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       【关键词】  杞黄颗粒；,,高效液相色谱
       摘要：目的制定杞黄颗粒中黄芪甲苷的含量测定方法。方法用HPLCELSD法，Shim-pack C18ODS色谱柱，流动相乙腈-水(32∶68)，流速1.0 ml/min ；ELSD参数：漂移管温度40℃，气流压强：4.1Bar。结果回归方程为Y=1.614X+4.257 7，r=0.999 6，线性范围为2.036～7.635 μg。回收率为97.55%，RSD为2.02％。 结论 本研究建立的方法简便、可靠、准确，可以作为杞黄颗粒的质量控制方法。
       关键词：杞黄颗粒；  高效液相色谱蒸发光散射；  黄芪甲苷
       Determination of Astragaloside Ⅳ in Qihuang Granules by HPLCELSD
       ZHONG Hua，  LI Yi， ZHOU Shufang， ZHANG Dan
       (College of Pharmacy，Chengdu University of T.C.M，Chengdu 610075，China； Medicament Section ,North Sichuan Medical College， Nanchong 637007，China； Department of Pharmacy,Luzhou Medical College，Luzhou 646000，China)
       Abstract：ObjectiveTo determine astragaloside IV in Qihuang Granule by HPLCELSD．MethodsHPLCELSD was used in the quantitative analysis by using Shim-pack C18ODS chromatography column and acetonitril-water(32∶68)as a mobile phase．The flow rate of mobile phase was 1.0 ml/min．The drift tube temperature was 40℃．The gas pressure was 4.1Bar.ResultsThe regression equation was Y=1.614X+4.2577，r=0.999  6(2.036～7.635 μg)．The average recovery of astragaloside IV was 97.55%，RSD was 2.02％．ConclusionThe method is simple，reliable，accurate and can be used as the quality control method of Qihuang Granule．
       Key words：Qihuang Granule；  HPLC-ELSD；  Astragaloside IV
   
　　杞黄颗粒是由黄芪、枸杞、女贞子、茯苓、泽泻组成的主治年老体虚，气血不足，肝肾亏损的中药新药；具有益气血，补肝肾，延缓衰老之功效；方中黄芪为君药，黄芪甲苷为其主要指标成分和有效成分之一，药理实验表明黄芪甲苷对抗体形成细胞数具有双向调节作用,可以调节机体状态,加强其适应能力，还能抑制自由基的产生和清除体内过剩的自由基，保护细胞免受自由基产生的过度氧化作用的影响，进而延长细胞寿命。按照《中国药典》2005年版Ⅰ部“黄芪”项下的有关规定，采用HPLCELSD法测定复方黄芪制剂中黄芪甲苷含量，实验证明：该方法灵敏度、稳定性、及重现性均较好，是检测黄芪甲苷的一种较理想的方法，具有广泛适用价值。
       　　1  仪器与试药
       Agilent 1100型高效液相色谱仪，ELSD800型蒸发光散射检测器，DL720D型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器公司)，BP211DAG电子分析天平(德国Sartorius)；黄芪甲苷对照品(120974200407中国药品生物制品检定所)，水为重蒸馏水，乙腈、甲醇为色谱纯（Fisher），其它所用试剂均为分析纯。杞黄颗粒(四川省中药研究所生产)。
       　　2  方法与结果
       2.1  色谱条件 Shimpack C18ODS（5μm，150 mm×4.6 mm）色谱柱，流动相：乙腈水(32∶68)，柱温：30℃；检测器参数：漂移管温度：40℃，气流压强：4.1Bar气流量；流速：1.0 ml/min。
       2.2  对照品溶液的制备 精密称取黄芪甲苷对照品5.09 mg，置10 ml量瓶 中，甲醇定容，配成0.509 mg・ml-1的对照品溶液。
       2.3  供试品溶液的制备  精密称取供试品5 g，至100 ml的具塞锥形瓶中，各加入甲醇溶液50 ml，采用超声（功率500 W频率75 kHz）提取2次，每次各30 min的方法对样品进行提取，放冷，过滤，合并滤液，滤液水浴挥干，残渣加水10 ml，微热使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 ml，合并正丁醇提取液，用氨试液提取2 次，每次40 ml，弃去氨液，正丁醇液蒸干用甲醇溶解并转移至5ml 量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，微孔滤膜滤过，弃去初滤液，续滤液即可作为供试品溶液［1］。
