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       【关键词】  天山大黄
       摘要: 目的: 从天山大黄中提取总黄酮并测定其含量。 方法: 运用超声技术连续提取天山大黄总黄酮，用比色法测定总黄酮含量。 结果: 测得天山大黄中总黄酮含量0.357%，平均回收率为98.86%，RSD=1.35%（n=:6）。 结论: 首次运用超声技术从天山大黄中连续提取总黄酮、多糖，速度加快，收率提高。 关键词: 超声提取; 天山大黄; 总黄酮; 含量测定
   
　　Comparlson of extract way of chromocorin Rheum wittrochii L. WANG Y an
   
　　（Dept.of pharmacy，The first Affiliated hospital of Shihezi Medical college，xinjiang832002China）
   
　　Abstract: Chromocor were extracted from Rheum wittrochii L.by ultrasonic method，and the content was determination.Chromocor were extracted by ultrasonic method，and the content was determined by spectrophotometer.The chromocor content of Rheum wittrochii L.is0.357%，recovery rate is98.86%.It is the first time to extract chromocor from Rheum wittrochii L.by ultrasonic method，Ultrasonic extraction was a better method for chromocor of Rheum wittrochii L. Key words: ultrasonic extraction; Rheum wittrochii L.; Chromocor; Content determination
       天山大黄（Rheum wittrochii L.），多年生草本，主要生长在天山山脉，为新疆特有大黄品种。维吾尔语发音“热万”。维吾尔族民间用于治疗血小板减少症、闭经、痢疾、通淋不利等症［1］ 。目前，对天山大黄蒽醌成分研究很多，而对其黄酮研究较少。药理研究表明，天山大黄黄酮具有降血脂、改善心肌功能的作用 ［2］ 。为正确评价天山大黄的药材质量，我们首次运用超声技术从天山大黄中连续提取总黄酮 ［3］ 并测定其含量，结果令人满意。
       　　1 仪器、试剂及样品
    
　　1.1 仪器 岛津UV-2401PC紫外可见分光光度计，DL-360超声波仪（35kHz，浙江象山县石浦海天电子仪器厂），TG328B分析天平，DZKW-C电子恒温水浴（北京光明医疗仪器厂），R-201旋转蒸发器（上海申胜生物技术有限公司），索氏提取器。
　　
　　1.2 材料与试剂 对照品芦丁购自中国药品生物制品检定所。其余试剂均为分析纯。天山大黄:采自天山北坡新疆沙湾县林场内，经石河子大学生物学院何敬琨教授鉴定为（Rheum wittrochii L.）。秋后采挖，洗净，切片晾干，破碎后备用。取天山大黄粉末0.5g，加甲醇5ml振摇后放置30min，滤过。取滤液点在滤纸上，在紫外灯下（365nm）处观察，天山大黄显亮紫色［1］ 。
       　2 天山大黄中黄酮提取与含量测定
       2.1 样品溶液制备
       取天山大黄样粉约2g，精密称定，置索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）水浴回流脱脂2次（每次2h）。残渣挥干溶剂后，置锥形瓶中，加85%的乙醇50ml，浸泡12h，分别超声提取1，2，3次，每次20，30，40min。过滤，另用少量85%乙醇多次洗涤滤渣，并入提取液，并转入100ml容量瓶中，用85%乙醇定容，摇匀，即得测总黄酮的天山大黄样品液。按标准曲线的制定法，确定提取2次，30min/次吸收度最大。
       2.2 总黄酮含量测定
       2.2.1 标准曲线的制定 精密称取120℃干燥恒重的芦丁标准品10mg，加85%乙醇溶解，定容至50ml容量瓶中，摇匀，制成浓度为0.2mg/ml的标准品溶液。分别取标准品溶液0.0，0.2，0.5，1.0，2.0，3.0，4.0ml于10ml容量瓶中，加5%亚硝酸钠0.4ml，放置6min后，加10%硝酸铝0.4ml，放置6min，再加4%的氢氧化钠4ml，加水至刻度，摇匀，放置15min，进行全波长扫描，在510nm处均有最大吸收。以测定结果计算得直线方程C=79.23A-0.459，r=0.9981。在4～80μg/ml的范围内，浓度与吸收度有良好的线性关系。
    
