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       【关键词】  生黄合剂；,,病毒性心肌炎；,,细胞因子
       摘要：目的观察生黄合剂对病毒性心肌炎小鼠血清IL2及IL10的影响。方法对昆明种小鼠采用柯萨奇病毒（CVB3）腹腔注射染毒，制成病毒性心肌炎动物模型，观察生黄合剂对模型鼠的一般情况、生存率及IL2及IL10的影响。结果各治疗组小鼠的生存率明显高于病毒对照组，实验所试药物对CVB3感染鼠均有保护作用，生黄合剂1∶1，1∶2组对感染鼠的治疗作用要好于阳性药物组，尤其是1∶1液组的治疗作用最佳；生黄合剂对模型鼠血清IL2及IL10有调节作用。结论 生黄合剂对实验性病毒性心肌炎小鼠具有治疗作用。
       关键词：生黄合剂；  病毒性心肌炎；  细胞因子
       近年来病毒性心肌炎（viral myocarditis，VMC）的发病率呈上升趋势,已成为临床的常见病和多发病。肠道病毒中的柯萨奇病毒B组（coxsackievirus B3，CVB3）是引起病毒性心肌炎的主要病原体，调查表明病毒性心肌炎患者中有近50%的是由CVB3感染所致［1］。VMC的发病主要与病毒直接损伤心肌细胞、免疫损伤及生化机制有关。目前对该病的治疗仍缺乏有效手段。生黄合剂由黄芩茎叶总黄酮和传统名方生脉饮组成。预试验证明生黄合剂具有较好的抗病毒作用。本研究观察了生黄合剂对实验性小鼠病毒性心肌炎的作用，为临床试验及进一步探讨其作用机制提供依据。
       1  材料与方法
       1.1  材料  CVB3病毒Nancy株由河北医科大学微免教研室惠赠。在Hela细胞上传代，反复冻融3次，用微量法测定其半数组织感染量（TCID50）为10-5.5。实验动物为180只4～5周龄昆明种小鼠，雌雄各半，体重16～18g，二级实验动物，由山西医科大学实验动物中心提供。中药配制：生脉饮（人参∶五味子∶麦冬=1∶2∶1）与总黄酮（承德医学院中药研究所提供）按不同比例制成1∶1，1∶2合剂。利巴韦林注射液（0.1 g/ml济南利民制药有限责任公司）。
       1.2  方法  将小鼠随机等分为6组，每组30只。A组为生脉饮治疗组；B组为1∶1液治疗组；C组为1∶2液治疗组；D组为阳性药物对照组；E组为病毒对照组；F组为正常对照组。A～E组腹腔注射1000TCID50/0.1 ml的CVB3 0.1 ml，F组腹腔注射RPMI 1640维持液0.1 ml，1 h后A～C组灌胃给药，0.2 ml/10 g，D组利巴韦林0.1 ml/10 g（80 mg/kg）腹腔注射，F组给予相同剂量的生理盐水灌胃，2次/d，持续给药10 d，观察14 d。分别于第7，14 d每组随机抽取6只小鼠摘眼球取血，分离血清，用ABC-HRP夹心ELISA法（试剂盒购自美国Biosouce公司）测定其IL2和IL10的水平变化。实验数据以±s表示，采用SPSS11.0统计软件进行方差分析、SNK检验，卡方检验，检验水准α=0.05。
       　　2  结果
       2.1  小鼠一般情况及生存率  F组小鼠活动自如，无一例死亡。A～D组小鼠的一般情况好于E组，E组小鼠在接种CVB3后第3天开始死亡，主要集中在第6～10天，而A～D组小鼠的死亡时间推迟到第6天，第14天各组小鼠存活情况见表1。A～D组与E组之间有统计学差异（χ2=40.11，P＜0.005）,A组与B组之间有统计学差异（χ2=4.46，P＜0.05）,B组和C组分别与D组比较均有统计学差异（χ2=10.24，χ2=5.33，P＜0.05）。结果表明实验所试药物对CVB3感染鼠均有保护作用，B、C组对感染鼠的保护和治疗作用要好于D组，尤其是1∶1液组的保护和治疗作用最佳。结果见表1。
       表1  各组小鼠染毒第14天的存活率比较（略）
       与E、F组比较，aP＜0.005；与D组比较，b P＜0.05；与A组比较，c P=0.035
