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       【关键词】  复方荭草冻干粉针剂；,,心肌；,,心肌梗塞；,,心肌供氧
       摘要：目的观察复方荭草冻干粉针剂对麻醉犬冠状动脉前降支结扎所致急性心肌梗塞的保护作用。方法结扎麻醉犬左冠状动脉前降支(LAD)造成急性心肌梗塞模型，测定犬心肌供氧量参数、心肌缺血程度与缺血范围、心肌梗塞面积及血清LDH，CK的变化。结果复方荭草冻干粉针剂能增加心肌供氧量，减轻心肌缺血程度和范围，缩小心肌缺血面积，降低血清肌酸激酶(CK)及乳酸脱氢酶(LDH)活性。结论 复方荭草冻干粉针剂对急性心肌梗塞具有一定的保护作用。
       关键词：复方荭草冻干粉针剂；  心肌；  心肌梗塞；  心肌供氧
       The Protective Effects of Compound Hongcao Freeze-dried Powder Injection on Experimental Acute Myocardial Infarction in Anaesthetized Dogs in vivo
       SHEN Xiangchun, TAO Ling,WANG Yonglin, FANG Taihui
       （Guiyang Medical College , Guiyang 550004,China; Nanjing University of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210029,China）
       Abstract：ObjectiveTo investigate the protective effects of Compound Hongcao Freeze-dried Power Injection on experimental acute myocardial infarction (AMI) in anaesthetized dogs. MethodsThe model of acute myocardial infarction was established by occlusion of left anterial descending artery of myocardium in dogs, and the oayen supply, myocadial infarction area and the activities of LDH, CK in serum were measured. ResultsIn dogs treatment with Compound Hongcao Freeze-dried Powder Injection ( in the dosage of 2.4,4.8 g/kg ), the myocardium oxygen delivery, degree and of myocardial ischemia , myocardium infarction size, and the activities of serum CK, LDH significantly dereased in acute myocardial infarction dogs. ConclusionCompound Hongcao Freeze-dried Power Injection possesses the protective effect on myocardial ischemia.
       Key words：Compound Hongcao Freeze-dried Powder Injection;  Myocardium;  Myocardial infarction;  Myocardium oxygen delivery
   
　　复方荭草冻干粉针剂(FuFangHongCao Freeze-dried Power Injection，FFHCFPI)是由贵州省黔南、黔东南苗族布依族自治州及遵义地区民间用于治疗胸痹心痛、气短的研制而成，原处方由荭草与灯盏细辛组成。贵阳医学院药剂学教研室根据传统医药理论结合现代医药学知识，进行效应物质部位群药理活性筛选精制而成。其主要效应成分为荭草所含有的荭草素、异荭草素等黄酮类物质［1，2］。前期的药理研究提示，复方荭草冻干粉针剂对离体兔心灌流及重体后叶素所致大鼠心肌缺血具有一定的保护作用［3，4］。本实验通过结扎麻醉犬冠状动脉前降支，研究其对急性心肌梗塞的保护作用，为其深入研究开发和临床应用提供药理学实验基础。
       1  器材
       1.1  药品与试剂复方荭草冻干粉针剂为棕黄色粉末100 mg/支，（9 g生药/支），由贵阳医学院药剂教研室提供，实验前用0.9%的氯化钠注射液配制成所需浓度。复方丹参注射液，规格：2 ml/支（4 g生药/支），上海第一生化药业公司上海第一制药厂生产。乳酸脱氢酶(LDH-L)试剂盒、肌酸激酶(CK)试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司；红四氮唑（TTC），上海试剂三厂。
       1.2  动物 杂种犬，30只，体重7~10 kg，雌雄兼用，由南京中医药大学实验动物中心收购，实验前在该中心驯养，经检疫及驱虫后，用于该项实验。
       1.3  仪器  RM-6000八道生理记录仪及附件，日本NIHON KOHDEN公司。OM.MFV3100/3200电磁流量计，日本NIHON KOHDEN公司。DH140人工呼吸器，浙江医科大学医学仪器实验厂。
       　2  方法
