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       【关键词】  脑立轻胶囊
       摘要: 目的: 优选脑立轻胶囊提取工艺的最佳条件。 方法: 用正交设计法以方中君药葛根药材的主要成分葛根素的含量为指标，对其乙醇渗漉工艺及醇沉工艺进行筛选。 结果: 优选出脑立轻胶囊乙醇渗漉及乙醇沉淀工艺，重复实验结果满意。 结论: 脑立轻胶囊乙醇渗漉工艺最佳工艺条件为A2B1，C1D3即:取药材润湿6h，用8倍量的70%乙醇，以1ml/min的流速渗漉;醇沉工艺最佳工艺条件为A2B2C2，渗漉液浓缩1∶1，调60%乙醇醇沉18h。
       关键词: 脑立轻胶囊; 正交实验; 葛根素; 高效液相色谱法
   
　　the Study of the extraction of Nao Li Qing capsules
     
　　ZHANG X iao-yan， XIAO Y u-qing， LIANG X iao-xia， XIONG H ui
   
　　（People"s Hospital Affiliated to Yunyang Medical College，Hubei，Shiyan，442000，China）
    Abstract: Objective:To select a best condition of the extraction of Nao Li Qing capsules.Methods:The processes alcohol-extracted and alcohol-settled was conducted and investigated by testing the concentration of Puerarin as an index with the way of orthogonal design.Results:The best condition of The processes alcohol-extracted and alcohol-settled of Nao Li Qing capsules was acquired with a satisfactory result when it repeated.Conclusion:The seepage efficiency of A2B1C1D3by alcohol is the best condition，Which the soaking time was6hours with the seepage speed at1ml per minute by8times amount of alcohol（70%）;the best alcohol-settled condition was A2B2C2，Which the seepage solution has been extracted at the level of1∶1（solution:drug）for18hours by the method of60%alcohol settling. Key words: Nao Li Qing capsules; Orthogonal design; Puerarin; HPLC
   
　　脑立轻胶囊为我院中医科根据多年对脑血管病的临床治疗经验，结合中医理论和现代药理研究总结出来的协定处方，处方由葛根、银杏叶、淡大云、山茱萸、三七等中药组成。具有活血化瘀、扩张血管、增加血流量、改善微循环的作用。本院用于治疗血管性痴呆、慢性脑供血不足所致的头晕头痛，记忆力减退、高血脂等症效果显著。
   
　　药理实验研究证实，方中葛根药材、银杏叶药材中的黄酮类成分［1］ 有改善脑微循环，使处于异常状态的血管功能恢复［2］ ，改善学习记忆功能。因此，根据药物有效成分化学特性，将处方中葛根、银杏叶、山茱萸用乙醇渗漉提取工艺。采用可能影响提取效果的因数:乙醇浓度、渗漉速度、湿润时间、乙醇用量进行条件筛选，用L9 （34 ）正交表安排实验，在确定最佳乙醇渗漉工艺的基础上，对提取液进行醇沉处理。采用可能影响醇沉效果的因数:浓缩比例、醇沉浓度、醇沉时间进行条件筛选，为制备工艺的确立提供科学的实验依据。
       　　1 仪器与药品
    
　　1.1 仪器 GilsonGAD-E型高效液相色谱仪，118UV/Vis型检测器，712型数据分析仪;葛根素对照品（中国药品生物制品检定所，批号:752-200108）;乙晴、甲醇色谱纯;其余化学试剂均为分析纯;水为纯水。
    
　　1.2 试药 葛根、银杏叶、山茱萸、三七、肉苁蓉均购自十堰市药材公司。
    
　　2 实验方法和结果
       2.1 正交实验设计
       2.1.1 乙醇渗漉工艺 方中葛根、银杏叶共为君药起着发表解肌、活血化瘀的功效，葛根、银杏叶的主要活性成份为黄酮类、异黄酮、双黄酮等一类以黄酮为母核的化合物，一般多以苷的形式存在，并且葛根富含淀粉。所以，以葛根素的含量为指标，确定乙醇浓度、渗漉速度、湿润时间、乙醇用量为实验因素，每个因素备选3个水平。见表1。表1 乙醇渗漉工艺因素水平表（略）
        利用L9 （34 ）正交表安排实验，实验的方法为:按原方等比例称取银杏叶、葛根、山茱萸药材粉碎成粗颗粒，将葛根分放，按各因素水平的要求分别进行渗漉处理，收集渗漉液，过滤。滤液回收乙醇至无醇味后浓缩，浓缩至稠膏状后置于干燥箱中80℃干燥得干浸膏，称重。刮取干浸膏，磨成细粉，置干燥箱中保存备用。
       2.1.2 醇沉工艺
       以葛根素的含量为指标，确定醇沉浓度、浓缩比例、醇沉时间为试验因素，每个因素备选三水平。见表2。表2 醇沉工艺因素水平表（略）
       利用L9 （34 ）正交表安排实验，实验的方法为:按原方等比例称取银杏叶、葛根、山茱萸药材粉碎成粗颗粒，将葛根分放，以最佳渗漉工艺渗漉处理后，按醇沉工艺正交实验各因素的要求分别浓缩至适当的比例，另置。弃去葛根药渣，余药渣与淡大云同煎二遍（2h，1.5h），煎煮液过滤，浓缩，按醇沉工艺正交实验各因素的要求与上述渗漉浓缩液醇沉规定的时间，过滤。滤液回收乙醇至无醇味后浓缩，浓缩至稠膏状后置于干燥箱中80℃干得干浸膏，称重。刮取干浸膏，磨成细粉，置干燥箱中保存备用。 2.2 脑立轻胶囊中葛根素含量的高效液相色谱法测定
   
