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       【关键词】  毛老虎；,,分光光度法；,,香草醛
       摘要：目的建立香草醛-冰醋酸体系分光光度法测定毛老虎中总三萜酸的方法。方法利用在高氯酸的条件下香草醛-冰醋酸与三萜酸的反应测定总三萜酸。结果总三萜酸在2.53～13.14 μg/ml呈良好的线性关系，测定样品回收率为99.07%。结论 该法简便、快速、灵敏。
       关键词：毛老虎；  分光光度法；  香草醛
       Determination of Total Content of Triterpenoids in Stems of Hyptis suaveolens (L.) Piot by Spectrophotometry
       HUANG Xiuxiang, YUAN Xia, LIU Cuiwu*, CHEN Lifen
       (School of Chemistry and Chemical Engineering,  Guangxi University,Nanning 530004,China;Department of Chemistry and Life Sciences, Hechi College, Yizhou 546300,China)
       Abstract：ObjectiveTo develop the determination method of total triterpenoids in vanillinglacial acetic acid system by spectrophotometry.MethodsVanillin was used as colour developing reagent in the presence of perchloric acid.ResultsThe calibration curve of total triterpenoids had good linear relationship in the range of 2.53～13.14 μg/ml. The average recovery was 99.07%.ConclusionThe method is simple ,easy and reproducible .
       Key words：Hyptis suaveolens (L.)Piot;  Spectrophotometry;  Vanillin
   
　　毛老虎Hyptis suaveolens (L.)Piot为唇形科山香属植物，别名山薄荷、假藿香，本属植物共约400种，绝大多数均有药用价值。《全国中草药汇编》载：“辛、苦、平。疏风利湿，行气散淤。主治感冒头痛，胃肠炎，痢疾，腹胀；外用治跌打肿痛，创伤出血，虫蛇咬伤，湿疹，皮炎［1］。”从毛老虎中提取三萜酸国内还未见报道，印度的Mistra ,Truna N等［2］曾报道从毛老虎中提取得到三萜酸，我们做预实验时，用熊果酸标准品作TLC对照实验，以1%香草醛浓硫酸溶液显色，两者显示出Rf值相同的樱红色斑点。为了进一步研究三萜酸，本实验以熊果酸为对照品采用香草醛-冰醋酸比色，在高氯酸条件下对毛老虎茎中总三萜酸进行测定，从而有效优化总三萜酸的提取工艺。
       　　1  器材
       UV2501紫外分光光度计（日本岛津）：KSB1200型数控超声波细胞粉碎机（昆山市超声仪器有限公司）；试剂：高氯酸、冰醋酸、香草醛、无水乙醇均为分析纯，熊果酸购于中国药品生物制品鉴定所；毛老虎采集于广西南宁市效区。
       　　2  方法
       2.1  对照品溶液的配制精密称取熊果酸对照品8.1 mg，置100 ml容量瓶中，用无水乙醇超声溶解，并定容至100 ml，即得。
       2.2  测定方法取适量标准（或样品）溶液，水浴挥干，加5%香草醛-冰醋酸液0.4 ml，加高氯酸0.8 ml,置60℃水浴加热15 min，冰浴冷却后，加冰醋酸5.0 ml，摇匀，待测。
       2.3  影响本法的各种因素选择5%香草醛-冰醋酸溶液用量、高氯酸用量、水浴加热温度、水浴加热时间等4个因素，每个因素选择3个水平，编制因素水平表，见表1［3］。
       表1  实验因素水平（略）
       　　3  结果
       3.1  测定波长选择分别取样品及标准溶液适量，按“测定方法”项下处理后，在400～650 nm范围内扫描，对照品溶液和样品溶液均在550 nm处有最大吸收，确定550 nm为测定波长。
       表2  正交实验结果（略）
       由表2中极差R值大小显示，各因素作用主次为A＞C＞D＞B，因此以A2B2C3D2为佳，即最佳反应条件为：5%香草醛-冰醋酸液加入量为了0 .4 ml，高氯酸加入量为0.8 ml，水浴加热温度为60℃，水浴加热时间为10 min。
       3.2  正交实验结果取熊果酸标准溶液 0.5 ml，分别按正交实验因素水平表中各个因素进行实验，然后测定吸收度，结果见表2。
       3.3  方差分析将正交实验结果进行方差分析，结果见表3。表3中方差分析结果表明，相对于B因素，A因素有显著性意义。
       3.4  反应稳定性实验取适量熊果酸标准溶液，按“测定方法”项下处理，对生成的紫红色产物的稳定性进行考察，结果表明反应产物在10～60 min内进行测定较为稳定，60 min之后吸收度明显下降。
       3.5  工作曲线精密吸取熊果酸对照品溶液0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 ml，按“测定方法”项下处理，在550 nm处测定吸收度，以熊果酸浓度为横坐标，吸收值为纵坐标，作图得标准曲线，其回归方程为：Y=0.035 8X+0.003 3,r=0.999 7，表明熊果酸在此2.53～13.14 μg/ml范围内呈良好线性关系。
       3.6  样品含量测定取从毛老虎茎中提的3批粉末，在钵体中研匀，60℃干燥至恒重。精密称取适量于25 ml容量瓶中，用无水乙醇超声溶解，并定容至25 ml，即得。按“测定方法”项下，对样品中总三萜酸提取物进行测定，其结果总三萜含量为2.96%，见表4。
       表3  方差分析（略）
       表4  毛老虎提取物总三萜酸含量测定结果（略）
       3.7  回收率实验精密称取已知含量的样品，准确加入熊果酸对照品进行测定分析，回收率为99.07%，RSD=1.78%，结果见表5。
       表5  加样回收率实验相当于熊果酸量（略）
       　　4  讨论
       冰醋酸-香草醛、高氯酸比色法是测定三萜类化合物常用方法，本法测定的可能机制是三萜酸本身在可见光区无吸收，经过三萜酸中羟基与香草醛结构中的醛基进行缩合反应，生成红色的缩合物，通过测定缩合物的量，从而计算出总三萜酸的量。经实验考证，5%香草醛-冰醋酸0.4 ml，高氯酸0.6 ml，水浴温度60℃，水浴加热时间为10 min是熊果酸测定的最佳条件，在550 nm下，有一个较好的吸收值。从实验中知在显色后10～60 min内较稳定，有一个较准确的测定值。本实验结果表明，若在实验中严格控制反应条件，其结果仍较稳定，重现性好，可用于质量控制［4］。
       　　参考文献：
       ［1］  全国中草药汇编编写组.全国中草药汇编，下册，第1版［M］.北京：人民卫生出版社，1978：65.
       ［2］  Mistra T N,Singh R S,Ojha T N,Chemistry constituents of Hyptis suaveolens.Part I.Spectries and biological studies on a triterpene acid［J］.Joural of Natural Products,1981,44(6):735.
       ［3］  刘玉明，柴逸峰，娄玉洋，等.分光光度法测定蓝桉果实总三萜酸［J］.中国医院药学杂志，2005，25（1）：4.
       ［4］  王文祥，顾振纶.比色法测定山楂总三萜酸的含量［J］.中国野生植物资源，2001，20（5）：47.
       基金项目：广西科技攻关资助项目（No.0480005）
       (广西大学化学化工学院，广西  南宁  530004；  河池学院化学与生命科学系，广西 宜州  546300)