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       【关键词】  十一方药酒；,,,烫伤；,,,创面愈合；,,羟脯氨酸
       摘要：目的探讨十一方药酒对大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的影响。方法大鼠深Ⅱ度烫伤模型分5组，创面分别外用高、中、低剂量的十一方药酒, 以生理盐水为阴性对照, 湿润烧伤膏为阳性对照, 通过观察创面愈合时间，不同时间点创面愈合百分率和组织病理学变化，检测不同时间点创面组织羟脯氨酸水平，研究十一方药酒对大鼠深Ⅱ度烫伤创面愈合的影响。结果大鼠深Ⅱ度烫伤创面外用十一方药酒可以缩短愈合时间，提高创面愈合百分率，增加创面羟脯氨酸水平, 作用与湿润烧伤膏相当。结论 十一方药酒可增强胶原合成, 促进上皮细胞增殖, 加速烫伤创面愈合。
       关键词：十一方药酒；   烫伤；   创面愈合；  羟脯氨酸
       Effects of Shi Yi Fang vinum on Deep Partial Thickness Burn Wound Healing in Rats
       QIN Xueqian,  CAI Danzhao, CHEN Hongtao, WEI Ailing
 
　　(The First Affiliated Hospital, Guangxi College of TCM, Nanning 530023,China; Department of Biochemistry, Guangxi Medical College, Nanning  530021，China; The Affiliated Pharmaceutical Factory, Guangxi College of TCM, Nanning 530023，China)
       Abstract：ObjectiveTo observe the effects of Shi Yi Fang vinum on deep partial thickness burn wound in rats.Methods A model of deep partial thickness burn wound in rats was used. All wounded rats were divided into five groups, different concentration of Shi Yi Fang vinum was used, the wound healing time , the content of hydroxyproline, the rates of wound healing as well as the histopathological change of the wound tissues were examined at different time points post burn, so as to value the effects of Shi Yi Fang vinum on the healing of the deep partial thickness burn wounds of rats. ResultsCompared with negative control group, the healing time was shorter and the ratio of wound healing was higher, the content of hydroxyproline was obviously higher in wounds of the Shi Yi Fang vinum group. The histopathological examination also indicated that the proliferation conditions of epithelium and fibroblast cells were much better in the Shi Yi Fang vinum group. Conclusion It is suggested that external application of Shi Yi Fang vinum to deep partial thickness burn wound in rats may stimulate collagen synthesis and enhance wound healing.
