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       【关键词】  复方洋参汤；,,小鼠；,,化疗；,,非特异性免疫
       摘要：目的研究复方洋参汤(CPQD)对荷瘤小鼠化疗后非特异性免疫功能的影响 。方法荷瘤小鼠腹腔注射环磷酰胺(Cy)后灌服不同剂量复方洋参汤，然后测定外周血白细胞计数及胸腺、脾脏的重量，并用t检验进行组间差异比较。结果CPQD可减轻Cy对造血系统的抑制，加速外周血白细胞的恢复。复方洋参汤在一定剂量可对抗Cy对免疫器官的减重作用，使脾脏、胸腺的重量恢复至Cy使用前的水平。 结论 CPQD可增强荷瘤小鼠化疗后非特异性免疫功能。
       关键词：复方洋参汤；  小鼠；  化疗；  非特异性免疫
       Effect of Complex Panax quinquefolium Decoction on Nonspecific Immune Response of Mice after Chemical Therapy
       SONG Jie, HAO Aizhen, WANG Fawei, JIANG Lai
       (Department of Gastroenterology and Respiration，No. 261 Hospital of PLA, Beijing 100094,China; Department of Traditional Chinese Medicine, General Hospital of PLA, Beijing 100853, China)
       Abstract：ObjectiveTo study effects of Complex Panax quinquefolium decoction (CPQD) on nonspecific immune response of mice with tumor after chemical therapy. MethodsTo feed mice with CPQD in different doses after injecting with  Cyclophusphamide (Cy), then kill and anatomize mice to count the number of white blood cells and to weigh thymus glands and spleens. Dealing with experimental data by T-test. ResultsCPQD might alleviate the inhibition of Cy on hematopoietic system and enhance the restoration of white blood cells. At certain dose, CPQD could keep the weight of the thymus gland and spleen.ConclusionCPQD can reinforce nonspecific immune response of mice with tumor.
       Key words：CPQD;  Mice;  Chemical therapy;  Nonspecific immune response
   
　　手术，放、化疗是目前医学领域对肿瘤进行治疗的基本方法，但是这些方法会引起许多副作用。大量研究表明，中药能增强机体免疫机能，改变机体的内在环境和条件，与手术、放疗、化疗配合使用，既能减轻这些治疗手段所引起的毒副反应，又能增强其治疗效果。目前单味中药实验研究较深入，但是中医治病的精髓是在辨证论治的基础上通过各种药物配伍，发挥药物间的相辅相成作用，起到对整体机能的调整作用。所以，运用现代科学手段，深入探索中医复方对人体作用的机理，对进一步充实中医药学理论，补充现代医学之不足，具有深远的意义。本文在临床观察基础上，进一步利用动物模型，初步研究经验方复方洋参汤（Complex Panax quinquefolium Decoction, CPQD）与化疗药物同用对于肿瘤机体的辅助作用，旨在为复方洋参汤广泛应用于临床提供初步的实验依据。
       　1  材料与方法
