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       【关键词】  忆美尔颗粒剂；,,正交实验法；,,异秦皮啶
       摘要：目的研究影响忆美尔颗粒剂制备的各种因素，确定最佳提取工艺条件。方法用正交实验L9（34）设计安排实验，分别以干浸膏、异秦皮啶含量为考察指标，优选忆美尔颗粒剂提取工艺。结果忆美尔颗粒剂最佳提取工艺为A1B3C2D3。结论该方法可用于忆美尔颗粒剂的工业化生产。
       关键词：忆美尔颗粒剂；  正交实验法；  异秦皮啶
       Investigation of the Extraction Procedure of Yimeier Granules
       LIU Yan, MEI Yan, XIE Wen
 
　　(Department of Pharmacy, Wuhan Children"s Hospital, Wuhan 430016, China)
       Abstract：ObjectiveTo investigate the factors that affect the production of Yimeier granules, and find the best procedure. MethodsAccording to the orthogonal design, the dry extract and the content of isofraxidin were fixed as the effective factors on improving the production procedure of the Yimeier granules. ResultsThe best procedure was designed by A1B2C2D3.ConclusionThe method can be used in industrialized production of Yimeier granules.
       Key words：Yimeier granules；  Orthogonal design；  Isofraxidin 
   
　　忆美尔颗粒剂系武汉市儿童医院经典药方，由刺五加、枸杞、远志、灵芝等9味中药组成，具有益肾填精、养心健脾、增智补脑的功效。经多年临床疗效观察应用证明，本品是一种能调节神经细胞、抑制神经细胞凋亡的中药复方制剂，能提高智力和改善记忆，对儿童弱智和老年痴呆有一定的疗效。根据临床经验表明，忆美尔方以汤剂入药效果最佳，该方原以汤剂为用，但汤剂在制备和使用上有诸多不便，故建议研制新制剂时做成与汤剂近似的口服液和颗粒剂。在研究过程中曾将其做成口服液和颗粒剂作疗效观察和实验比较，结果认为两种剂型的疗效相近。口服液剂由于太苦，使许多孩子难以接受，且澄明度不好控制，而采用提取浓缩干燥的干浸膏粉制成颗粒剂，工艺简捷，口感好，且服用、贮藏及运输均较方便，有着其他剂型难以比拟的优点。笔者以干浸膏收率和异秦皮啶含量为指标，采用正交实验法，优选了忆美尔颗粒剂的提取工艺。
       　　1  仪器与试药
       1.1   药品与试剂  异秦皮啶对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110837-200403）；忆美尔颗粒剂（武汉市儿童医院研究中心制，批号：20050623）；庚烷磺酸钠（东京化成工业株式会社）；甲醇、乙腈（色谱纯，德国Merck公司提供）；其他试剂均为分析纯；水为纯化水。本品所用中药材为市售，由湖北中医学院药学系张涛副教授鉴定，符合《中国药典》2005年版下的有关规定，均以饮片入药。
       1.2  仪器 Agilent1100高效液相色谱仪，包括G1311A-四元泵，G1322A-脱气机，G1316A-柱温箱，G1314A-UV紫外检测器，HP色谱工作站（美国惠普公司），Hypersil-C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；METTLER TELEDO AE204电子分析天平（瑞士）；79-1型磁力搅拌加热器（湖北黄石市医疗器械厂）。
       　　2  方法与结果
       2.1  实验设计影响提取工艺的因素主要有：加水量、提取时间、提取次数、醇沉浓度；将各因素设3个水平，按L9（34）设计正交实验。因素水平设计见表1。
       表1  因素水平（略）
       2.2  方法
       2.2.1  样品制备  按处方量称取药材共319 g，根据表1，选择L9（34）正交表进行实验，煎煮后合并提取液，醇沉24 h，挥去乙醇，浓缩并定容到100 ml，精密量取样品液25 ml，置于已干燥至恒重的蒸发皿中，水浴上蒸干后，置真空干燥箱中，60℃恒温减压干燥36 h到恒重，移至干燥器中，冷却30 min，迅速精密称定重量，计算即得。
