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       【关键词】  西洋参果肉；,,定性鉴别；,,高效液相色谱；,,人参皂苷
       摘要：目的开发西洋参果新药材，充分利用西洋参新的药用部位。方法利用西洋参果肉的显微特征及其理化性质，采用显微鉴定和薄层色谱法等进行鉴别，用高效液相色谱(HPLC)法对其含量进行测定。结果显微鉴定结合薄层色谱法对西洋参果肉鉴别专属性好，且简便、可行，HPLC法进行含量测定达到了质量控制要求。结论 西洋参果肉可以开发成为新药材，成为西洋参的药用部位之一。
       关键词：西洋参果肉；  定性鉴别；  高效液相色谱；  人参皂苷
       Studies on the Fructus Panax Quinquefolii. for Medicinal Use
       ZHAO Chunfang, LIU Jinping, LI Pingya*
       (College of Pharmaceutical Sciences, Jilin University, Changchun, Jilin 130021, China; Institute of Froniter Medical Science of Jilin University, Changchun, Jilin 130021, China)
       Abstract：ObjectiveTo develop and utilize the fruit of Panax quinquefolium L. as its new medicinal part.MethodsFructus Panacis Quinquefolii. were identified with its micro-character and physical chemical properties by microscope and TLC. The content of ginsenoside Re was determined by HPLC.ResultsThe Fructus Panacis Quinquefol could be identified by micro-character combining TLC. This method is simple, accurate and specific. HPLC could be used for quality control of Fructus Panacis Quinquefolii.ConclusionFructus Panacis Quinquefolii can be developed as a new medicinal material and become one of the new medicinal part of Panax quinquefolium L..
       Key words：Fructus Panacis Quinquefolii.;  Qualitative identification;  HPLC;  Ginsenoside
   
　　西洋参 Panax quinquefolium L.原产于北美洲的美国、加拿大。自20世纪70年代在我国吉林、北京、陕西等地大面积引种成功。现已在东北、华北、西北以及低纬度高海拔地区大面积商业化栽培。由于西洋参具有广泛的生理活性和独特的药理作用，深受世人的青睐［1~8］。本课题组自1994年开始对西洋参果的化学成分其活性进行了系统的研究，特别是对其单体人参皂苷成分的研究。研究结果表明：西洋参果含有众多人参皂苷成分，同时具有挥发油、多糖、蛋白质、氨基酸、果胶等成分，与西洋参根的化学成分相近［9～13］。为充分开发利用西洋参资源，本课题组对西洋参果药材进行了研究。
       　　1   仪器与试药
       生物显微镜 X522G，365 nm紫外灯，岛津 LC10AT高效液相色谱仪；classLC10色谱工作站；UV-330可见紫外分光光度计乙腈、甲醇为色谱纯，其它均为分析纯；人参皂苷-Re对照品购自中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为07549911。新鲜的西洋参果采自吉林省靖宇县西洋参集团第一参场。
       2  方法与结果
       2.1  来源本品为五加科植物西洋参 Panax quinquefolium L.的果肉,夏末秋初采集成熟果实，除去果核，收集果皮、肉、汁为西洋参果肉，及时干燥而得。
       2.1.1  药材性状  本品呈囊状，不规则的片状或皱缩的团块，直径0.3～0.6 cm。表面紫红色至紫黑色，皱缩。有的可见环形的花盘宿存，花盘内可见花柱，柱头呈叉状分裂。质柔软或硬脆。气微，味微甜而后微苦辛。
       2.1.2  显微特征  本品粉末棕褐色。果皮表皮细胞表面呈多角形，有的呈淡红色，直径30～60 μm，可见气孔，气孔不定式；断面观呈长方形。果肉薄壁细胞多为类圆形或长方形。导管幼嫩，环纹、螺纹、网纹，以环纹看多，直径10～20 μm；导管旁有长方形细胞，壁薄。柱头表皮细胞外壁突起呈剑状或略呈乳头状、绒毛状，壁薄。见图1。
       1.果皮表皮细胞    a表面观    b断面观　2.导管    3.柱头表皮细胞    4.果肉薄壁细胞
             
　　图1   西洋参果肉显微特征（略）
       2.1.3  理化鉴别Liebermann-Burchard 反应：取本品粉末1 g，加95%乙醇20 ml回流提取，过滤，取续滤液2 ml于试管中，蒸干，加冰醋酸0.5 ml溶解，沿试管壁加浓硫酸1 ml，两液界面呈现紫红色环。薄层色谱法鉴别：精密称取药材约2.0 g，加甲醇40 ml水浴回流提取0.5 h，滤过，提取3次，滤液合并，回收甲醇至干，加水饱和的正丁醇50 ml溶解，滤过，以氨试液5 ml萃取3次；合并水层，以水饱和的正丁醇10 ml萃取两次；合并前后两次的正丁醇层，用正丁醇饱和水洗涤两次，10 ml/次，分取正丁醇溶液，回收至干，加甲醇10 ml溶解，作为供试品溶液。分别取拟人参皂苷F11、人参皂苷Re对照品，加甲醇制成每毫升各含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法［14］实验，分别吸取供试液和上述两种对照品溶液各2 μl，分别点于同一硅胶薄层板上，用氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水（15∶22∶40∶10）5～10℃放置12 h的下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，置日光下检视。供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上，分别显示相同颜色的斑点。见图2 。