       1.1  材料昆明种雌性小鼠，30天日龄，体重为(20±2)g，军事医学科学院动物中心提供；肉瘤180（Sarcoma 180, S180），军事医学科学院毒理药理研究所提供。环磷酰胺（cyclophosphamide, Cy），上海华联制药厂出品，4℃冰箱保存。复方洋参汤，为自制的棕褐色粉末（组成为西洋参、生芪、白术、茯苓、麦冬、五味子、丹参等中药，药材购自解放军总医院中药房），按不同浓度配制成溶液，4℃冰箱保存。生理盐水，2.5%碘酒，75%乙醇等自制。遵循常规中药煎煮方法［1］，按照复方中的各药物剂量精确称量每味中药，将其置于砂锅中，第1次煎煮时每付汤剂加入10倍的凉水，浸泡1 h后放在火上煎煮，先以武火煎至沸腾，后以文火再煎30 min。煎煮结束后将药液过滤，倒入量杯中。然后进行第2次煎煮，此时加入5倍的凉水于药渣中，仍然以武火先煎至沸腾，后改为文火再煎20 min，煎煮结束后同样将药液过滤后倾出。将两次煎煮的药液混合后放入恒温水浴箱中浓缩成软膏状，再将其置于60℃恒温真空干燥箱中真空干燥至无水固体。
       1.2  方法
       1.2.1  瘤细胞悬液的制备［2］选择接种8~10 d腹水的瘤源小鼠，在无菌条件下用注射器抽取富含瘤细胞的小鼠腹水，以白细胞计数法［2］计数瘤细胞总数，然后用生理盐水调整细胞浓度为1×106/L。
       1.2.2  瘤细胞接种用带61     2针头的1 ml注射器吸取上述瘤细胞悬液，注射于小鼠右腋皮下，每只0.2 ml。
       1.2.3  实验分组及给药方法将接种瘤细胞后24 h的动物按体重随机分为5组，见表1。分组后立即给予Ⅱ~Ⅴ组小鼠腹腔注射（ip）Cy 1次；随后给予CPQD灌胃( ig)。以后接着每天ig CPQD 1次，连续10 d，给药容积均为每次0.2 ml/只。不给受试药物的动物以给受试药物的相同途径给予等量的生理盐水。
       1.2.4  外周血WBC计数将接种瘤细胞次日，给药前的各组动物，按常规行尾静脉采血，在Sysmex F-800血球细胞计数仪上（日本东亚公司），计数WBC总数，以该初始数据作为自身对照。然后在连续给药过程中，于给药后1，3，5，7，9，11  d同样行尾静脉采血，作WBC计数并进行组间差异比较。
       1.2.5  脾脏、胸腺重量的测定末次给药后24 h，将尾静脉采血后的各组小鼠断颈处死，称体重，剖腹取脾、胸腺并称重，计算脾脏、胸腺与体重的比值（脏体比值）。计算方法［3］：脏体比=脾脏(胸腺)重量［mg］     体重［10 g］
       1.2.6  脾脏、胸腺病理标本的制作末次给药后24 h，将尾静脉采血后的各组小鼠断颈处死，称体重，剖腹取脾、胸腺，置于福尔马林液中固定。固定后，脾脏选取最大横截面，胸腺选取最大矢状面，进行石蜡包埋。然后将石蜡包埋的组织块用剃须刀片切成薄片，苏木素―伊红染色。标本着色后在光学显微镜下观察并照相记录。
       1.2.7  统计方法实验数据以±s表示，t检验进行组间差异比较。
       　　2  结果
       2.1  复方洋参汤对荷瘤鼠外周血白细胞的影响结果见表2，由表中看到：荷瘤鼠腹腔注射Cy后，外周血白细胞数迅速下降，达到最低值后开始缓慢回升，在第8~9天时，白细胞数恢复到初始值。此后上升到一定程度，就保持在相对平稳状态。当Cy与CPQD同用，给荷瘤鼠口服该药1~2 g・kg-1・d-1×10 d时，无法抵抗白细胞数的迅速下降，但是可以促进荷瘤鼠外周血白细胞的恢复，缩短恢复时间。给荷瘤鼠口服该药4 g・kg-1・d-1×10 d时，外周血白细胞数下降缓慢，下降幅度较小，在接种肿瘤后第5天时所测得的白细胞数目与单纯注射Cy组比较，有显著差异（P<0.05）。在第6~7天时，外周血白细胞数恢复到初始值。由此说明，CPQD可减轻Cy对造血系统的抑制，加速外周血白细胞的恢复。
       表1  CPQD对外周血白细胞数目影响的实验分组（略）
       表2  CPQD对外周血白细胞的影响（略）
       与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与Cy组比较，●P<0.05，●●P<0.01
       2.2  复方洋参汤对免疫器官重量的影响结果见表3。
       表3  CPQD对荷瘤鼠脾脏、胸腺重量的影响（略）
       与对照组比较，*P<0.05，**P<0.01；与Cy组比较，●P<0.05，●●P<0.01
       由表3可见：Cy在抑制肿瘤的同时，可使免疫器官脾脏、胸腺的重量明显减轻，与文献报道的一致［4］。在应用Cy的同时，给予复方洋参汤口服灌胃则发现，给予小剂量、中剂量时，脾脏、胸腺重量有所增加，但与Cy组比较，统计学上差异不显著（P>0.05）。只有给予大剂量（4 g・kg-1・d-1×10 d）灌胃时，脾脏、胸腺重量明显增加，与Cy组比较有显著差异（P<0.05或P<0.01），与对照组比较，脾脏、胸腺重量均无显著差异（P>0.05）。由此说明，复方洋参汤在一定剂量可对抗Cy对免疫器官的减重作用，使脾脏、胸腺的重量恢复至Cy使用前的水平。
