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       【关键词】  马钱子；,,炮制；,,士的宁；,,马钱子碱；,,反相高效液相色谱
       摘要：目的用反相高效液相色谱（RPHPLC）法对马钱子生品及炮制品中士的宁和马钱子碱含量进行测定，探讨醋制马钱子炮制原理。方法Hypersil BDS C18(4.6 mm×200 mm,5 μm)，流动相为乙腈水二乙胺（34∶100∶1），检测波长260 nm。结果江西改良炮制法炮制品中士的宁和马钱子碱的含量较低。结论 该法精确、简便、重现性好。
       关键词：马钱子；  炮制；  士的宁；  马钱子碱；  反相高效液相色谱
       RP-HPLC Determination of Strychnine and Brucinein from Semen Strychni and Its Processed Products
       ZHOU Daogen, ZHANG Difeng, GONG Qianfeng*, CHEN Qi
       (Jiangxi College of Traditional Chinese Medicine, Nanchang 330004,China)
       Abstract：ObjectiveTo develop an RPHPLC method for determination of strychnine and brucine in Semen Strychni and its processed products and study the principle of Semen Strychni processed products with Jiangxi innovated method .MethodsA Hypersil BDS C18(4.6 mm×200 mm, 5 μm) column was used with acetonitrilewaterdiethylamine(34∶100∶1) as the mobile phase ,the content was detected at a wavelength of  260 nm.ResultsThe contents of strychnine and brucine in the processed products with Jinngxi innovated method were lower.ConclusionThis method is accurate,simple and reliable.
       Key words：Processing;  Strychnine;  Brucine;  RPHPLC
   
　　马钱子为马钱科植物马钱 Strychnos nux-vomica L.的干燥成熟种子［1］,亦名番木鳖。苦,温；有大毒，归肝、脾经。具有通络止痛、散结消肿之功效。主要成分为生物碱，其中主要有效成分为士的宁（C21H22N2O2），但毒性较大，其次是马钱子碱（C22H26N2O2），其毒性是士的宁的1/20，但疗效却只有士的宁的1/40。马钱子未经炮制不能入内服药，只能外用。马钱子的炮制方法很多，全国常用炮制方法为砂烫法和油炸法，其中砂烫法为药典法。江西炮制法有关的改良炮制法有醋酸浸法、醋酸浸砂炒法、醋酸煮砂炒法。另外江西的樟、建帮加工炮制的中药饮片着色独特，其薄如纸，药效显著，名扬四海，素有“一粒马钱子切206片”的说法。为了论证江西改良炮制法的合理性，我们对马钱子的相关炮制品作了含量测定。用75%甲醇回流提取2 h，采用反相高效液相色谱法测定马钱子生品及各炮制品中士的宁和马钱子碱的含量。
       　　1  材料
       1.1  药品马钱子购自樟树市药材市场，经本院中药鉴定教研室鉴定为马钱Strychnos nux-vomica L.的干燥成熟种子。
       1.2  仪器与试药Agilent 1100 series 高效液相色谱仪。对照品士的宁及马钱子碱均购于药品生物制品检定所。乙腈为色谱纯，其余为分析纯。
       　　2  方法与结果
       2.1  样品炮制
       2.1.1  马钱子取生马钱子粉碎成细粉。
       2.1.2  砂烫法按《中国药典》2005年版马钱子项下方法炮制。
       2.1.3  油炸法［2］取市售麻油，倒入铁锅中加热至217℃，投入马钱子3 min左右后炸到老黄色，取出沥尽油，晾干即得。
       2.1.4  樟帮尿泡法［3］原药放入童小便中浸泡49 d至鼓胀，取出，再用清水漂浸21 d，取出，刮去绒毛。再用水漂浸7 d，捞出，沥干水，用樟刀切成腰子片，晒干。
       2.1.5  樟帮尿泡滑石粉炒法［3］取尿泡马钱子片，用滑石粉炒至黄色，筛去滑石粉，研末即可。