       2.2  细胞因子检测  在接种CVB3后第7，14天各组小鼠血清中IL-2和IL-10的测定结果见表2~3。用析因方差分析对不同时间小鼠血清中IL-2浓度进行比较（F=4.211，P＜0.005），不同时间与分组之间存在交互作用,然后分析不同时间的单独效应。接种病毒后第7天各组小鼠血清中IL-2水平比较有统计学差异（F=7.427，P＜0.05）,生脉饮组、1∶1液组和1∶2液组与病毒对照组相比有统计学差异(P＜0.05)；第14天各组小鼠的血清中IL-2水平比较有统计学差异（F=11.529，P＜0.005），1∶1液组小鼠的血清中IL-2水平低于病毒对照组(0.01＜P＜0.05)。同样用析因方差分析对不同时间小鼠血清中IL-10浓度进行比较（F=6.788，P＜0.005），不同时间与分组之间仍存在交互作用，然后分析不同时间的单独效应。接种病毒后第7天各组小鼠血清中IL-10水平比较有统计学差异（F=46.597，P＜0.005）,病毒对照组与其它治疗组相比有统计学差异(P＜0.05)，生脉饮组及1∶1液组和1∶2液组及阳性药物对照组相比仍有统计学差异(P＜0.05)。第14天各组小鼠血清中IL-10水平比较有统计学差异（F=8.977，P＜0.001），1∶1液组与其它组相比仍有统计学差异(P＜0.001)。
       　　3  讨论
       本试验研究证实：利巴韦林对CVB3感染鼠有一定治疗作用，但治疗效果不够理想，可能与VMC的免疫损伤有关。生脉饮能有效地保护CVB3感染鼠，使血清中IL2水平（第7天）低于病毒对照组，提示：生脉饮可能通过调节免疫，抑制过氧化脂质及自由基的产生，增强过氧化物酶的活性，保护心肌细胞等机制对CVB3感染鼠起到治疗作用。自20世纪80年代以来，承德医学院中药研究所对黄芩茎叶有效成分进行了广泛系统的研究，发现黄芩茎叶提取物总黄酮的主要化学成分为野黄芩苷，具有广泛药理活性，如抗炎、抗病毒作用，黄芩苷对流感病毒有抑制作用［2～4］，有改善心律失常作用［5］等。因黄芩茎叶总黄酮与生脉饮均有调节免疫、改善心律失常的作用，但两者的药理作用不尽相同。在病毒诱发的炎症至感染后自身免疫反应的产生及进展过程中，细胞因子被认为具有重要作用［6］。关于心肌炎免疫反应，目前人们极为关注Th1细胞及Th2细胞的交叉作用。Th1相关细胞因子IL2对诱导细胞免疫起关键作用；而Th2相关细胞因子IL10对增强体液免疫即IgG及IgM抗体的产生起到重要作用。不同类型细胞因子间可相互影响及调节［6］。病毒性心肌炎存在免疫失常，包括TH1/TH2失衡、NK细胞活性降低等。黄芩茎叶总黄酮与生脉饮可能通过调节细胞因子网络来调节TH平衡，降低TH1类细胞因子水平，提高TH2类细胞因子的浓度。第14天1∶1液组小鼠血清中IL10水平高于其它各组，IL2水平低于病毒对照组。
       表2   染毒第7天各组小鼠血清IL-2及IL-10的水平比较（略）
       与E组比较，※P＜0.05；与其它各组比较，※※P＜0.05
       表3   染毒第14天各组小鼠血清IL-2及IL-10的水平比较（略）
       与E组比较，※P＜0.05；与其它各组比较，※※P＜0.001
       本文研究结果显示生脉饮与黄芩茎叶总黄酮按1∶1配方与按1∶2配方均对CVB3感染鼠有保护作用，尤其生脉饮与黄芩茎叶总黄酮按1∶1配方效果最好，疗效明显优于生脉饮及利巴韦林，生黄合剂对模型鼠血清IL2及IL10有调节作用，其作用机制有待于进一步研究。
       　　参考文献：
       ［1］  Jack F,Woodruff MD.Viral myocarditis.A review.Am J  Pathol, 1980, 101(2):425.
       ［2］  周晓霞，李素婷,周晓慧,等.黄芩茎叶总黄酮抗炎作用的实验研究［J］.中国中医药信息杂志,2000,2(6):150.
       ［3］  颜正华.中药学［M］.北京:人民卫生出版社,1991:136.
       ［4］  Nagai T,Suzuki Y,TomimoriT,etal.Antiviral activity of plant flavonoid,5,7,4"rihydroxy8methoxyflavone,from the roots of Scutellaria baicalensis against influenza A(H3N2) and B viruses［J］. Biol- Pharm-Bull,1995, 18(2):295.
       ［5］  佟继铭，刘玉玲，周崇坦,等.黄芩茎叶总黄酮抗心律失常作用研究［J］.中草药,2002,33(8):731.
       ［6］  Yoshinori S,Naoyuki T,Hideo Y,et al.Expression of cytikine mRNA in murine hearts with acute myocarditis caused by coxackievirus B3［J］.Journal of Pathollgy,1997,183:105.
       （承德医学院，河北 承德  067000）