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天冬胶的溶血实验
作者:邢东炜,唐岚,张闽光,刘力,耿坚

《时珍国医国药》 2005年 第11期

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       【关键词】  中药
       摘要: 目的: 评价中药血管栓塞剂天冬胶的血液相容性。 方法: 实验组分别用天冬胶0.3,0.5ml,各制备3个平行样。阴性对照组用生理盐水,阳性对照组用蒸馏水。每个试管内加2%兔红细胞混悬液,90min后于576nm波长处测每个试管的吸光度。 结果: 0.3,0.5ml天冬胶的溶血率分别为0.09%、2.41%,小于5%。 结论: 所研制的中药血管栓塞剂天冬胶无溶血反应。
    
  关键词: 中药; 天冬; 溶血实验
    
  The Haemolytic Experiment of Asparagus Colloid
     
  XING D ong-wei, TANG L an, ZHANG M in-guang, LIU L i, GENG J ian
   
  (Shuguang Hospital,Shanghai University of TCM,Shanghai200021,China)
   
  Abstract: Objective:To evaluate the blood compatibility of Asparagus Colloid used as vascular embolization agent.Methods:Experimental group included0.3ml and0.5ml Asparagus Colloid,while the normal saline was used as negative control and distilled water as positive control.Two percent red blood cell suspension of rabbit was added to every sample of which the absorption at576nm wave-length was measured after90minutes.Results:The hemolytic rates of0.3ml and0.5ml Asparagus Colloid were0.09%and2.41%,all less than5%.Conclusion:The experimient shows that Asimragus Colloid will not cause hemolytic reaction.
    
  Key words: Chinese herbal; Asparagus; Hemolytic experiment
       经动脉化疗栓塞(trans-arterial chemotherapy and embolization,TACE)现已被公认为治疗恶性肿瘤的最有效的保守方法[1] 。尤其是原发或转移性肝癌的TACE应用更为普遍,其中栓塞剂的确当应用是提高TACE疗效的主要因素之一[2,3] 。我院用中药天冬制成胶样制剂,拟作血管栓塞剂。本文通过对中药天冬胶溶血实验的报道,为其安全用药提供依据。
        1 材料和方法
       1.1 材料
   
  1.1.1 药品
       天冬胶:自制;肝素:12500iu/ml/支,若干支;乙醚、生理盐水、蒸馏水等。
    
  1.2 动物
       新西兰大白兔:3.0kg。供采血。
    
  1.3 仪器
       分光光度计:日本岛津制造UV-240型紫外可见分光光度计;离心机:DL-8R型电动离心机;恒温水浴箱1台,比色皿、试管、烧杯、移液器、吸管、量杯、离心管、注射器等,各若干。
         2 方法
    
  2.1  制备2%的兔红细胞混悬液:乙醚麻醉兔后,自心脏抽取血液40ml,加入肝素4ml抗凝,用生理盐水洗涤、离心,至上清夜不显红色,弃上清液后取2ml再加入100ml生理盐水即得。 2.2  天冬胶溶血度检测样品的制备:取天冬胶0.3ml(A组)、0.5ml(B组)各4份,分别置于试管中,其中3份为试样管,另一份为底色管,试样管中加生理盐水至2.5ml,底色管中加生理盐水至5ml;另取新鲜蒸馏水2.5ml作为阳性对照管,取生理盐水2.5ml作为阴性对照管。上述各管摇匀后置于37℃恒温水浴箱中30min。然后各试样管和对照管中分别加入2%兔红细胞混悬液2.5ml,轻轻摇匀后,与底色管一同置37℃水浴1h,取出,离心5min(1000r/min)。
    
  2.3 样品检测
    
  2.3.1  肉眼观察:肉眼观察比较A、B两组试样管和底色管的上清液;以及A、B两组试样管和阴性对照管的红细胞沉积。
    
  2.3.2  分光光度计检测:取所有各管的上清液置于比色器中,于576nm波长处测定各管吸光度。其溶血度的计算如下。 样品吸光度=试样管液吸光度-底色管液吸光度溶血度= 样品吸光度-阴性对照液吸光度阳性对照液吸光度-阴性对照液吸光度×100%
         3 结果
    
  3.1 肉眼观察结果
   
  3.1.1  肉眼观察A组(0.3ml),B组(0.5ml)两组试样管和底色管的上清液颜色无明显差异。
    
  3.1.2  A、B两组试样管和阴性对照管的红细胞沉积量相似。由上述结果判断肉眼未见明显溶血现象。
  3.2  分光光度计检测结果,见表1。表1 各组试样溶血实验结果(略)
   
   
  1 2 3 平均值底色管
    
  溶血率(%)试样A组 0.2510.2460.2070.2350.148 0.09试样B组 0.3530.3220.2810.3190.206 2.41阴性对照组 0.086   -阳性对照组 1.192
    
