剂, 残渣加甲醇溶解并转移至10 ml量瓶中，甲醇定容至刻度，0. 45 μm 微孔滤膜滤过，即得。
       2.5  重复性实验　取同一批次药材样品，按2. 3 项下方法制备5 份,测定 Regaloside C和 Regaloside A含量，RSD分别为0. 8%，0. 5 %。
       2.6  稳定性实验　取同一供试品溶液,按2. 1 项下色谱条件,在0，1，2，4，8和10 h分别测定 Regaloside C及 Regaloside A的含量，RSD 分别为0.3 % ,0.8 %。说明供试液在10 h内稳定。
       2.7   加样回收率实验精密称取已知含量的百合药材鲜品10g，干品1.5g各6份，分别精密加入对照品溶液，按2. 3 项下制备，测定含量并计算，结果Regaloside C和 Regaloside A平均回收率分别为100.6％和102.5％，RSD分别为1.37％和1.16％。结果见表1~2。
       2. 8   样品含量测定　取不同批次百合样品按2.3下方法进行提取，测定含量。结果见表3。从表3结果可以看出不同批次样品中 Regaloside C的含量波动较大，Regaloside A的含量波动较小。
       　　3  讨论
       3. 1   本实验曾选用甲醇-水(60∶40)，甲醇-水(40∶60)，甲醇∶水(30∶70)等水递增的比例，都没有得到满意的结果，最后采用方法中的比例使 Regaloside C和 Regaloside A得到了很好的基线分离,并且样品中其他成分也具有很好的分离度,同时该方法缩短了分析时间。
       表1   百合鲜品加样回收率实验结果（略）
       表2  百合干品加样回收率实验结果（略）
       表3  不同批次百合中两种酚酸甘油苷的含量（略）
       3. 2   实验中选择比较了甲醇、95 %甲醇、75 %甲醇、60 %甲醇、40 %甲醇和15 %甲醇6 种提取溶剂，并考察了使用不同提取方法（回流、超声、浸置）、改变时间和溶剂体积等，实验结果表明以40%甲醇80℃水浴热回流提取2 次，提取溶剂150 ml/次，回流时间为1 h的提取方法，提取效果最好。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部2000年版［S］.北京：化学工业出版社，2005:88.
       ［2］  郭朝晖，蒋生祥. 中药百合的研究和应用［J］. 中医药学报，2004，32（3）：12.
       ［3］  曲伟红，周日宝，童巧珍，等. 百合的化学成分研究概况［J］.湖南中医药导报，2004，10（3）：75.
       ［4］  吉宏武，丁霄霖. 百合甾体皂苷元的气-质联用分析及其结构鉴定［J］.无锡轻工大学学报，2003，22（3）：85.
       ［5］  杨林莎，李玉贤，李明丽，等. 苯酚－硫酸比色法测定百合多糖的含量［J］.中国中医药信息杂志，2004，11（8）：704.
       ［6］  吉宏武,丁霄霖. 百合总皂苷定量测定方法的研究［J］.林产化学与工业，2003，23（4）：54.
       基金项目：江苏省自然基金资助项目（No.BK2003112）；
       
　　江苏省公益项目（No.BM2004525）
       （江苏大学药学院，江苏 镇江  212000；  南京中医药大学，江苏 南京  210029；江苏省中医药研究院，江苏省现代中药制剂研究技术工程中心，江苏 南京  210028）