文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【关键词】  绞股蓝50%总皂苷提取物；,,芦丁；,,槲皮素；,,反相高效液相色谱法,
       摘要：目的建立绞股蓝50%总皂苷提取物中芦丁与槲皮素的含量测定方法。方法采用高效液相色谱仪，使用TURNER KromasilTMC18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流动相为0.4%磷酸水溶液甲醇乙腈进行梯度洗脱，流速为0.5 ml・min-1，检测波长为360 nm；柱温为40℃。结果芦丁在0.37~3.70 μg范围内有良好的线性关系，r=0.999 9。槲皮素在0.05~0.50 μg范围内有良好的线性关系，r= 0.999 9；芦丁的平均加样回收率为99.2%，RSD为1.69%；槲皮素的平均加样回收率为99.1%，RSD为2.21%。结论该方法简便快捷，准确度高。
       关键词：绞股蓝50%总皂苷提取物；  芦丁；  槲皮素；  反相高效液相色谱法
       Determination of Rutin and Quercetin in 50% Total Gypenoside Extraction of Gynostemma by RPHPLC
       LU Jinqing, YU Fan, TIAN Yiaoping, XIAO Bo, CHEN Li, XU Xuting, ZHAN Xiaolian
       (Hubei College of Traditional Chinese Medicine,Wuhan 430061,China)
       Abstract：ObjectiveTo determine the main flavonoids rutin and quercetin in 50% total saponins of Gynostemma by RPHPLC. MethodsThe separation was performed on TURNER KromasilTMC18 column（250 mm×4.6 mm，5 μm），the mobile phase consisted of 0.4% phosphoric acid- methanol-acetonitrile，with the following rate of 0.5 ml・min-1at 40℃，the wavelength for measurement was 360 nm.ResultsThe calibration curves were linear in the range of 0.37~3.70 μg for rutin (r=0.999 9)and in the range of 0.05~0.50 μg for quercetin (r=0.999 9).The average recovery of compound rutin was 99.2%(RSD=1.69%),and that of compound quercetin was 99.1% (RSD=2.21%).ConclusionThis method is accurate and reproducible.
       Key words：50% Total saponins of Gynostemma;  Rutin;   Quercetin;   RPHPLC
   
　　绞股蓝(Gynostemma)又名七叶胆，是葫芦科绞股蓝属植物。该属植物我国有14种和3变种［1］。现代药理学证明，绞股蓝具有抑制肿瘤、防止衰老、降低血脂、增强免疫力、镇静止痛、保护心脏和肝脏等作用［2］。绞股蓝50%总皂苷提取物是总皂苷含量达50%的、一种适用于口服制剂生产的原料药，它具有很广的应用范围，故本文采用反相高效液相色谱法，可对绞股蓝50%总皂苷提取物中的芦丁、槲皮素等成分进行有效的分离和准确的含量测定，并且操作简便、快速、灵敏度高、重现性好，能为建立绞股蓝50%总皂苷提取物的质量标准提供依据。
       1  仪器与试药
       DIONEXP680高效液相色谱仪（四元泵、Chromeleon色谱工作站、UVD170U检测器），AT201电子分析天平（d=0.01 mg，瑞士），芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号0080－9705）、槲皮素对照品（中国药品生物制品检定所，批号081－9003）；甲醇（色谱纯，天津大茂化学仪器供应站）、乙腈（色谱纯，天津大茂化学仪器供应站），其它试剂均为分析纯，水为双蒸水。绞股蓝原50%总皂苷提取物由湖北中医学院中药制剂教研室提供。
       　　2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱为TURNER KromasilTM（4.6 mm×250 mm，5 μm）；以0.4%磷酸水溶液为流动相A，以甲醇为流动相B，以乙腈为流动相C；按表1进行梯度洗脱，检测波长为360 nm；流速为0.5 ml・min-1，柱温为40℃。理论板数按芦丁、槲皮素峰计算应不低于3 000。色谱图见图1~4。
       表1  梯度洗脱（略）
       图1   芦丁对照品HPLC图谱（略）