  4 讨论
    
  天冬始载于我国现存最早的药物学专著《神农本草经》,列为上品,本经所载天冬具有强骨髓、杀三虫、去伏尸的功效,久服轻身益气、延年。天冬味甘、苦,性寒。归肺、肾经。具有滋阴润燥,清肺降火的功能。主治燥热咳嗽,阴虚劳嗽,热病伤阴等证。现代药理研究表明:天冬具有抗肿瘤作用,抗氧化 [4] 和反突变作用[5] 。临床上已长期用于治疗乳腺癌、恶性淋巴瘤、白血病、肺癌等[6] 。天冬具有改善肝功能的作用[7] 和提高机体的免疫功能[6,8,9] ,这些也是其中药栓塞剂所没有的功效。天冬还有抗菌作用[2,7] ,可减少被栓塞器官的感染。天冬含有大量的粘液质,具备制成胶样剂的条件,药源丰富,置备简单,使用方便,价格便宜。且毒性低,使用安全,生物相容性好
[10] 。本研究对天冬胶的溶血性进行初评定,为后续的实验研究提供依据。
       溶血实验中,药液和血液接触时,其溶血成分可导致红细胞破坏和血红蛋白释放,从而使游离血浆血红蛋白增加,产生对机体的毒副作用。根据红细胞破裂释放出来的血红素的可见波长段具有最大吸收的原理,采用分光光度法可测定溶血程度。因为所研制的天冬胶本身为浅黄色,预试验证实会影响试验结果,故设一试样底色组,即不加2%兔红细胞混悬液,只保湿1.5h。所以样品的吸光度等于试样管液吸光度减去底色管液吸光度的差值,提高了实验的准确度。
   
  在本实验中,天冬胶0.3,0.5ml在1h之后肉眼判断无明显溶血现象;紫外分光光度计检测溶血度均小于5%。根据现行卫生部《药品标准》和文献报道[11~13] ,规定供试品的溶液在0.3ml在1h出现溶血反应或溶血度大于5%的制剂不宜作静脉注射。故从溶血度标准上,可以认为本品生物相容性好,无明显的溶血作用,作为血管内注射剂使用是可行的。
         参考文献:
    
  [1] Okusaki T,Odada s,Ueno H,et al.Evaluation of therapeutic effect of transcatheter arterial embolization for hepatocellular carcinoma[J].Oncology,2000,58(4):293-299.
        [2] Yamamoto K,Maxuzawa M,Kato M,et al.Yamamoto k,Masuzawa M,Kato M,et al.Evaluation of combined therapy with chemoembolization and ethanal injection for advanced hepatocellular carcinoma.Semin Oncol.1997,24(2suppl6):S6-50-S6-55.
   
  [3] 史仲华,郭彦君,刘德忠,等.132例原发性肝癌灌注化疗及栓塞治疗疗效观察[J].中华肿瘤杂志,1999,21(3):211-213
        [4] 罗 俊,龙庆德,李诚秀,等.地冬及天冬对荷瘤小鼠的抑瘤作用[J].药学学报,2000,35(5):358-362.
        [5] 李志孝,黄成钢,蔡育军,等.天门冬多糖的化学结构及体外抗氧化活性[J].药学学报,2000,35(5):358-362.
        [6] 阮萃才.山揸12种中药对黄曲霉毒素B1诱变效应的抑[J].癌症,1987,8(1):29-29.
        [7] 骆和生,周岱翰.常用抗肿瘤中草药,第1版[M].广州:广东科技出版社,1981;199-200.
        [8] 郑虎占,董泽宏,佘 靖.中药现代研究与应用[M].第1版。北京:学苑出版社,1997;877-884.
    [9] 徐群英.抗癌中药药理研究概况[J].时珍国医国药,2001,12(2):165-165.
        [10] 张闽光,黄学菁,蒋海平,等.天冬胶作为血管栓塞剂毒性实验的初步报告[J].中国中西医结合影像学杂志。2003,1(1):20-22.
        [11] 徐步云.药理实验方法学[M].北京:人民卫生出版社,1982;413-413.
        [12] 刘 萍,杨建春.分光光度法测定中草药注射剂的溶血度[J].中成药,1993,(8):14-14.
        [13] 张德波,吴宝慧,刘大凤.对现行《药品标准》中溶血与凝集试验方法的修改建议[J].成都中医药大学学报,2000,23(1):62-62.
       基金项目: 上海市教委科学技术发展基金资助(No.2000C02)
    
  作者简介: 邢东炜(1971-),女(汉族),辽宁  人,现任上海中医药大学曙光医院主治医师,硕士学位,主要从事放射介入工作.
       (上海中医药大学曙光医院 200021)
       收稿日期: 2005-03-03

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