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       【关键词】  人参；,,人参皂苷,Rg1；,,人参皂苷,Re；,,高效液相色谱法
       摘要：目的建立传统中药材人参的高效液相色谱分析方法。方法采用高效液相色谱法对人参中的人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Re进行含量测定； 色谱柱：Kromasil  C18 (4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：乙腈-水系统线性梯度洗脱；柱温：35℃；流速：1.0 ml/min；检测波长：203 nm。结果该方法人参皂苷 Rg1与人参皂苷 Re的线性范围分别为12.35~0.38 μg，12.46~0.38 μg，平均回收率为98.7%(RSD=1.59%)。结论该方法简单可行，结果准确，重复性好，可作为该药材质量的控制方法。
       关键词：人参；  人参皂苷 Rg1；  人参皂苷 Re；  高效液相色谱法
       人参药材系五加科植物人参 Panax ginseng C. A. Mey.的干燥根，是传统的名贵中药，具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能［1］；现代药理研究表明，人参具有多种药理活性。医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分之一,它是人参根的主要生理活性物质［2］，人参皂苷基本上能代表人参主要药效指标［3］。目前，人参药材市场较为混乱，虽然2000年版《中国药典》制定了人参药材含量测定的方法，但该方法重现性差，不能准确作为人参药材的质量控制方法。本文以人参中人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Re的总含量为指标，建立了较为准确的含量测定方法。
       　　1  仪器和试剂
       Agilent 1100高效液相色谱仪，QuatPump泵，VWD紫外-可见检测器，Agilent 全自动进样器，Agilent色谱工作站。乙腈为色谱纯（Canada CALEDON LABORATORILES LTD.），水为重蒸馏水，其余试剂均为分析纯。人参皂苷 Rg1对照品和人参皂苷 Re对照品均由中国药品生物制品检定所提供（含量测定用，批号0703-200221，0754-200217）。
       　　2  方法和结果
       2.1   色谱条件  色谱柱：淮阴汉邦科技公司，反相C18柱 ［Kromasil C18 (4.6 mm×250mm，5 μm)］；流动相：先以A溶剂系统［乙腈-水(19：81)］为流动相，保持10 min，再在随后的35 min内(10～45 min)，流动相由 A溶剂系统逐渐改变至 A溶剂系统-B溶剂［乙腈］（96.3：3.7），线性梯度洗脱（见表1）；检测波长：据人参皂苷 Rg1和人参皂苷 Re峰的紫外光谱，其最大吸收波长为203 nm，故将其测定波长确定在203 nm；柱温：35℃；理论板数按人参皂苷 Re峰计算应不低于3 000。
       表1  线性梯度洗脱结果（略）
       2.2   对照品溶液的制备  精密称取于60℃干燥至恒重的人参皂苷 Rg1、人参皂苷 Re对照品适量，用流动相 A分别制成每毫升含人参皂苷 Rg10.175 mg、人参皂苷 Re0.162 mg的溶液，即得。
       2.3   供试品溶液的制备  取本品粉末（过4号筛）约1 g，精密称定，置索式提取器中，加氯仿40 ml，加热回流3 h，弃去氯仿液，药渣挥去氯仿，连同滤纸筒移入具塞锥形瓶中，精密加入水饱和的正丁醇50 ml，密塞，放置过夜，超声处理（功率250 W，频率50 kHz）30 min，滤过，精密量取续滤液25 ml，置蒸发皿中蒸干，残渣甲醇溶解并转移至5 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，取样，离心（转速10 000 r/min）10 min，取上清液，即得。
       2.4   标准曲线的制备  精密称取于60℃干燥至恒重的人参皂苷 Rg1对照品12.35 mg，置于10 ml容量瓶中，加流动相A稀释至刻度,制成人参皂苷 Rg1标准贮备液（1 235 μg/ml）。采用逐级稀释法再分别配成617.5 ，308.75 ，154.375，77.187 5，38.593 8 μg/ml的系列对照品液，分别吸取上述溶液10 μl，注入液相色谱仪，测定，以峰面积为纵坐标（Y），对照品浓度（μg/ml）为横坐标（X），绘制标准曲线，得回归方程：Y=2.337 9 X-1.501 (r=0.999 8)，结果表明：人参皂苷 Rg1浓度在12.35～0.38 μg之间呈良好的线性关系；同法得人参皂苷 Re回归方程：Y=2.752 4X+7.963 2 (r=0.999 9)，人参皂苷 Re浓度在12.46～0.38 μg之间呈良好的线性关系。
       2.5  精密度实验  分别精密吸取两对照品溶液10 μl，各重复进样6次，测得峰面积，其RSD分别为0.97%，0.80%。表明仪器精密度良好。
       2.6  重现性实验  精密称取同一批人参药材样品6份，按供试液的制备方法平行操作，取10 μl进样，测定两皂苷总峰面积，RSD为1.45%，表明本法重现性良好。
       2.7  稳定性实验  取供试品溶液，在0，2，4，6，8，10 h测定总峰面积，RSD为1.51%，表明供试品溶液在10 h内稳定。
       2.8  加样回收率实验  精密称取已知含量（含人参皂苷Rg1 0.20%、人参皂苷Re 0.28%）的人参药材细粉0.5 g，平行6份，2份一组，每组分别精密添加人参皂苷 Rg1对照品液（0.841 mg/ml）1.0 ，1.2 ，1.4 ml，人参皂苷 Re对照品液（0.742 mg/ml）1.5 ，1.9 ，2.3 ml，按2.3项下方法制备供试品溶液,测得回收率为98.7%，RSD为1.59%。
       2.9  样品测定精密称取3批人参药材细粉各1.0g，按2.3项下方法制备供试品溶液。各取10 μl，进样，测定3批人参药材的含量分别为0.49%，0.53%，0.52%，平均含量0.51%。
       　　3  讨论 
       据文献［4］，流动相采用乙腈-水系统恒度洗脱，但人参皂苷Rg1峰与人参皂苷Re峰不能达到基线分离，因而参考文献［5］，尝试线性梯度洗脱方法：先以A［乙腈］-B［水］（19:81）为流动相，保持10 min，再在随后的35 min内(10～45 min)，流动相逐渐改变至A［乙腈］-B［水］（22∶78），人参皂苷 Rg1峰与人参皂苷 Re峰可基本达到分离，但基线不稳，呈锯齿状，说明乙腈与水混合时产生了气泡，故通过折算，将 A改为乙腈-水（19∶81），B改为乙腈，梯度洗脱。见图1~2。
       图1  标准品色谱图（略）                 
       图2  人参药材样品色谱图（略）
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：6.
       ［2］  李泰平.人参皂苷药理活性的研究进展［J］.生物学教学  2003，4（28）：1.
       ［3］  窦德强，靳  玲，陈英杰．人参的化学成分及药理活性的研究进展与展望［J］.沈阳药科大学学报  1999，2（16）：154.
       ［4］  华  彬，陆兔林．复方心脑舒中颗粒中人参皂苷 Rg1的含量测定［J］.时珍国医国药  2003，14(8) ：469.
       ［5］  陈  波，潘振球，赖天宾．人参类保健食品中人参皂苷的高效液相色谱分析［J］.中华预防医学杂志  1996，5(30) ：307.
       (南京晓庄学院， 江苏 南京  210017)