       aPF11    b样品    cRe    d阴性
       图2   西洋参果肉TLC图谱（略）
       2.2  含量测定  西洋参果肉中，人参皂苷是其主要有效成分。本含量测定采用人参皂苷-Re为高效液相色谱法测定的对照品［14］。
       2.2.1  色谱条件与系统适用性实验  用十八烷基键合硅胶为填充剂；乙腈0.05%磷酸（100∶400）为流动相，流速1.0 ml/min，检测波长为203 nm，柱温40℃。理论板数按人参皂苷Re峰计算应不低于3 000。
       2.2.2   对照品溶液的制备  精密称取人参皂苷Re对照品13.0 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升含人参皂苷Re0.26 mg）。
       2.2.3  供试品溶液的制备  取本品约2.0 g，精密称定，加甲醇水浴回流提取3次，40 ml/次，提取1.5 h，滤过，滤液合并，回收甲醇至干，残渣加水饱和的正丁醇50 ml溶解，滤过，正丁醇提取液加氨试液振摇提取2次，5 ml/次；合并水液，以水饱和的正丁醇振摇提取2次，10 ml/次；合并前后2次的正丁醇溶液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，10 ml/次，正丁醇溶液回收溶剂至干，残渣加甲醇溶解，置50 ml量瓶中，并加甲醇至刻度，摇匀，即得。
       2.2.4   测定波长的选择  经 UV330可见紫外分光光度计扫描，人参皂苷Re甲醇溶液在203.2 nm波长处有最大吸收，故选择测定波长为203 nm。
       2.2.5   阴性对照溶液的测定  按制备工艺制备不含西洋参果肉的阴性样品，并照含量测定项下方法制备阴性测试溶液，依法测定。结果表明，在人参皂苷Re的峰位处，阴性对照溶液无干扰。供试品中其它组分对人参皂苷Re的测定也无干扰。
       2.2.6  线性关系考察  精密量取人参皂苷Re对照品溶液（0.26 mg/ml）2，4，6，8，10，12，14 μl进样，以对照品峰面积为纵坐标，对照品的量为横坐标绘图，得一直线，回归方程为 Y=767 791.6 X+8 238.7，r=0.999 92。结果表明，人参皂苷-Re在0.52～3.64 μg范围内呈良好的线性关系。
       2.2.7  稳定性实验  取同一浓度的供试品溶液，于0，2，4，6，8 h分别进样测定，人参皂苷Re的面积平均为473 400，RSD =0.97%(n=5)结果表明，吸收峰面积在8 h内基本稳定。
       2.2.8  精密度实验 精密吸取对照品溶液（0.2532 mg/ml）8 μl，重复进样5次，10μl/次，测定峰面积,峰面积平均值为450 337,RSD =0.83%(n=5) 。结果表明,仪器精密度良好。
       2.2.9  重现性实验   同一批样品供试品5 份,照供试品溶液的制备方法处理并测定,结果人参皂苷Re平均含量为0.652 g/100 g ,RSD=1.28%(n=5)。表明该方法重复性良好。
       2.2.10  回收率实验   精密称取已知含量的供试品（0.652 g/100 g），精密加入人参皂苷-Re12.5 mg，按供试品溶液制备方法制备，依含量测定方法测定，计算回收率。结果人参皂苷Re胆红素平均加样回收率为99.0%，RSD=1.49%（n=5）。表明该测定方法可靠性强。
       2.2.11  样品测定结果按含量测定项下测定样品中人参皂苷-Re的含量，测定3批样品中人参皂苷Re的含量。3批样品人参皂苷Re的含量接近，平均含量为0.66%。根据以上3批供试品含量测定结果,考虑到药材质量差异和生产实际。暂定本品含人参皂苷Re（C48H82O18）不得少于0.60%。
       　　3  讨论  
       西洋参果为珍贵药材西洋参的果实，富含多种人参皂苷，总皂苷含量明显高于西洋参根，同时具有挥发油、多糖、蛋白质、氨基酸、果胶等成分。无论从充分利用西洋参资源，还是为提高经济效益，西洋参果的开发具有十分重要的意义。因为西洋参种子十分珍贵，经多年栽培并不发生异化、退化等，所以在利用西洋参果作为药材资源时，种子（果核）应单独分离出来，以满足扩大西洋参种植的需求。在除籽时一般采用立式脱粒机较好，既可以不使种子破坏，又不需加水就能达到种子与果皮、肉、汁等分离的目的；克服了以往采用手搓除籽、加水量大、易霉变、难干燥、易污染又不适合工业生产等缺点。尹笠签等［15］报道了用人参皂苷Rb3和拟人参皂苷-F11两个特异性斑点鉴别西洋参果和人参果总皂苷，方法简便可靠。本实验考虑人参皂苷Re是最易得到的人参对照品，拟人参皂苷F11是西洋参的特征性人参皂苷，故选用二者为对照品进行薄层鉴别；同时，采用显微鉴别确保西洋参果药材的真实性。西洋参果肉中，人参皂苷是其主要有效成分。本含量测定方法采用人参皂苷Re为对照品，利用高效液相色谱仪，建立了一种灵敏、可靠、专属性强的含量测定方法，可有效控制该药材的质量。
       　　参考文献：
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       ［11］  王丽君，李平亚，赵春芳,等.西洋参果化学成分的研究［J］.中草药，2000，31（10）：723.
       ［12］  郝秀华，李平亚，李  铣，等.西洋参果皂苷成分的研究［J］.中草药，2000，31（11）：801.
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       ［14］  国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部，［S］.北京:化学工业出版社,2000:附录36.
       ［15］  尹笠签，刘  艳，君尚军,等.西洋参果总皂苷与人参果总皂苷的定性鉴别［J］.中成药，1994，16（9）：40.
       (吉林大学药学院，吉林 长春  130021； 吉林大学再生医学科学研究所，吉林 长春  130021)