       2.2.2  干浸膏中异秦皮啶含量［1~3］的测定色谱条件：Hypersil-C18柱（250 mm×4.6 mm，5μm）；流动相为乙腈-水相［0.05 mol・L-1磷酸二氢钾-0.05 mol・L-1庚烷磺酸钠（1∶1）］（18∶82）；流速1 ml・min-1；检测波长344 nm；柱温：30℃；进样量20 μl。对照品溶液的制备  精密称取异秦皮啶对照品5.0 mg，置50 ml量瓶中，甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，备用。标准曲线的制备  分别精密吸取对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml置10 ml瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。分别精密吸取各20μl分别进样3次，取其峰面积平均值与各浓度进行直线回归，以峰面积值（Y）为纵坐标，对照品进样浓度（X）为横坐标，得回归方程Y=2 335.7X-0.926（r=0.999 5）。结果表明：异秦皮啶在0.1～1.0μg范围内呈良好的线性关系。供试品溶液的制备  取本品装量差异项下的内容物，研细，取约10 g精密称定，置100 ml具塞锥形瓶中，加甲醇至刻度，具塞超声处理1 h，放冷，滤过，滤渣加少量甲醇洗涤2次，洗液与滤液合并，置圆底烧瓶中，回收溶剂至干。残渣加2.5 mol・L-1硫酸溶液40 ml，置水浴中加热2 h，稍冷，加氯仿30 ml，继续回流30 min，将水解液转移至分液漏斗中，分取氯仿液，酸液再用氯仿提取3次（20 ml/次），合并氯仿液，蒸干，残渣加甲醇5 ml溶解，加入预先填好的硅胶柱（内径1 cm，2 g，干法装柱），再用甲醇20 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干。残渣加甲醇使溶解，转移至10 ml量瓶中，并定容至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，作为供试液。另取不含刺五加的阴性样品适量，同法制成阴性对照品溶液，按上述色谱条件测定。结果表明阴性对照品无干扰。
       2.3  正交实验 选用L9（34）正交表进行正交实验，按处方量称取各药材，以干浸膏收率和干浸膏中异秦皮啶含量为考察指标。结果见表2~4。
       表2  正交实验结果（略）
       表3  方差分析（干浸膏收率）（略）
       以干浸膏得率为评价指标，由直观分析极差R知影响提取因素大小顺序为：DCAB，由方差分析结果知影响提取因素大小顺序为DCAB，选择A2B3C2D3较好；以异秦皮啶含量为评价指标，由极差R知影响因素提取大小顺序为：DBAC，由方差分析结果知影响提取的因素大小顺序为DBAC，选择A1B3C3D3较好；最后从节省时间和能源的角度考虑，选择提取的最佳条件为A1B3C2D3，即加10倍量水，提取2次，2.0 h/次，醇沉浓度为60%。
       2.4  提取工艺验证实验按处方称取药材饮片共3份，按最佳工艺提取，分别测定干浸膏的收率和干浸膏中异秦皮啶的含量及异秦皮啶的提取率，结果干浸膏的平均收率为21.65%，干浸膏中异秦皮啶平均含量为12.6 μg・g-1，可以认为提取得较为完全，按优选工艺提取其干浸膏收率和干浸膏中异秦皮啶的含量基本稳定，说明优选工艺基本可行。
       　　3   结论
       3.1  君药刺五加具有益气健脾、补肾安神益精壮骨之功效［4］，药理研究表明刺五加中的有效成分包括刺五加总皂苷、异秦皮啶、β谷甾醇、胡萝卜苷、紫丁香树脂醇苷等，其中异秦皮啶具有明显的镇静安神作用，故优选提取工艺时，以异秦皮啶为考察指标。在本品质量标准制定过程中曾测定了其游离异秦皮啶的含量，结果杂质较多，色谱峰分离不理想，根据其中含有结合型异秦皮啶，故测定总异秦皮啶更能反映产品的内在质量，这可能与结合性异秦皮啶在提取过程中的水解有关。本实验还比较了流动相Ａ∶乙腈∶0.1%磷酸(20∶80)；Ｂ:乙腈∶0.05 mol・L-1磷酸二氢钾(15∶85)；Ｃ:乙腈∶水相［0.05 mol・L-1磷酸二氢钾∶0.05 mol・L-1庚烷磺酸钠(1∶1)］(18∶82)，结果流动相Ｃ的分离效果最好。另据文献报道并经实验比较，采用2.5 mol・L-1硫酸水解，水解效果稳定。实验表明，水解2 h即可将结合型异秦皮啶完全水解,且氯仿提取4次后异秦皮啶即基本提尽，理论塔板数以异秦皮啶计算为2320，异秦皮啶与杂质峰的分离度大于1.5，分离度好，符合定量要求，实验结果理想。
       3.2  根据传统中成药制备工艺，煎前用水浸泡，经过实验可知，药材浸泡1 h后可达饱和吸水量的80%以上（经预实验药材吸水量约为药材重量4倍）。药材溶胀后，有利于有效成分的提取，故煎煮前先将药材浸泡1 h。
       3.3  干浸膏含水量应小于3.5%，否则，干浸膏细粉容易粘结，对制粒的影响很大。因此，在制粒前，应控制其含水量。
       　　参考文献：
       ［1］  周国平，张莉静.刺五加片中总异秦皮啶含量的高效液相色谱法研究［J］.中成药,2001,23(2):92.
       ［2］  易  毛,李  筠,刘  云,等.复方黄芪颗粒的薄层色谱鉴别研究［J］.中国新医药,2003,2(7):19.
       ［3］  简淑娟,翁雪芹.复方桔梗止咳片的薄层色谱鉴别［J］.广东药学,2001,11(6):29.
       ［4］  曹先兰,李珠莲.刺五加国外实验研究(综述)［J］.中草药,1980,11(6):277.
       (武汉市儿童医院  430016)