　　2.2.1 HPLC色谱条件
       流动相为甲醇-pH6.8磷酸盐缓冲液（23∶77）;检测波长250nm;灵敏度为0.06AuFS;流速为0.9ml・min
-1 ;进样量为20μl。在该条件下葛根素的保留时间为7.9min左右。
    
　　2.2.2 样品溶液的配制
       精密称取各工艺下的干浸膏粉0.5g，置50ml容量瓶中，加甲醇至刻度。超声提取20min，放冷至室温，加甲醇补足刻度，离心，取上清液1ml于10ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，的样品溶液。
    
　　2.2.3 样品液的含量测定
       精密取上述各工艺所制样品液20μl进样，在上述色谱条件下分别测定葛根素的含量，再计算各工艺所制备的干浸膏粉中葛根素的总量。
    
　　2.3 实验结果及分析
       按原方等比例称取银杏叶、葛根、山茱萸药材粉碎成粗颗粒，将葛根分放，按乙醇渗漉工艺正交实验中各因素水平要求分别进行实验。结果见表3，表4。表3 乙醇渗漉工艺葛根素总量分析（略）表4 醇沉工艺葛根素总含量分析（略）
        综上所述，在以葛根素总量为指标的乙醇渗漉工艺实验中，各因素的影响程度为:A>D>C>B，最佳工艺条件为A2 B 1C1 D3 。在以葛根素总量为指标的醇沉工艺实验中，各因素的影响程度为:A>B>C，最佳工艺条件为A2 B2 C2 。综合两方面实验结果提取醇沉工艺应定为:取药材润湿6h，用8倍量的70%乙醇以1ml/min的流速渗漉，渗漉液回收乙醇，浓缩至1∶1，调60%乙醇含量醇沉18h，过滤，取上清液，即可。
    
　　2.4 最佳工艺条件验证
       按原方等比例称取银杏叶、葛根、山茱萸药材粉碎成粗颗粒，将葛根分放，按最佳乙醇渗漉工艺，醇沉工艺的要求做验证。实验结果见表5。表5 验证实验（略）  
  
　　实验结果证实该工艺稳定可行。通过以上实验脑立轻胶囊提取工艺最后拟定为:按原方等比例称取银杏叶、80%葛根、山茱萸药材粉碎成粗颗粒，将葛根分放，取药材润湿6h，用8倍量的70%乙醇以1ml/min的流速渗漉渗，漉液回收乙醇，浓缩至1∶1，另置。弃去葛根药渣，余药渣与淡大云同煎二遍（2h，1.5h），煎煮液过滤，浓缩一定比例与上述渗漉浓缩液调含60%乙醇量醇沉18h，过滤。滤液回收乙醇至无醇味后浓缩，浓缩至稠膏状后于过100目筛的三七、20%葛根粉混合，置于干燥箱中80℃干燥，充分干燥后磨成细粉，制粒灭菌，充填，即得脑立轻胶囊。
    
　　3 讨论
    
　　本实验将乙醇渗漉与沉淀分开进行正交实验考察，并且设计了验证实验，使得到的结果更加可靠。从表3得知，在乙醇渗漉工艺中以葛根素的总量为综合评定指标时，A因素影响较D、C因素显著，B因素最小（RA>RD>RC>RB）。
   
　　从表得知，在醇沉工艺中以葛根素的总量为综合评定指标时，A因素影响较B因素显著，C因素最小（RA>RB>RC）。
   
　　曾试用2000年版Ⅰ部《中国药典》“葛根”项下的流动相甲醇-水（25∶75）［3］ ，结果峰型不对称，分离不完全，且理论塔板数低。
   
　　经过查阅资料［4，5］ 、多次实验，本实验选用甲醇-pH6.8的磷酸盐缓冲液（27∶73）为流动相，检测结果均达到要求。样品处理中采用了简单的甲醇超生提取操作过程。本法与目前报道的同类方法相比，具有试剂用量小，效率高，操作简便快捷，周期短等优点，适合批量样品的含量测定。
       　　参考文献:
    
　　［1］ 郑俊华.生药学，第3版［M］.北京:人民卫生出版社，2001:159-159.
        ［2］ 郑虎占，董泽宏，佘 靖.中药现代研究与应用［M］.北京:学苑出版社，1998:578-1588，4319-4328.
        ［3］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社，2000:273-273.
        ［4］ 张 伟，栗晓黎，田今政.高效液相色谱法测定鼻炎胶囊中葛根素的含量［J］.药物分析杂志，1994，14（4）:43-44.
        ［5］ 刘东春，段 军，邓世新.HPLC法测定白石清热冲剂中葛根素的含量［J］.沈阳药科大学学报，1999，16（3）:212-212.
       作者简介: 张晓燕（1970-），女（汉族），湖北十堰人，现任郧阳医学院附属人民医院主管药师，学士学位，主要从事中药制剂工作.
       （郧阳医学院附属人民医院，湖北十堰 442000）
       收稿日期: 2005-01-10