　　2.2.2 样品含量测定
       精密吸取供试品溶液1.0ml，置10ml容量瓶中，按标准曲线的制定项下相同的方法显色测定。通过标准曲线，计算出样品总黄酮的含量，见表1。 2.2.3 定性分析
   
　　2.2.3.1  还原反应，将样品溶于乙醇，加入少量镁粉振摇，滴加几滴浓盐酸，静置1～2min，显红紫色。
    
　　2.2.3.2  络合反应，样品加入1%三氯化铝溶液中，生成络合物为黄色（λmax=415nm），并有荧光。
    
　　2.2.4 回收率实验 取天山大黄样粉约0.5g，精密加入芦丁对照品2mg，依法提取、测定，结果平均回收率为98.86%，RSD=1.35%（n=6）。
       2.2.5 精密度 精密吸取供试品溶液1.0ml共5份，分别置10ml容量瓶中，按标准曲线的制定项下相同的方法显色测定（每隔5min测1次，连续5次）。通过标准曲线，计算出样品总黄酮的含量。平均值为0.351%，RSD=1.3%，精密度良好。
    
　　2.2.6 重复性
       称取天山大黄样品5份，分别按2.l项下操作，依法测定，其含量结果为0.357%，RSD=1.29%。
    
　　2.2.7 稳定性实验
       按样品测定方法操作，测定同一供试液在不同时间吸收度。结果表明，吸收度值在5～45min内基本不变。因此测定应控制在45min内完成。
    
　　2.3 常规法提取
       取天山大黄样粉三份，每份约2g，精密称定，置索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）水浴回流脱脂2次（每次2h）。残渣挥干溶剂后，置锥形瓶中，加85%的乙醇50ml，浸泡12h，恒温60℃水浴加热回流分别提取12、24、36h。过滤，另用少量85%乙醇多次洗涤滤渣，并入提取液，并转入100ml容量瓶中，用85%乙醇定容，摇匀，即得测总黄酮的天山大黄样品液。精密吸取供试品溶液1.0ml，置10ml容量瓶中，按标准曲线的制定项下相同的方法显色测定。通过标准曲线，计算出样品总黄酮的含量，结果见表1。表1 天山大黄黄酮含量% 测定次数（略）
   
　　3 讨论
    
　　超声技术已经广泛应用于总黄酮的提取［3］ ，可以大幅度地提高总黄酮的提出率，极大地缩短提取时间，节省溶剂。超声提取一般在常温条件下进行，避免了黄酮的分解。超声波破碎过程是一个物理过程，浸提过程中无化学反应，被浸提的生物活性物质在一定时间内保持不变［4］ ，所提黄酮为常规法的1.17倍。因此，采用超声法提取天山大黄总黄酮，可避免因结构改变而使后续的结构分析及药理活性研究产生错误的结论。超声法所用仪器简单，操作方便，且自动化程度高，便于大规模工业生产。 
       　　参考文献:
    
　　［1］ Liu Y M，The Record of Herbal Medicine of WElWUER Nation ［M］.Urumuqi:Xinjiang Science and Technology"s Publishing House，1999，31-39.
        ［2］ Editor Committes of Chinese Herbal Medicine of Xinjiang.The Chinese Herbal Medicine of Xinjiang ［M］.Urumuqi:Xinjiang People"s Pubishing House，1976.
        ［3］ Zhao B，Wang YC，Ou Y F，et a1.ultrasonic techique applied in extraction of plant［J］.Chin Tradit Herb Drug，1999，3（9）:S-i-ii.
       作者简介: 汪 燕（1968-），女（藏族），新疆  人，现任石河子大学医学院第一附属医院药剂科副主任药师，学士学位，主要从事药学工作.
         （石河子大学医学院第一附属医院药剂科，新疆石河子 832000）
       收稿日期: 2005-03-08