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       【关键词】  小叶锦鸡儿；,,,朝鲜锦鸡儿；,,,总黄酮；,,分光光度法
       摘要：目的比较锦鸡儿属植物小叶锦鸡儿与朝鲜锦鸡儿总黄酮的含量。方法以索氏提取法提取总黄酮类成分，以硝酸铝-亚硝酸钠分光光度法测定总黄酮含量。结果小叶锦鸡儿与朝鲜锦鸡儿根的总黄酮含量分别为0.206%，0.146%。结论 两种植物根中的总黄酮含量都较低（小于1%），其中小叶锦鸡儿根的总黄酮含量高于朝鲜锦鸡儿根的总黄酮含量。
       关键词：小叶锦鸡儿；   朝鲜锦鸡儿；   总黄酮；  分光光度法
       Comparative Study on the Total Flavonoids Contents in Caragana microphylla Lam and C. koreana Nak.
       PIAO Huishun,  JIN Guangzhu, ZHANG Shanyu
       （College of Pharmacy，Yanbian University，Yanji 133000,Jilin,China）
       Abstract：Objective To compare the total flavonoid contents in Caragana microphylla Lam and C. koreana Nak roots.MethodsThe total flavonoids were extracted by Soxhlet extraction, and were determined by Al（NO3)3-NaNO2 spectrophotometry method.ResultsThe content of total flavonoids in Caragana microphylla Lam was 0.206%, and the total flavonoids in C. korea Nak was 0.146%. ConclusionThe total flavonoids in root of the two plants were all low, and it was higher in Caragana microphylla Lam than in C. koreana Nak.
       Key words：Caragana microphylla Lam；  C.koreana Nak.；  Flavonoids；  Spectrophotometry
   
　　锦鸡儿属植物Caragana Fabr是豆科落叶灌木，分布于欧亚大陆，全世界共有百余种，我国有66种，主要分布在北方干旱，半干旱地区，其栽培种通称为柠条［1］。锦鸡儿属植物除作为防风固土，保持水土，改善生境的先锋树种和优质的畜生饲料外，还具有药用价值。一般以其根或花入药。民间用以治疗高血压病、出血症、妇科疾患、四肢无力、擦伤挫伤、头晕耳鸣、肺虚久咳、小儿消化不良等症［2，3］。小叶锦鸡儿与朝鲜锦鸡儿在延边地区具有丰富的资源，朝医称小叶锦鸡儿为骨草（治疗骨髓炎的草药），是民间常用药材。味苦、性寒，具有祛风湿、活血、镇静、强心、利尿、消炎等功效［4］。民间上常用于高血压病、风湿性关节炎、妇科疾病等症的治疗。为充分利用我州资源优势，开发锦鸡儿属植物，扩大黄酮类化合物的提取资源，对该属两种植物小叶锦鸡儿和朝鲜锦鸡儿根的总黄酮含量进行了测定并比较。
       　　1  材料与仪器
       1.1   材料小叶锦鸡儿、朝鲜锦鸡儿根采集于和龙市龙华乡，由延边大学药学院生药教研室刘永镇教授鉴定为Caragana microphylla  Lam.的根，C. koreana Nak的根，芦丁标准品 中国药品生物制品检定所（批号080-9002），其他试剂均为分析纯。
       1.2   仪器S22PC型可见分光光度计（上海棱光技术有限公司），SK1200H超声震荡仪（上海科导超生仪器有限公司），置索氏提取器。
       　　2  方法与结果
       2.1   聚酰胺的处理［5］称取5 g聚酰胺粉末，加适量95 %乙醇浸泡，搅拌，静置，装柱。先用聚酰胺体积的约5~6 倍量的95%乙醇洗脱，然后用蒸馏水洗脱至无乙醇味为止即可，备用。
       2.2   样品溶液的制备小叶锦鸡儿和朝鲜锦鸡儿的根粗粉，分别精密称取1.000 0 g，置索氏提取器中用乙醚脱脂［6］，即加乙醚加热回流至提取液无色，冷却，弃去乙醚液，加70 %乙醇50℃水浴浸提5 h，超生震荡提取1 h，过滤，滤渣用70 %乙醇洗涤2~3次，合并滤液与洗涤液，浓缩，拌入预先处理好的聚酰胺柱。首先用水洗脱，再用95 %乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，浓缩，再用70%乙醇定容至50 ml，待用。
       2.3   芦丁标准贮备液的制备 精密称取120℃干燥至恒重的芦丁标准样品0.1017g，用少量50 %乙醇溶解后移至50 ml棕色容量瓶中，用70 %乙醇定容至刻度，放入冰箱中备用。
