文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【关键词】  高效液相色谱法；,,半夏；,,鸟苷；,,腺苷
       摘要：目的研究以HPLC同时测定贵州不同产地半夏药材中鸟苷、腺苷含量的方法。方法采用Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以甲醇水(15∶85)为流动相，流速0.7 ml・min-1，检测波长λ=260 nm，柱温25℃。结果鸟苷在0.048～0.480 μg范围内线性关系良好，r=0.999 9，腺苷在0.045～0.449 μg范围内线性关系良好，r=0.999 8。加样回收率(n=9)的RSD：鸟苷为2.94%，腺苷为2.06%。结论 该法操作简便，结果可靠，重现性好，可作为半夏药材的质量控制方法之一。
       关键词：高效液相色谱法；  半夏；  鸟苷；  腺苷
       HPLC Method for Determination of Guanosine  and Adenosine in Rhizoma Pinellia Ternate from Different Districts in Guizhou
       ZHAO Yang， JIN Fengyun ，WU Qing*, ZOU Jing, LIU Dongqian
       (Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang  550002，China； Guizhou Normal University，Guiyang 550001，China; Guizhou Provincial Laboratory for Mountainous Environment, Guiyang 550001, China)
       Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for determination of guanosine and adenosine in Rhizoma Pinellia ternate from different districts in Guizhou.MethodsA Diamonsil C18 column(4.6 mm×250 mm，5 μm)was used.The mobile phase was methanol-water(15∶85)，the flow rate was 0.7 ml・min-1，λ=260 nm，and the column temperature was 25℃. ResultsThe linear range of guanosine was within 0.048～0.480 μg，r=0.999 9，the RSD of recovery(n=9) was 2.94%. The linear range of adenosine was within 0.045～0.449 μg，r=0.999 8， the RSD of recovery(n=9) was 2.06%. ConclusionThis method has good reproducibility .It can be used for quality control of Rhizoma Pinellia ternate.
       Key words：HPLC；  Pinellia ternate；  Guanosine；  Adenosine
   
　　半夏为天南星科植物半夏Pinellia ternata(Thunb.) Breit 的块茎,首载于《神农本草经》， 列为下品。其性温， 味辛， 有小毒， 归脾、胃、肺经。具有燥湿化痰、降逆止呕、消痞散结的功效。含有生物碱、B-谷甾醇、多糖、氨基酸、挥发油、半夏蛋白及无机元素等多种成分。国内外均有人以乌苷为指标对半夏的水溶性成分的含量进行检测［1~3］。鸟苷和腺苷是生物碱类成分，具有明显的药理作用。有文献报道鸟苷和腺苷可以改善心脑血液循环，防止心率失常，抑制神经递质释放和调节酸环化酶活性等［4］。本文采用HPLC同时检测贵州不同产地半夏药材中鸟苷、腺苷的含量，操作简便，方法可靠，重现性好，可以作为半夏药材的质量控制方法之一。
       　　1  仪器与材料
       1.1  仪器 Agilent1100系列高效液相色谱仪，Sartorius BP 211D 型电子天平，CX-300 型超声波清洗机。
       1.2  对照品 鸟苷购于中科院上海生化研究所，纯度>99%；腺苷购于中国药品生物制品鉴定所(批号为879-2000001)。
       1.3  试剂甲醇为色谱纯(天津市科密欧化学试剂开发中心)，水为超纯水。
       　　2  方法与结果
       2.1  色谱条件 色谱柱为Diamonsil C18柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相为甲醇-水(15：85)；检测波长λ=260 nm；柱温25℃，流速0.7 ml・min-1。
