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       【关键词】  金果榄；,,回流提取；,,超声波提取；,,浸渍提取
       摘要：目的比较金果榄回流提取法、超声波提取法、浸渍提取法等不同提取方法的提取率。方法运用高效液相色谱（HPLC）法，以盐酸巴马汀、盐酸药根碱为指标成分作比较。结果回流提取法提取率最高。结论 建议选用回流提取法作为金果榄最佳提取方法。
       关键词：金果榄；  回流提取；  超声波提取；  浸渍提取
       Comparison of Different Extracting Methods for Tinospora sagittata（Oliv.）Gagnep.
       HUANG Liangyong，TU Ziliang，YANG Guangyi ,ZHU Jiancheng, SUN Shaobo
       (Taihe Hospital Affiliated to Yunyang Medical College ,Shiyan 442000，China)
       Abstract：ObjectiveTo compare extracting rates of the circumfluence extracting method, the ultrasonic extracting method and the soakage extracting method in Tinospora sagittata（Oliv.）Gagnep..MethodsAn HPLC analysis method was applied and the best extracting method was chosen based on the determination of Palmatine and Jatrorrhizine. ResultsThe rate of the circumfluence extracting method was the highest.ConclusionIt can be used as the best extraction for Tinospora sagittata（Oliv.）Gagnep..
       Key words：Tinospora sagittata（Oliv.）Gagnep.;  Circumfluence extraction;  Ultrasonic extraction;  Soakage extraction
   
　　金果榄为防己科青牛胆属植物青牛胆Tinospora sagittata（Oliv.）Gagnep.或金果榄 T.capillipes Gagnep.的干燥块根。有清热解毒，消肿止痛之功效。内服用于治疗各种炎症，咽喉肿痛、扁桃体炎、急性胃肠炎、菌痢、痈肿疔疖等；外用浸膏、磨汁涂搽或研末调搽，用以治疗静脉炎，毒蛇咬伤等症［1］。金果榄常见的提取方法有回流提取法、超声波提取法、浸渍提取法等。《中国药典》2005版以盐酸巴马汀、盐酸药根碱为对照品，用薄层色谱法进行定性鉴别；以盐酸巴马汀为对照品，用薄层色谱扫描法进行含量测定 ［2］。为了考察金果榄各种提取方法的优劣，本实验运用HPLC法，以盐酸巴马汀、盐酸药根碱为指标成分，选择金果榄最佳提取方法。
       　　1  材料与方法
       1.1  仪器、试剂和样品Agilent 1200型高效液相色谱仪;VWD检测器； Eclipse DBC18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）(美国安捷伦公司)；赛多利昂BS214D型分析天平(德国赛多利昂仪器有限公司)；KQ5200B型超声波震荡器(昆山市超声仪器有限公司)；超纯水；色谱纯乙腈；色谱纯甲醇；盐酸巴马汀(2005012)和盐酸药根碱对照品(20020203)从中国药品生物制品检定所购买。金果榄药材样品采于武当山南岩，由武当中药研究所陈吉炎教授采集并鉴定为青牛胆Tinospora sagittata（Oliv.）Gagnep.。样品打粉，过35目筛备用。
       1.2  方法
       1.2.1   样品的提取   回流提取法  取本品粉末约1 g，精密称定，加甲醇60 ml，加热回流1 h。
 
　　超声波提取法取本品粉末约1 g，精密称定，加甲醇60 ml，超声波提取3次，20 min/次，间隔15 min/次。
 
　　浸渍提取法取本品粉末约1 g，精密称定，加甲醇60 ml，置于密闭的碘量瓶中，浸渍7 d。
       1.2.2  供试品溶液配制分别取以上3种提取液，滤过，用甲醇10 ml洗涤药渣，合并洗液与滤液，蒸干，残渣用适量甲醇溶解，转移至25 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜过滤，精密吸取5 ml定容于10 ml容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液备用。
       1.2.3  对照品溶液的配制取盐酸巴马汀对照品和盐酸药根碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成0.045 16 mg・ml-1的盐酸巴马汀溶液 ，0.034 84 mg・ml-1的盐酸药根碱溶液，作为对照品溶液备用。
       1.2.4  色谱条件检测波长：345 nm；柱温：25℃；流动相：以水乙腈（1∶1）为流动相，加1.7 g・L-1 十二烷基硫酸钠,用磷酸调至pH  3.0；流速：1 ml・ml-1。
       　　2  结果
       2.1  方法学考察
       2.1.1   线性关系考察 分别精密吸取0.045 16 mg・ml-1的盐酸巴马汀溶液 ，0.034 84 mg・ml-1的盐酸药根碱溶液1.0，2.5，5.0，10.0，15.0 μl，依次注入高效液相色谱仪,按上述色谱条件测定峰面积,以峰面积yp, yj为纵坐标,以盐酸巴马汀溶液的浓度(xp) ，盐酸药根碱溶液的浓度(xj)为横坐标,绘制标准曲线,回归方程分别为：yp=89 234.5 xp -234.8,r=0.998 7，yj=79 803 xj +32.8，r=0.999 3。表明供试品溶液中盐酸巴马汀溶液的浓度(xp) 在0.045 16 ～1.677 4 mg・ml-1范围内呈良好的线性关系；盐酸药根碱溶液的浓度(xj) 在0.034 84 ～1.522 6 mg・ml-1范围内呈良好的线性关系。
       2.1.2   精密度实验  精密吸取以上两种对照品溶液5 μl进样，重复6次，测定峰面积，RSD为0.54%。
       2.1.3  稳定性实验 取供试品溶液，分别于配制后0，1，2，4，8，12，24 h进样，RSD为1.08%。
       2.1.4   重复性实验按供试品测定方法操作,对同一样品重复测定6次,平均含量xp, xj  分别为1.535 6 mg・g-1，1.232 1 mg・g-1 ，RSD为0.81%。
       2.1.5  加样回收实验 精密称取已测含量的药材，以加入法进行实验，结果其平均回收率为97.42%，RSD为1.87%，说明该测定方法可行。结果见表1 。
       表1  加样回收实验结果（略）
       2.2   样品测定 分别精密量取对照品溶液及供试品溶液5 μl进样，以外标一点法计算含量，结果见图1～4及表2。
       图1  对照品色谱图（略）
       图2  回流提取法色谱图（略）
       图3  超声波提取法色谱图（略）
       图4  浸渍提取法色谱图（略）
       表2  不同提取方法含量测定结果（略）
       　　3  讨论
       3.1  实验结果表明，分别以盐酸巴马汀， 盐酸药根碱为指标成分，回流提取法含量均为最高，并且二者结果一致,故建议选用回流提取法。
       3.2   供试品溶液溶剂的选择单独以甲醇或水为溶剂均有溶剂峰干扰，以甲醇∶水=1∶1为溶剂，可有效消除干扰。
       3.3  流动相的选择以水乙腈（1∶1）为流动相，加1.7 g・L-1 十二烷基硫酸钠,用磷酸调至pH 3.0，基线稳定，可获得较好的分离效果，保留时间较适宜。
       　　参考文献：
       ［1］  中国医学科学院药物研究所. 新编中药志，Ⅰ部［M］. 北京：人民卫生出版社，2002： 287.
       ［2］  国家药典委员会. 中国药典［S］. 北京：化学工业出版社，2005：150.
       (郧阳医学院附属太和医院，湖北 十堰  442000)