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       【关键词】  高效液相色谱；,,半边旗；,,黄酮；,,木犀草素
       摘要：目的建立草药半边旗中木犀草素含量的准确测定方法，并测定不同采收期半边旗中木犀草素的含量。 方法采用高效液相色谱法，色谱柱为Diamonsil C18，流动相为甲醇水梯度洗脱，流速0.2 ml・min1，检测波长为283 nm，柱温度35℃。结果木犀草素进样量在0.062~0.62 μg范围内线性关系良好（R2=0.998 7），平均回收率为99.5％(RSD=1.98%)。 结论 该方法操作简便，结论可靠，可用于半边旗草药的质量控制。
       关键词： 高效液相色谱；  半边旗；  黄酮；  木犀草素
       Quantitative Determination of Luteolin in Pteris semipinnata L. by HPLC
       L Ying-nian, WU Kefeng, DENG Yifeng, LIANG Nianci
       (Guangdong Medical College, Guangdong Key Lab for Research and Development of Natural Drug,  Zhanjiang 524023, China)
       Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for content determination of luteolin from PSL.MethodsThe separation was performed on a Diamonsil C18 column, the mobile phase was  run with a mixture of methanol(B) and water(A) with a linear gradient elution at a flow rate of 0.2 ml・min1, the ultraviolet wavelength was 283 nm, and the column temperature was maintained at 35℃. ResultsThe calibration curve showed good linearity in the range of 0.062~0.62 μg（R2=0.998 7）, the average recovery was 99.5%(RSD=1.98%). ConclusionThe method is simple, convenient and accurate and can be used for the quality control of PSL.
       Key words：HPLC;  Pteris Semipinnata;  Flavonoid;  Luteolin
   
　　半边旗Psteris   semipinnata L.又名半边蕨、半边莲、单边旗，系凤尾蕨科植物，是一种南方常用生药，始载于《岭南采药录》，称半边旗。有止血、生肌、解毒、消肿之功效，民间用于吐血、外伤出血、发背、疔疮、跌打损伤、目赤肿痛等［1］。现代研究表明，半边旗中含有挥发油、萜类、黄酮、皂苷等多种物质［2］。有关半边旗的药效成分研究主要集中在萜类化合物［3，4］。关于半边旗中黄酮类物质药学研究尚未见报道。本课题组曾用分光光度法测定半边旗黄酮的含量［5］，但该法主要用于植物提取物总黄酮的含量测定，不适合于对黄酮单体的分析。本文采用高效液相色谱对半边旗的黄酮单体木犀草素进行研究，建立了半边旗中木犀草素含量的测定方法，并测定不同采取收期半边旗的黄酮单体木犀草素进行研究，并测定不同采收期半边旗中木犀草素的含量，为植物半边旗的广泛开发利用奠定基础。
       　　1  仪器与试剂
       1.1  仪器岛津 LC10A高效液相色谱仪（LC10ATVP泵，SCL10AVP控制器，SPD10 AVP紫外检测器，CTO10AVP柱温箱），梅特勒 AE240型分析天平。
       1.2  木犀草素对照品购于天津尖峰天然产物研究开发公司。
       1.3  半边旗草药采收于广东湛江郊区，经成都中医药大学苟占平博士鉴定为半边旗全草。
       　　2  方法和结果
       2.1  色谱条件色谱柱Diamonsil C18 (150 mm×4.6 mm，5 μｍ)；紫外检测波长283 nm；流动相为甲醇水溶液， 0%~100％梯度洗脱；流速0.2 ml・min1；柱温为35℃。
       2.2  溶液的制备
       2.2.1  对照品溶液的配制精密称取木犀草素对照品0.00124 g，置10 ml容量瓶中，加甲醇超声溶解，定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.124 g・L1 的木犀草素对照品储备液。精密吸取储备液0.1，0.3，0. 5，0.7，1.0 ml，分别加入甲醇定容至1.0 ml，摇匀，即得含木犀草素对照品溶液。