       2.2  系统适用性实验按样品含量测定项下方法制备供试品溶液，取该溶液10 μl，注入高效液相色谱仪，鸟苷和腺苷的保留时间分别为8.833 min及17.918 min。理论塔板数以鸟苷计不低于2000，鸟苷和腺苷与相邻未知色谱峰的分离度均大于1.5(见图1)。
       2.3  线性关系考察 分别精密称取干燥至恒重的鸟苷、腺苷对照品，用30%MeOH制成浓度分别为0.600，0.561 mg・ ml-1的对照品储备液Ⅰ，Ⅱ。分别精密吸取对照品储备液Ⅰ，Ⅱ各2 ml，至50 ml容量瓶中，用30%MeOH定容至刻度制成浓度24.00，22.44 μg・ ml-1的混合对照品溶液。精密吸取混合对照品溶液2，5，8，11，14，17，20 μl进样，于260 nm处测定峰面积。以进样量(μg)为横坐标(x)，以峰面积为纵坐标 (y)计算回归方程。结果：鸟苷的回归方程为y=3 532.6x-3.512 6，相关系数r=0.999 9，线性范围为0.048～0.480 μg；腺苷的回归方程为y=4 023.7x-6.745 9，相关系数r=0.999 8，线性范围为0.045～0.449 μg。
       2.4  精密度实验精密吸取混合对照品溶液10 μl，连续进样6次， 以峰面积计算RSD（%），鸟苷和腺苷峰面积的RSD分别为0.29%和0.14%。结果见图1。
       1.鸟苷        2.腺苷
       图1  对照品(a)及贵州河镇地区半夏药材(b)色谱图（略）
       2.5  重复性实验精密称取河镇地区半夏药材(粉碎,过60目筛)6份，按样品含量测定项下方法制备供试品溶液，按样品的含量测定法测定，结果鸟苷平均含量为80.365μg・g-1 ， RSD=1.11%；腺苷平均含量为91.355 μg・g-1 ,RSD=0.77%。
       2.6  稳定性实验 精密称取河镇地区半夏药材(粉碎,过60目筛)1 g，按样品含量测定项下方法制备供试品溶液，按样品含量测定法，分别在0，2，4，6，8，10 h进样测定,结果鸟苷平均含量为83.833μg・g-1 ， RSD= 0.85%；腺苷平均含量为92.217 μg・g-1 ， RSD=0.25%。
       2.7  加样回收率实验精密称取河镇地区半夏药材（含鸟苷82.099 μg・g-1，腺苷91.786 μg・g-1）1 g(粉碎,过60目筛),分别按鸟苷和腺苷含量的80%，100%，120%加入对照品溶液，每个平行3份，按供试品溶液制备方法制成加样回收供试品液。取10 μl进样测定，计算。结果鸟苷低、中、高3个加入量的回收率(n=3)分别为102.33%，95.96%，100.40%；RSD分别为1.10%，1.64%，1.30%；平均回收率(n=9)为99.45%。腺苷低、中、高3个加入量的回收率(n=3)分别为101.16%，97.60%，98.59%；RSD分别为1.88%，1.42%，1.12%；平均回收率(n=9)为99.12%。
       2.8  样品含量测定 分别精密称取贵州不同产地半夏药材(粉碎,过60目)1.0 g， 置50 ml锥形瓶中，精密加入30%MeOH30 ml，称重，超声提取30 min，冷却后补至原重，滤过，滤液过0.45μm微孔滤膜作为供试品溶液，进样10 μl，以外标法计算含量。结果见表1。
       表1  样品含量测定结果（略）
       　　3  讨论
       3.1  流动相的选择本实验比较了甲醇水、乙腈水、甲醇酸水、乙腈-酸水系统对样品中鸟苷、腺苷分离度、峰形的影响，结果发现采用甲醇水(15∶85)洗脱时鸟苷、腺苷分离效果和峰形最好。
       3.2  提取方法的比较 本实验比较了超声、回流、索氏提取等方法对半夏药材中鸟苷、腺苷提取效率的影响，结果超声提取法既省时又方便，而且提取效果最好。
       3.3  提取溶剂的选择本实验比较了用不同浓度的甲醇、酸水、水作为提取溶剂，结果以30%甲醇提取效果最好。本文结果表明，贵州不同产地半夏药材中鸟苷和腺苷含量差别很大，财神地区的半夏药材鸟苷含量最高而腺苷含量最低；同一地区半夏药材，采挖的与市售的也有差别，这为环境因子与药材含量之间的相关性研究提供了良好的基础。
       　　参考文献：
       ［1］  吴  皓，文红梅，郭  戎，等. 半夏姜制对鸟苷含量的影响［J］.中国中药杂志， 1998， 23(11)：661.
       ［2］  张科卫， 吴  皓，崔小兵，等.不同产区半夏药材中鸟苷含量的测定［J］.中成药， 2000， 22(11)： 769.
       ［3］  鹿野美弘， 有元良帜子， 赵昌代， 他. 小半夏加茯苓汤ぉけゐ［半夏］の指标物质［J］.生药学杂志， 1987， 41(4)：282.
       ［4］  夏  敏. 高效液相色谱法测定蛹草中腺苷的含量［J］.淮阴师范学院学报－自然科学版，2004，3(3)：226.
       基金项目：贵州省中药现代化资助项目（黔科合农字2005-5034）
       (贵阳中医学院，贵州 贵阳  550002；贵州师范大学，贵州 贵阳  550001；贵州省山地环境重点实验室，贵州 贵阳  550001)