       图2  槲皮素对照品HPLC图谱（略）
       图3  绞股蓝50%总皂苷提取物供试品的HPLC图谱（略）
       图4   空白溶剂图谱（略）
       2.2  供试品溶液的制备   取本品0.2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，精密量取20 ml，蒸干，残渣用甲醇溶解并转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
       2.3   对照品溶液的制备精密称取芦丁对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.368 mg的溶液，即得芦丁对照品溶液；精密称取槲皮素对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.054 8 mg的溶液，即得槲皮素对照品溶液。
       2.4   标准曲线的制备分别精密吸取芦丁、槲皮素对照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积值，结果见表1，以进样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得芦丁的回归方程为：y = 61.194 5x + 1.100  4，r=0.999 9；槲皮素的回归方程为：y = 129.036 0X－0.833 4，r=0.999 9。线性范围：芦丁为0.37~3.70 μg；槲皮素为0.05~0.50 μg。
       图5   芦丁标准曲线（略）
       图6   槲皮素标准曲线（略）
       2.5   精密度实验  取2.3项下芦丁和槲皮素对照品溶液各5 μl，分别连续进样5次，测定峰面积，结果见表2～3。芦丁和槲皮素的RSD分别为：0.08%和0.26%。
       表2   芦丁精密度实验结果（略）
       表3  槲皮素精密度实验结果（略）
       2.6   稳定性实验  取2.2项下样品溶液室温放置0，3，6，9，12，24 h后测定，结果见表4~5，测得芦丁和槲皮素峰面积基本不变，RSD分别为1.77%，2.80%，表明样品溶液在24h之内稳定。
       表4   芦丁稳定性实验结果（略）
       表5   槲皮素稳定性实验结果（略）
       2.7   重复性实验 取同一批样品5份，照2.2项下的方法依法制备，测定样品中芦丁和槲皮素的含量，结果见表6~7。测得芦丁和槲皮素含量的分别为0.955%和0.222%，RSD分别为1.29%和1.71%。
       2.8  加样回收实验  取已知含量的本品粉末6份，每份0.1 g，精密称定，分别加入一定量的芦丁、槲皮素对照品，按2.2项下的方法依法制备，按上述色谱条件进行测定，结果见表8~9。芦丁加样回收率为99.6%，RSD为1.07%，槲皮素加样回收率为99.1%，RSD为2.21%。
       2.9   样品测定 按2.2项下方法配制样品溶液5份，依法测定，结果见表10。
       表6   芦丁重复性实验结果（略）
       表7   槲皮素重复性实验结果（略）
       表8   芦丁加样回收实验结果（略）
       表9   槲皮素加样回收试验结果（略）
       表10   5批绞股蓝药材中芦丁、槲皮素含量测定结果（略）
       　　3  讨论
       3.1   提取方法的选择  在绞股蓝原药材芦丁、槲皮素的含量测定中，我们曾对不同极性的提取溶剂（如：不同浓度的甲醇、不同浓度的乙醇）和不同的提取方式（如：超声、回流等）进行过考察，并对提取时间进行了单因素实验，综合考虑以石油醚回流提取，除去脂溶性较大的成分，再以甲醇回流提取3 h实际工资效果最好。
       3.2  检测波长的选择 在检测波长选择中根据对芦丁对照品、槲皮素对照品溶液紫外光谱的测定，在360 nm处有最大吸收，最终选择测定波长为360 nm。
       3.3   流动相的选择流动相的选择曾使用过乙腈-水、乙腈-甲醇-水、甲醇-水、乙腈-0.4%磷酸等流动相进行等度及梯度洗脱，由于干扰峰难以分离，最后根据分离情况选择了表1中的流动相。绞股蓝50%总皂苷提取物色谱图中除芦丁、槲皮素的色谱峰外还有其他的色谱峰，分离度也较好，亦可以作为指纹图谱用于绞股蓝50%总皂苷提取物的鉴别。经方法学验证，此方法能对绞股蓝50%总皂苷提取物中的芦丁、槲皮素进行有效的分离和准确的含量测定，并且操作简便、快速、灵敏度高、重现性好，为建立适用于口服制剂的绞股蓝50%总皂苷提取物的质量标准提供了科学的依据。
       　　参考文献：
       ［1］  丁树利,朱兆仪,李  勇.绞股蓝及同属植物的生药学研究［J］.中国药学杂志,1994,29(2)：79.
       ［2］  杨  静.绞股蓝化学成分研究［J］.陕西中医，2000,21 (8)：377.
       基金项目：国家科技部“十五”国家重大科技专项（No.2001BA701A3617 )
       
　　　　　　　武汉市科学技术局技术创新与产业化重大专项攻关中标项目（No.2002600513408)
       （湖北中医学院，湖北 武汉  430061）