       2.3  复方洋参汤对免疫器官病理组织学的影响在光镜下观察，胸腺，脾脏的病理组织学改变结果如下：胸腺：肿瘤对照组小鼠的胸腺皮、髓质分界清楚，胸腺表面结缔组织被膜伸入实质，将实质分成不完全的胸腺小叶。小叶周边深染的为皮质，中央色淡的为髓质。Cy组荷瘤小鼠胸腺皮质明显变薄、色淡，皮髓质分界不清，淋巴细胞数量显著减少，密度降低，上皮样细胞增多，纤维组织增生。经Cy化疗后的荷瘤小鼠，再给予CPQD 4 g・kg-1・d-1×10 d灌胃，可见胸腺被膜轻度增厚，皮质内有丰富的淋巴细胞，密度增高，尤以淋巴母细胞为著。由浅层到深层可看到由淋巴母细胞增殖分化为小淋巴细胞的过程。给予CPQD 1~2 g・kg-1・d-1×10 d口服灌胃的经Cy化疗的荷瘤小鼠，其胸腺的内部结构则未见明显的恢复。脾脏：肿瘤对照组小鼠脾脏白髓、红髓分界清楚，淋巴小结、动脉周围淋巴鞘及边缘区清晰可见，淋巴小结可分出帽区、明区及暗区。Cy组荷瘤小鼠脾脏红、白髓分界不清，白髓明显缩小，淋巴细胞部分或全部消失或仅见少部分的动脉周围淋巴鞘及少许散在分布的淋巴细胞。几乎看不到完整的淋巴小结。荷瘤小鼠腹腔注射Cy的同时给予CPQD 4 g・kg-1・d-1口服灌胃10 d后，脾脏红、白髓分界清楚，淋巴组织明显增生，可见完整的动脉周围淋巴鞘和淋巴小结，淋巴小结的生发中心大且淋巴母细胞增生活跃，帽区明显可见。给予CPQD 1~2 g・kg-1・d-1×10 d与Cy同用，遭受破坏的脾脏恢复不明显。
       　　3  讨论
       肿瘤免疫的观点是建立在Burnet的免疫监视理论基础上的，其中心思想是一个十分完备的具有监视功能的系统，它具有精确分辨“己”和“非己”的能力。当这种免疫监视作用由于这种或那种原因被削弱时，便为肿瘤的发生创造了有利条件。肿瘤发生后，肿瘤生长的“自主性”也不是绝对的，它在一定程度上受宿主因素的影响，其中，免疫无疑占重要地位。Borden报道，具有健全免疫系统的癌症患者，以及在原发肿瘤中有淋巴细胞浸润的病人，预后良好［5］。 基于肿瘤免疫的理论，通过加强肿瘤病人的免疫反应治疗肿瘤已成为继手术、放疗、化疗之后的第四大手段用于临床。各种生物反应调节剂的应用已取得了令人瞩目的成果。实验室和临床两方面的研究表明，利用非特异性的提高机体免疫机能的药物──中药治疗肿瘤，可以使低下的免疫功能得以恢复，帮助其它根治疗法延长病人的缓解期或生存期［6,7］。放、化疗导致免疫功能低下，可表现出一定的临床症状。中医认为，这些症状的出现是放、化疗后所引起的气血损伤，脾胃失调，阴亏津耗等病理变化的临床表现。因此，健脾和胃、补气养血、滋阴生津等扶正培本法成为放、化疗后肿瘤患者的基本治疗法则。复方洋参汤即是根据长期临床实践创立的以补气健脾，养阴生津为主的扶正培本方药。放、化疗作为肿瘤治疗的重要措施，其严重的副作用之一是对于机体免疫功能的影响，免疫功能分为非特异性和特异性免疫功能，本实验主要研究对于非特异性免疫功能的影响，其主要表现在外周血白细胞总数下降和免疫器官重量减轻［8］。因此，我们应用荷瘤小鼠Cy化疗后之模型动物来观察复方洋参汤对外周血白细胞及胸腺、脾脏重量的效应。实验结果揭示，在化疗的同时口服复方洋参汤（4 g・kg-1・d-1×9 d）能部分地对抗白细胞减少，并缩短体内白细胞的恢复时间，统计学上有显著差异。胸腺、脾脏因接受化疗，重量明显减轻，服用复方洋参汤，则可阻止化疗副作用，使胸腺、脾脏重量保持在化疗前水平。所以说，复方洋参汤可保护机体的非特异性免疫功能。免疫器官受到放、化疗的影响，不仅表现在重量的减轻，体积的缩小，其内部形态结构亦同时遭到破坏［9］。本实验中可看到Cy使胸腺、脾脏明显受到抑制。胸腺皮质明显变薄，皮髓质分界不清，细胞数量减少，密度降低。脾脏红髓、白髓分界不清，淋巴细胞明显减少，几乎见不到完整的淋巴小结，仅见少部分的动脉周围淋巴鞘及少许散在分布的淋巴细胞。给予中药大剂量组小鼠的胸腺、脾脏形态结构则不同（类似正常对照组）。胸腺皮质由浅到深可看到淋巴母细胞增殖分化为小淋巴细胞的过程。脾脏则见白髓、红髓分界清楚，淋巴细胞密度增多，可见完整的边缘区及较完整的动脉周围淋巴鞘。通过以上实验，我们看到，复方洋参汤能保护机体非特异性免疫功能，能有效地抵抗化疗药物引起的副作用，这为复方洋参汤广泛地应用于临床提供了初步的实验依据，同时为进一步研究该方的作用机制作出了有益的探索。
       　　参考文献：
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       ［9］  白润江，于红娟，任  娅，等. 香菇多糖对小鼠胸腺、脾脏的免疫电镜观察［J］.中国病理生理杂志，1997, 13(1): 99.
       (中国人民解放军第261医院，北京  100094；  中国人民解放军总医院，北京  100853)