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       【关键词】  超声波提取；,,肾蕨；,,总黄酮；,,鉴别
       摘要：目的为充分利用肾蕨植物资源，避免资源的浪费，探讨肾蕨植物总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从肾蕨植物中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用紫外分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量为0.403 9 mg/ml，回收率为102.6%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取肾蕨植物黄酮类物质的有效途径。
       关键词：超声波提取；  肾蕨；  总黄酮；  鉴别
       The Total Flavanone of Nephrolepis cordifolia（L.） Presl Extraction and the Identification by Ultrasonic Wave
       HUANG Suoyi， LUO Jianhua， MENG Chunyue， LI Rong
       （Department of Chemistry, Youjiang Medical College for Nationalities，Baise, Guangxi 533000，China）
       Abstract：Objective To investigate the extraction and distinguishing method of total flavanone of Nephrolepis cordifolia（L.） Presl. MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from Nephrolepis cordifolia（L.） presl with ultrasonic wave and ethanol extraction.The flavanone of Nephrolepis cordifolia（L.） Presl was checked and determined by spectrophotometry.ResultsThe content of the total flavanone of nephrolepis cordifolia（L.） Presl obtained by this method was C=0.4039 mg/ml and the rate of  recovery was 102.6%. ConclusionThis text provides the extraction and purifying methods to get the outcome and the purity of the flavanone.This method is a purely physical process and has no pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of Nephrolepis cordifolia（L.） Presl.
       Key words：Ultrasonic wave extraction；  Nephrolepis cordifolia（L.） Presl；  Total flavanone；  Identification
   
　　蕨类植物是具有椎管束的孢子植物，全世界现有蕨类植物约12 000种。分布于热带、亚热带为多。喜生长于温暖阴湿的森林地带，我国约有2 600种。其中可供药用的约300余种，药用蕨类植物因其分布广泛、资源丰富，历年来为民间所习用。为扩大药源，近年来对其研究逐渐重视起来。药用蕨类植物的化学成分较复杂，其中具有生物活性的成分主要有酚类化合物、黄酮类成分、生物碱类、甾体、三萜类化台物、鞣质、氨基酸及脂肪酸等［1］。肾蕨,又名石黄皮、犸骝卵、圆羊齿，多年生草本,高30~60 cm。地生或附生于溪边下、石缝中或树干上。主产于我国西南及福建、台湾、广东、广西、浙江、湖南。其药用部位为骨碎补科植物肾蕨(Nephrolepis cordifolia(L.)Presl.)的块茎或全草。性味功效为：甘、涩、凉。清肺止咳，止血，清热利湿。用全草煎服可治湿热黄疸；地茎加糖浓煎冲酒服，可治疗疝气；配杉树尖、夏枯草、野萝卜菜煎服，可治淋浊、小便点滴、疼痛难忍［2］。还具有很好的抗菌、抗微生物、抗肿瘤等作用［3］。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道［4，5］，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响［5］。但超声技术应用于提取蕨类植物中黄酮类物质的研究尚未见报道，本文报道用超声波提取肾蕨植物总黄酮及鉴别。
       　　1  仪器与试剂
       1.1  仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZFI型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHBIII循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。
       1.2  试剂95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；正丁醇AR;氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；镁粉AR;乙酸镁AR;冰醋酸AR；乙酸乙酯AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜肾蕨植物采自广西金秀县。
       　　2  方法与结果
       2.1  总黄酮成分提取取新鲜肾蕨植物，烘干，粉碎。称取肾蕨植物粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩25 ml为止，放置250 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。
       2.2  测定方法依据 以芦丁为对照品测定肾蕨植物中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
       2.3  定量实验总黄酮的含量测定
       2.3.1   波长的选择取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420~700 nm波长范围测定络合物的吸光度，络合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
       2.3.2  标准曲线的绘制分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白，于510 nm处测吸光度。吸光度测定结果见表1。根据表1得回归方程：A= -0.031 1+13.518 4C，r=0.999 9。
       2.3.3  提取物含量的测定  精密吸取样品液0.5 ml，置10.00 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定吸光度A=2.699，根据回归方程：A= -0.031 1+13.518 4C，计算样品中总黄酮的含量C=0.403 9 mg/ml。
       表1  紫外可见分光光度计测定（略）        
       2.3.4  回收实验 精密量取样品液2.00 ml，加入标准芦丁对照品2.00 ml（0.10 mg/ml），同前样品测定的操作方法测定吸光度，求出回收率为102.6%。
       2.4  定性实验-总黄酮的鉴别
       2.4.1  颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0.5 min，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加１％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。盐酸镁粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。
       2.4.2  纸层析取样品溶液10 μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。
       　　3  讨论
       3.1  实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为102.6%，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。
       3.2  黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等［6］。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管预防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其它脏器细胞的功能。 黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［7~12］。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目。当前，天然产物有效成分的研究与开发方兴未艾，从中提取分离的有效成分应用于医药、保健食品、食品添加剂以及化妆品等行业，深受消费者青睐，因而具有广阔的发展前景。本文实验结果表明，肾蕨植物中含有较为丰富的黄酮。因此，肾蕨植物具有广泛开发和利用价值，值得综合利用，加强资源开发。
       　　参考文献：
       ［1］  徐冬英.药用蕨类植物的研究进展［J］.中医药信息，1997，（4）：20.
       ［2］  谭树辉，潘超美.中草药野外识别手册(一)［M］.广州：广东科技出版社，2004：30.
       ［3］  赵  莉，杨文钰.蕨类植物的活性成分研究进展［J］.中药材，2004，27(6):452.
       ［4］  刘祥义.超声波提取元宝枫叶总黄酮方法研究［J］.云南化工，2003，30（1）：27.
       ［5］  谢明杰，宋   明，邹翠霞，等. 超声波提取大豆异黄酮［J］.大豆科学，2004，23(1):75.
       ［6］  夏杏洲，张  辉，魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究［J］.食品研究与开发，2002，23(5):35.
       ［7］  华光军，郭  勇.黄酮类化合物药理研究进展［J］.广东药学，1999，9（4）：9.
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       ［10］  曹纬国，刘志勤，邵  云，等. 黄酮类化合物药理作用研究进展［J］.西北植物学报，2003，23（12）：2241.
       ［11］  姜国芳，谢宗波，乐长高.银杏叶黄酮类化合物的研究进展［J］. 时珍国医国药，2004，15(5):306.
       ［12］  黄锁义，黎海妮，余美料，等.益母草总黄酮的提取及鉴别［J］.时珍国医国药，2005，16(5):398.
       (右江民族医学院，广西 百色  533000)