       2.2.2  供试品溶液的配制按文献［5］的方法制备半边旗提取物，称取半边旗提取物约5 g，先后加氯仿、醋酸乙酯索氏提取至无色，蒸干醋酸乙酯提取液得半边旗黄酮，精密称取半边旗黄酮约100 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇超声使溶解，定容至刻度，摇匀。经0.45 μm微孔滤膜过滤，即得。
       2.3   系统适应性及专属性实验分别取对照品溶液、供试品溶液各5 μl进样色谱仪，记录色谱图如图1。在上述色谱条件下木犀草素出峰时间28 min，供试品在木犀草素峰相应位置有一显著峰。实验结果表明该方法能使半边旗黄酮较好分离，色谱系统的适应性及专属性良好。
       a木犀草素标准品    b半边旗黄酮供试品
       图1  色谱图（略）
       2.4  线性关系的考察分别精密量取上述对照品溶液各5 μl进样，以色谱峰面积（Y）对质量（X）进行回归，木犀草素的线性回归方程为Y=408 058X，R2=0.998   7，线性范围为0.062～0.62 μg。
       2.5  精密度实验取对照品储备液5 μl，连续进样6次，测得木犀草素峰面积RSD均为0.84%，表明仪器进样精密度良好。
       2.6  稳定性实验取供试样品溶液5 μl，分别在0，3，6，12，16 h进样，测定木犀草素的峰面积RSD为1.34%，表明样品溶液在16 h内稳定。
       2.7  重复性实验取同一批半边旗草药，按供试品制备方法配制6份，分别进样5 μl，测定木犀草素的含量RSD为1.64%，表明该方法的重现性较好。
       2.8  加样回收率实验取同一供试品5份，分别加入木犀草素对照品，按供试品溶液制备方法制备样品，进样5μl，计算得回收率分别为99.5%，RSD 1.98%。结果见表1。
       2.9  样品含量测定取不同采收期的半边旗全草，按供试品制备方法制成样品溶液，各取5 μl进样，测定峰面积，由线性方程计算得木犀草素的含量见表2，对照品及供试品色谱图见图2。
       表1  木犀草素的加样回收率实验结果（略）
       表2  半边旗草药中木犀草素含量测定（略）
       图2  木犀草素标准曲线（略）
       　　3  讨论
       黄酮类化合物是中草药中一类重要的药效成分，木犀草素是一种很具有代表性的天然黄酮［6］，属弱酸性四羟基黄酮类化合物，在植物界分布较广，从半边旗中提取分离的黄酮部位含有木犀草素。木犀草素有很强的抗氧化活性，有关药理及临床实验的结果还表明木犀草素在体内具有抗菌、抗病毒及降低血脂和胆固醇的作用［7，8］。采用HPLC法测定半边旗中木犀草素的含量，方法稳定，快速，重现性好，杂质干扰小，适合半边旗中木犀草素的含量测定。从含量测定结果看出，半边旗中木犀草素含量不高，在不同采收期，半边旗中木犀草素含量有较大差别，8、9月份采收的半边旗中木犀草素含量最高，实验结果可为半边旗适当的采收季节资源利用提供指导，为相关制剂的质量研究提供实验依据。
       　　参考文献：
       ［1］  谢宗万，余有芩. 全国中草药名鉴（上册）［M］.北京：人民卫生出版社，1996：53.
       ［2］  Maurakami T, Tanaka N. Occurrence, structure and taxonomic applications of ferm constituents［J］. Prog Chem Organic Nat Prod, 1988:54.
       ［3］  张  晓,崔  燎，梁念慈,等. 半边旗有效成分抗肿瘤活性研究［J］.中国药学杂志，1997，32（1）：37.
       ［4］  Li JH, Cui L. Effects of antitum or compounds is isolated from Pteris semipinnata L on DNA topoisomerases and cell cycle of HL-60 cells［J］.Acta Phamacol Sin, 1999,20(6)：541.
       ［5］  傅玉萍，苟占平，胡菊英,等.分光光度法测定不同时期半边旗总黄酮含量［J］.时珍国医国药，2001，12（12）：1080.
       ［6］  姚新生.天然药物化学（第3版）［M］.北京:人民卫生出版社,2001：89.
       ［7］  汪丽燕,韩传环,王  萍.木犀草素对冠脉血流动力的实验研究［J］.中国药理学报,1992,8(5):388.
       ［8］  何丽娜,何素冰,杨  军.木犀草素体外抗柯萨奇B3病毒的作用［J］.中国现代应用医学杂志,2000,17(5)：362.
       (广东医学院・广东天然药物研究与开发重点实验室, 广东 湛江  524023)