       Key words：Shi Yi Fang vinum;  Burn;  Wound healing;  Hydroxyproline
   
　　十一方药酒主要由乳香、没药、红花、自然铜、续断等中药制成。该药酒具有活血祛淤、消肿止痛、续筋接骨、止血生肌等作用。临床上常用于跌打损伤，治疗各种外伤肿痛、骨折、腰腿痛。疗效明显。现临床上有试用于治疗烧、烫伤，并且效果良好。本实验在大鼠皮肤深Ⅱ度烫伤创面外用该药，观察不同剂量十一方药酒对烫伤创面愈合的影响，为临床用药提供依据。
       　　1  材料与方法
       1.1  药品、试剂与仪器十一方药酒（广西中医学院第一附属医院制剂室，批号 20050119）湿润烧伤膏(汕头经济特区美宝制药厂, 批号 20050307)。考马斯亮蓝及羟脯氨酸测试盒(南京建成生物工程研究所) 。722 分光光度计(上海分析仪器总厂) , 电热恒温水浴箱(重庆实验设备厂)。
       1.2  动物模型制备及分组 选用健康的Wistar系白色大鼠，体重200～250g，雌雄各半，(广西药品检验所实验动物中心提供，许可证号 SCXK 桂20030001，) 用10％水合氯醛（300 mg/kg）腹腔注射麻醉, 背部脱毛, 次日同法麻醉, 背部置于80 ℃ 水中烫15 s, 面积约10% 总体表面积(TBSA ), 造成深Ⅱ度烫伤模型(经病理证实)［1］。烫伤后立即腹腔注射乳酸林格氏液5ml。造模大鼠醒后分笼饲养, 自由饮水进食。动物随机分为5组，每组各30只大鼠。I组生理盐水阴性对照组，II组湿润烧伤膏阳性对照组，Ⅲ,Ⅳ，Ⅴ组十一方药酒高、中、低剂量组（100％，50％，30％浓度）。
       1.3   烫伤后6 h开始给药，动物在清醒状态下先用双氧水消毒创面，再分别将0.5 ml的不同浓度药液（中低剂量组用灭菌生理盐水分别配制）、1 g药膏、0.5 ml生理盐水均匀涂在大鼠烫伤创面上，每12 h给药1次，连续用药至创面完全愈合。
       1.4   检测指标及方法
       1.4.1   创面愈合时间和创面愈合百分率每组10只大鼠, 每日观察烫伤创面愈合情况,如有无渗出、溃破、感染, 以完全上皮覆盖作为创面愈合时间的确定依据。每组于伤后4，8，12，16 d分别采用透明硫酸纸描记创面面积，用称重法计算创面愈合百分率。创面愈合百分率(%)=(原始创面重量-未愈合创面重量)     原始创面重量×100%
       1.4.2   烫伤创面羟脯氨酸测定 分别于烫伤后4，8，12，16 d, 每组每个时间点各处死5只大鼠；取创面组织标本,按测试盒说明书测定羟脯氨酸水平。
       1.4.3   病理组织学检查 烫伤后4，8，12，16 d取创面组织标本固定于4％甲醛溶液中，常规石蜡包埋切片 , HE染色, 进行光镜组织学观察。
       1.5   统计学分析 实验所得数据均以±s表示, 用t检验比较组间差异。
       　　2  结果
       2.1   创面愈合情况放药后12 h，十一方药酒高剂量组创面淤血散开呈斑块状，其他组淤血仍呈片状。4 d内各组创面均红润。4 d后十一方药酒高剂量组创面淤血、水肿基本消失。随着给药时间的延续, 十一方药酒中、高剂量组肉芽组织生长明显，创面显著缩小。十一方药酒各剂量组及湿润烧伤膏组创面均无感染；阴性对照组部分创面后期红肿, 创面痂下积脓。8~12d, 十一方药酒各剂量组及湿润烧伤膏组痂皮大量脱落，创面渐渐与皮面平整, 基本被肉芽组织填充；而阴性对照组痂皮部分脱落，创面凹于皮面，仅见薄层肉芽。14～16 d, 十一方药酒中、高、低剂量组及湿润烧伤膏组创面基本愈合, 而阴性对照组创面愈合时间明显延迟。
       2.2   烫伤创面愈合时间比较 结果见表1。提示高、中、低剂量十一方药酒具有缩短创面愈合时间的作用;而且低剂量组与湿润烧伤膏组作用相当。
       表1  十一方药酒对深Ⅱ度烫伤大鼠创面愈合时间的影响（略）
       与阴性对照组比较，*P＜ 0.05,**P＜0.01；n=10
       2.3  烫伤创面愈合百分率的变化低、中、高剂量十一方药酒组及湿润烧伤膏组创面愈合百分率在烫伤后第4，8，12，16 天均显著高于阴性对照组,且十一方药酒低剂量组与湿润烧伤膏组作用相当。见表2。
       表2  十一方药酒对深Ⅱ度烫伤大鼠创面愈合百分率的影响（略）
       与阴性对照组比较，*P＜ 0.05，**P＜ 0.01;n=5