       2.1.6   建帮尿泡砂炒法取原药材加入童小便浸泡，置49 d后取出，用清水搅拌冲洗净尿汁，再加清水漂浸5 d，取出，用碎瓷片刮去绒毛，切薄片，晒至全干。取定量的净白砂，入锅内加热至230℃倒入马钱片，不断翻炒，2 min左右后迅速出锅，筛去砂子，摊凉，再碾细末。
       2.1.7  醋酸浸法［4］取净马钱子用水泡2 d，润12 h，切1.5 mm的薄片，再用5%的醋酸溶液浸泡5 d，水漂3 d，干燥，碾碎。
       2.1.8  醋酸浸泡砂炒法取醋酸浸马钱子片按砂烫法项下炮制。
       2.1.9  醋酸煮法取将马钱子用水泡2 d，润12 h，洗净，切制成1.5 mm的薄片，用5%的醋酸溶液缓火煮1.5 h，取出，晾干。
       2.1.10  醋酸煮砂炒法取醋酸煮马钱子片按《中国药典》砂烫法项下炮制。
       2.2  马钱子士的宁与马钱子碱含量测定
       2.2.1  色谱条件Hypersil BDS C18(4.6 mm×200 mm,5 μm)，以乙腈水二乙胺（34∶100∶1）为流动相，流速为1 ml・min1，检测波长260 nm，温度30℃。
       2.2.2  标准曲线的绘制分别精密称取士的宁和马钱子碱4.95 mg和3.09 mg至50 ml容量瓶中，甲醇定容至刻度作为混合对照品溶液。分别吸取混合对照品0.1，0.2，0.5，1，2 ml至10 ml容量瓶中甲醇定容至刻度。分别精密吸取上述溶液20 ml注入高效液相色谱仪，以进样量的容度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。士的宁回归曲线为Y=39 175.317 5X-3.571 05，r=0.999 93。
       2.2.3  精密度实验分别精密吸取同一对照品溶液20 ml注入高效液相色谱仪，重复进样5次，计算RSD分别为：士的宁为0.92%，马钱子碱为1.03%。
       2.2.4  重现性实验按样品测定法对生品测定5次，结果士的宁平均含量为2.50%,RSD为1.36%；马钱子碱平均含量为1.34%，RSD为1.56%。
       2.2.5  稳定性实验取同一样品试液，分别于0，2，4，8，12，24 h进行测定，得士的宁和马钱子碱的RSD分别为1.17%和1.89%。
       2.2.6  回收率实验采取加样回收法，取已知含量的生品5份，精密称定，精密加入对照品适量，按样品项下方法操作，计算回收率，结果士的宁的平均回收率为99.3%，RSD为2.01%；马钱子碱平均回收率为98.1%，RSD为2.13%。
       2.2.7  耐用性实验相同色谱条件下分别采用 Hypersil ODS2 C18(4.6 mm×200 nm,5 μm)和 Hypersil ODS2 C18(4.6 mm×250 nm,5 μm)进行测定，峰形和分离度均较好；另外在一定范围内通过改变乙腈在流动相中的比例，除保留时间有所变化外，也能获得较好的分离度和峰形。
       2.2.8  含量测定将生品和各炮制粉碎过3号筛，分别精密称取生品和各炮制品3份，每份1 g于锥形瓶中，分别加氢氧化钠试液5 ml浸润5 min后，加75%甲醇30 ml，称重，回流提取2 h，取出放凉，用甲醇补充减失的重量，精密吸取续滤液1 ml置25 ml容量瓶中，甲醇定容至刻度作为供试品溶液。分别吸取供试品溶液20 ml注入高效液相色谱仪按上述条件进行测定。测定结果见表1。
       表1  马钱子生品及炮制品士的宁与马钱子碱的含量（略）
       　　3  讨论
       本文采用的反相高效液相色谱法对马钱子生品及各炮制品中士的宁和马钱子碱进行了含量测定，方法快速、准确、重现性好。通过反相高效液相色谱对马钱子生品及炮制品中士的宁和马钱子碱进行了含量测定。结果显示：各炮制品中士的宁和马钱子碱的含量较生品均有不同程度的降低。其中以醋酸浸品和醋酸浸砂炒品中的含量为最低。《本草蒙筌》有“用醋注肝经且资住痛”，醋味酸、涩，人肝经，具有收敛、散淤、止痛、解毒等功效。马钱子生物碱与酸性成分结合，可形成可溶性的盐从而降低毒性。同时，醋制马钱子炮制工艺简便可控，利于实现饮片规范化标准化，可为临床提供安全稳定的饮片。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：34.
       ［2］  吴  皓，蔡宝昌，郑培新，等.炮制对马钱子中生物碱的影响［J］.中国中药杂志，1994，19（5）：227.
       ［3］  龚千峰.樟树中药炮制全书［M］.南昌：江西科学技术出版社，1990：250.
       ［4］  蔡宝昌，何亚维.马钱子不同炮制品中总生物碱的测定及急性毒性实验的比较，中国中药杂志，1994，19（10）：598.
       基金项目：江西省科技攻关资助项目（赣科发计字［2003］245）
       (江西中医学院，江西 南昌  330004)