       2.4  空白实验 空白实验的制备是取除去黄芪的杞黄颗粒处方药材，按其工艺制成阴性对照颗粒，再按供试品溶液的制备方法制备并测定，结果空白溶液在与黄芪甲苷对照品相同保留时间处无色谱峰，故认为无干扰。 见图1。
       2.5  线性关系精密吸取对照品溶（0.509 mg・ml-1）4，6，8，10,15μl，按上述色谱条件测定峰面积，以对照品进样量的常用对数X为横坐标，峰面积积分值的常用对数Y为纵坐标，得回归方程：Y=1.614X+4.257 7，r=0.999 6(n=5)。结果表明：黄芪甲苷在2.036～7.635 μg范围内线性关系良好。
       2.6  精密度测定 精密吸取黄芪甲苷对照品溶液（0.509 mg・ml-1），连续进样5次，每次10 μl，平均峰面积值为248 277，RSD为1.166％，精密度良好。
       2.7  稳定性实验 精密吸取同一新制备的供试品溶液10 μl，每隔4h进样1次，共进样6次，测定平均峰面积积分值为251 568，RSD为1.551%，表明至少在24 h内该提取液保持稳定。
       2.8  重复性实验 取同一批供试品5份(批号为060406)，制备样品供试液，分别进行测定，黄芪甲苷含量平均值为0.396 mg・g-1，RSD=2.145％，本法有较好的重复性。
       2.9  加样回收率实验 取同一批号(批号060406) 杞黄颗粒，分别精密称取9份，并精密加入浓度为0.509 mg・ml-1的黄芪甲苷对照品溶液适量，制备供试品溶液，按“供试品溶液的制备”项 下处理并测定，结果平均加样回收率为97.55％，RSD为2.02％，见表1。
       图1  色谱图 （略）
       表1  杞黄颗粒回收率实验结果（略）
       2.10  样品测定 精密吸取供试品溶液10 μl注入 液相色谱仪，按外标双点校正法测定含量。批样品测定结果见表2
       表2  杞黄颗粒的含量测定结果（略）
       由上表知,成品含量的均值为0.403 9 mg・g1，但考虑到药材的来源，炮制加工，制剂生产及储存等因素，故暂定本颗粒每克黄芪甲苷含量不得少于0.3 mg。
       　　3  讨论
       3.1  检测方法的选择  本研究曾采用薄层扫描法、HPLC紫外检测法以及HPLCELSD法测定杞黄颗粒中黄芪甲苷的含量，实验表明采用薄层扫描法和HPLC紫外检测法其精密度、稳定性、重现性、回收率实验均不及HPLCELSD法好，薄层扫描法因受薄层板厚度、均匀度、薄层展开环境，显色条件等诸多因素的影响其重现性尤难达到要求，而HPLC-紫外检测法对于仅有末端吸收的皂苷类化合物，因其吸收强度较弱，所以很难达到基线分离，其稳定性，准确度因此受限［2］。而采用HPLCELSD法其蒸发光散射检测器适于仅有末端吸收或无紫外吸收的皂苷类化合物的测定，它不依赖于样品的光学特性，不受官能团的影响，任何挥发性低于流动相的样品均能被检测。该法分离度好、前处理简单、重现性好、回收率高、结果准确，是一种良好的测定方法，故本研究最终采用HPLCELSD法测定杞黄颗粒中黄芪甲苷的含量。
       3.2  供试品溶液的制备研究  查阅资料发现，本品所含有效成分黄芪甲苷易溶于甲醇，70%的甲醇，70%的乙醇，曾采用此3种溶剂作为提取黄芪甲苷的提取溶剂，结果纯甲醇提取所得的黄芪甲苷含量最高，所以选择纯甲醇作为提取溶剂。还分别采用水浴回流，超声（功率500 W,频率75 kHz）和振摇提取1 h 3种方法对样品进行提取，结果超声提取法黄芪甲苷含量较其它两种方法更高一些，且方法更简便一些，故选择超声提取（功率500 W,频率75 kHz。）［3］提取时间的考察中，超声提取30 min和超声提取60 min黄芪甲苷含量相差不是太多，而超声提取30 min更省时些，故选择超声提取30 min即可。提取次数的考察中超声提取两次以上，黄芪甲苷含量即有显著提高，而提取两次和提取两次相差不是太多，超声提取两次更简便一些，故选择超声提取30 min（功率500 W,频率75 kHz）2次即可。
       3.3  流动相的选择  实验曾选用乙腈水（40∶60）、乙腈水（37∶63）、乙腈水（35∶65）、乙腈水（30∶70）、乙腈-水（32∶68），其中以乙腈-水（32∶68）达到最为满意的分离效果，且黄芪甲苷峰达基线分离，峰形对称，故确定选择乙腈-水（32∶68）作为流动相。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会．中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005:212 .
       ［2］  田景奎 ， 吴丽敏 ， 刘建建，等．HPLCELSD测定芪休颗粒中黄芪甲苷的含量［S］.中成药，2004，26(10)：812.
       ［3］  张莲珠．HPLC测定黄民甲苷概况［J］.中成药，2005，27(5)：587.
       (成都中医药大学药学院，四川 成都  610075；川北医学院，四川 南充  637007；泸州医学院，四川 泸州  637007)