       2.4  烫伤创面羟脯氨酸水平的变化 十一方药酒高、中剂量组创面组织羟脯氨酸水平在伤后第8、12天均显著高于阴性对照组。结果见表3。提示十一方药酒组成纤维细胞增生, 胶原合成增加, 创面愈合加强。
       表3十一方药酒对深Ⅱ度烫伤大鼠创面组织羟脯氨酸水平的影响（略）
       与阴性对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01，n=10
       2.5  病理形态学观察伤后第4 天, 十一方药酒各剂量组及湿润烧伤膏组创面皮肤表皮凝固层部分分离, 创面有少量表皮细胞,真皮层大量炎性细胞浸润，毛细血管数量增多, 管腔较大, 成纤维细胞较多,阴性对照组表皮及真皮浅层细胞全部坏死,部分累及真皮深层，有大量的炎性细胞浸润，毛细血管数量较少, 成纤维细胞较少。伤后第8 天, 十一方药酒各剂量组及湿润烧伤膏组创面表皮坏死层开始分离,炎性细胞大量聚集坏死真皮浅层，毛细血管较多, 管腔较大, 胶原纤维较少, 而阴性对照组表皮坏死层脱落不明显,炎性细胞浸润明显,毛细血管数量较少, 胶原纤维排列密集；伤后第12天，十一方药酒各剂量组及湿润烧伤膏组表皮坏死层明显分离, 创面出现大量新生表皮细胞,炎性细胞浸润；而阴性对照组表皮坏死层脱落不明显,炎性细胞浸润明显；伤后第16天，十一方药酒各剂量组及湿润烧伤膏组创面部分已有上皮细胞覆盖，新生的表皮细胞结构完整,呈复层排列,排列杂乱(图1a)；阴性对照组部分表皮坏死层附着,炎性细胞开始减退,部分创面出现感染,创面有加深迹象,可累及真皮深层残存的附件（图1b）。
       a十一方药酒中剂量组    b阴性对照组
       图1  伤后16天创面组织病理检查结果（略）
       　　3  讨论
       3.1   十一方药酒具有活血祛淤、消肿止痛、续筋接骨、止血生肌等作用。临床上常用于跌打损伤，治疗各种外伤肿痛、骨折、腰腿痛，疗效明显。提示其有较强的抗炎和促进伤口愈合的功效。因此本实验将其试用于深Ⅱ度烫伤大鼠创面，采用了现临床常用的湿润烧伤膏为阳性对照，发现十一方药酒能促进烫伤创面的愈合，缩短愈合时间，疗效显著。
       3.2   深Ⅱ度烫伤创面修复过程中，形成的结缔组织主要是成纤维细胞及其产生的胶原蛋白, 而胶原蛋白为烫伤创面上皮化提供基质支架。因此创面愈合过程中胶原蛋白代谢的状况可反映创面愈合的情况［2］。 由于羟脯氨酸在胶原蛋白中所占比例相对恒定(大约12%～15 %)，因此羟脯氨酸含量可反映胶原含量，是创面愈合的指标之一［3］。本实验通过测定伤后各时间段实验动物创面组织的羟脯氨酸水平，反映创面修复情况。结果表明在伤后第8天和第12天, 十一方药酒中、高剂量组及湿润烧伤膏组创面羟脯氨酸水平明显高于阴性对照组。提示十一方药酒可促进烫伤创面胶原蛋白的合成, 促进创面愈合。
       3.3  十一方药酒为酒剂，渗透性良好，烫伤后及时应用，可减轻痛苦、预防及减轻水肿的发生，缩短病程。但实验中发现，十一方药酒高剂量组虽然对创面愈合的促进作用最明显，但实验中后期放药时该组大鼠表现出对药物刺激的较大反应，可能是因为高浓度酒剂对新生肉芽组织有一定的刺激性。由于十一方药酒中剂量组的治疗效果也很明显，故我们认为在临床运用时，创面愈合中后期采用50%的稀释剂型效果较好。
       　　参考文献：
       ［1］  冯世杰,花兰女,金曙雯，等. 大鼠烫伤模型的制作［J］.上海第二医科大学学报, 1995,15(3):195.
       ［2］  Lidblad WJ , Kormos AI1 Collagen : a multifunctional family ofproteins［J］.Reconstr microsurg , 1991 , 7 ：37.
       ［3］  Dimicco MA , Waters SN , Akeson WH, et al. Integrative articular cartilage repair: dependence on developmental stage and collagen metabolism［J］.Osteoarthritis and Cartilage, 2002, 10：218.
       基金项目：广西区卫生厅重点课题资助项目（No.200009）
       (广西中医学院第一附属医院，广西 南宁  530023；  广西医科大学，广西 南宁  530021；广西中医学院制药厂， 广西 南宁  530023)