       2.4   芦丁标准应用液的制备  精密吸取10 ml芦丁标准贮备液于100 ml容量瓶中，用70 %乙醇稀释至刻度。
       2.5   最大吸收波长的确定  取4个25 ml容量瓶，1号瓶不加， 2号瓶中加1 ml芦丁标准应用液，最后两个分别加入2 ml小叶锦鸡儿样品液与朝鲜锦鸡儿样品液。再4个瓶中各加水至6 ml, 加5 %亚硝酸钠溶液1 ml，使混匀，放置6 min。加10 %硝酸铝溶液1 ml，使混匀，放置6 min。加4 %氢氧化钠试液10 ml，再加水至刻度，摇匀，放置15 min后以1号瓶为空白，在400~600 nm波长范围测定标准品和样品液的吸光度。用所得数据画吸收曲线，样品与对照品在510 nm有共同的最大吸收峰，故实验确定510 nm为测定波长。
       2.6   标准曲线的制备［7］精密吸取芦丁标准应用液0.0，1.0，3.0，5.0，7.0 ml分别置于25 ml容量瓶中按2.5项下自“加水至6 ml”起同法操作，分别在510 nm处测定其吸光度。结果见表1。以吸光度（A）为纵坐标，芦丁标准品质量（m）为横坐标作标准曲线（见图1）。得A与m的线性回归方程： A=0.2482m-0.000 9，相关系数r =0.998 2。
       2.7   稳定性实验精密吸取芦丁标准应用液1.0 ml后按2.5项下自“加水至6 ml”起同法操作，在0~60 min内每隔5  min测定一次吸光度。60 min内吸光度由 0.040降至0.031。结果见表2。经t检验，两者之间没有显著性差异，RSD为 0.24%；35 min内吸光度由0.040降至0.037,RSD为 0.12 %。说明黄酮类成分在60 min内基本稳定，最好在35 min内完成测定。
       表1  芦丁标准样品质量与吸光度的关系（略）
       结果表明，在0.203~1.424 mg范围内呈较好的线性关系。
       图1  标准曲线（略）
       2.8  精密度实验  精密吸取芦丁标准品溶液2 ml于25 ml容量瓶中，共5份，按上述方法显色后于510 nm测定吸光度。每份测定3次，记录吸光度值。这些吸光度值的RSD值为0.68%。表明本方法有较高的精密度。
       表2  芦丁标准样品吸光度与时间的关系（略）
       2.9   重现性实验  精密吸取2 ml 小叶锦鸡儿与朝鲜锦鸡儿样品液各3份，同法显色后测定吸光度，每份测3次。这些吸光度值的RSD值分别为1.17%，2.09%。表明本文方法有较好的重现性。
       2.10   回收率实验精密称取小叶锦鸡儿与朝鲜锦鸡儿根的粗粉约1g，各3份，按2.2方法提取，其中按80%，100%，120%的比例分别加入芦丁标准品溶液，按2.5方法测定，每份测3次。计算回收率。结果见表3~4。
       表3  小叶锦鸡儿根的回收率测定结果（略）
       表4  朝鲜锦鸡儿根的回收率测定结果（略）
       回收率测定结果，小叶锦鸡儿根的回收率平均值为98.45%，RSD为1.14%；朝鲜锦鸡儿根的回收率平均值为99.15%，RSD为0.90%。表明本方法准确度较好，方法可行。
       2.11  含量测定  精密吸取样品液2~6 ml，置于25 ml 容量瓶中，5次重复，按2.5项下自“加水至6 ml”起同法操作，进行显色，在510 nm 处测定其吸光度，代入标准曲线回归方程，换算后得到植物材料-小叶锦鸡儿根与朝鲜锦鸡儿根中的总黄酮含量。结果见表5。
       表5  小叶锦鸡儿与朝鲜锦鸡儿根的总黄酮含量（略）
       　　3  讨论
       通过方法学考察，该方法操作简便，准确，适合于测定小叶锦鸡儿与朝鲜锦鸡儿根的总黄酮含量。表5显示，小叶锦鸡儿与朝鲜锦鸡儿根的总黄酮含量分别为0.206 %，0.146 %。其中小叶锦鸡儿根的总黄酮含量高于朝鲜锦鸡儿根的总黄酮含量，但都不足1%。以上只是对锦鸡儿属中两种植物根的总黄酮含量进行初步测定的结果，对于该属植物类黄酮化合物在不同部位、不同生长时期和生长地的分布规律及类黄酮化合物的类型有待进一步研究。
       　　参考文献：
       ［1］  牛西午.中国锦鸡儿属植物资源研究［J］.西北植物学报,1999,19(5)：107.
       ［2］  牛西午.柠条研究论文集［M］.太原:山西科学技术出版社,2003:163.
       ［3］  江苏新医院.中药大辞典［M］.上海：上海科学技术出版社,1993：979,1402,1697.
       ［4］  延边中草药编写组. 延边中草药［M］.延吉:延边人民出版社,1997：569.
       ［5］  周正华,杜安全,王先荣,等.黄蜀葵花中总黄酮的含量测定［J］.现代中药研究与实践,2005,19(1):52.
       ［6］  戈升荣,安富荣,袁  静,等.排石合剂质量标准研究［J］.中草药，2000,31(12)：904.
       ［7］  张如松,许静怡,叶益萍,等.产地对桑叶中黄酮类成分含量的影响［J］.中国现代应用药学杂志，2000,17(1)：11.
       (延边大学药学院，吉林 延吉  133000)