       2.1  方法由前肢皮下头静脉用3％戊巴比妥钠(30mg/kg)麻醉后，将犬固定于手术台将针状电极插入犬四肢皮下，记录心电图(ECG)，分离气管并插入气管插管。分离股静脉插入静脉插管以备给药；于左侧第四五肋间开胸，打开心包膜，缝于胸壁，做成荷包摇篮。暴露右心耳，用心耳钳夹住右心耳，作一荷包缝口，将缝线穿于一小段橡皮管内，用小钢丝将线勾入橡皮管，于荷包口中心剪一小口，迅速插入冠状窦插管。插管的远端连接一三通管以备取血。用0号丝线结扎左冠状动脉前降支中下1/3处，假手术组只穿线不结扎。选择梗塞区附近位置12个标测点，并在远离梗塞区选一对照点，用手持绝缘金属点状电极按标测点顺序进行标测，经传感器（JB-642G）、放大器（AB-621G），用八道生理记录仪记录心外膜电图（EECG）［3~5］。结扎15 min后经股静脉恒流泵恒速给药(1 ml/min)。记录结扎前、结扎15 min和给药后10，15，30，45，60，90，120 min的EECG。统计各标测点EECG的ST段偏移Σ-ST，以及ST段抬高≥2 mV以上的N-ST。各组于给药60 min后，左心室取血测动脉血氧，冠状窦处取血测冠状窦血氧，两者氧差反映心肌供氧；各组分别于结扎前，结扎15 min，给药60 min后股静脉取血，用试剂盒测定血清CK，LDH值。实验进行至180 min结束后，立即取出心脏，用生理盐水洗去血液后，称取全心重和心室重量，并把心室横切成5片，置于37℃ 1％TTC溶液中染色15 min，剪去各心肌片被染色的非梗塞区，把未染色的梗塞区心肌称重，除以全心重或心室重分别得到梗塞范围占全心重或占心室重的百分率，此即心肌梗塞面积［8］。
       2.2  分组与给药犬30只，随机分为6组，每组5只动物。 (1) 假手术组：等容积生理盐水；(2) 模型组：等容积生理盐水；(3) 阳性对照组，复方丹参注射液：2 g /kg(生药量，下同)； (4) 复方荭草冻干粉针剂Ⅰ组(FFHC Ⅰ)：1.2 g /kg；(5) 复方荭草冻干粉针剂Ⅱ(FFHC Ⅱ)：2.4 g/kg；(6) 复方荭草冻干粉针剂Ⅲ(FFHC Ⅲ)：4.8 g/kg。药物溶于0.9%氯化钠注射液中配成所需浓度，给药容积为2 ml/kg。
       2.3  统计方法所有资料采用student-t检验；P<0.05为差异具有显著性，P<0.01差异具有极显著性。
       3  结果
       3.1  复方荭草冻干粉针剂对麻醉犬冠状动脉结扎所致心肌梗塞面积的影响结果表明，复方荭草冻干粉针剂高、中剂量组，明显减少麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞范围，与正常组比较有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。结果见表1。
       表1  复方荭草冻干粉针剂对麻醉犬冠状动脉结扎所致心肌梗死面积的影响（略）
       与假手术组比较，## P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，** P＜0.01；n=5
       3.2  复方荭草冻干粉针剂对麻醉犬冠状动脉结扎所致动静脉PO2，PCO2 分压差和血清CK，LDH的影响复方荭草冻干粉针剂高、中剂量组，可以明显提高麻醉犬冠脉结扎后心肌的供氧；减少麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞后血清中CK，LDH的活性，与模型组比较有显著性差异（P<0.05， P<0.01）具有一定的量-效关系。结果见表2~3。
       3.3  复方荭草冻干粉针剂对麻醉犬冠状动脉结扎所致急性心肌梗塞心外膜电图的影响复方荭草冻干粉针剂高、中剂量组可降低麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞Σ-ST，N-ST，部分时间点与模型组比较差异显著(P<0.05，P<0.01)，表明复方荭草冻干粉针剂能明显减轻急性心肌梗塞程度与范围。结果见表4~5。
       表2  复方荭草冻干粉针剂对麻醉犬冠状动脉结扎所致心肌梗塞血清CK，LDH的影响（略）
       与假手术组比较， ##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=5
       表3  复方荭草冻干粉针剂对麻醉犬冠状动脉结扎所致心肌梗塞动静脉血氧分压差( PO2)，二氧化碳分压差（略）
       与假手术组比较，#P＜0.05；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=5
       表4  复方荭草冻干粉针剂对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞Σ-ST的影响（略）
       与假手术组比较，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=5
       表5  复方荭草冻干粉针剂对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞N-ST的影响（略）
       与假手术组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=5
       4  讨论
       各种病因所致局部冠状动脉狭窄或冠状动脉闭塞血流中断，形成心肌缺血或心肌梗塞，其他冠状动脉分支代偿性扩张和开放，可使心肌缺血或心肌梗塞得到缓解，但当心肌发生大面积缺血和广泛性梗塞且这种代偿能力“得不偿失”时，则造成心肌坏死和不可逆损伤，发生生命危险［9］。目前的研究结果提示，急性心肌梗塞后，各项心功能指标改变和恢复的程度、速度均与心肌梗塞范围相关。左心室心肌梗塞范围愈大，左心室舒缩性能愈明显降低，其预后愈差［10］。因此，缩小心肌梗塞后梗死范围是评价抗心肌缺血药物的主要疗效指标之一。在定量组织学方法测定心肌梗塞范围的研究中，多采用梗塞区占心室或全心百分比来反映梗塞范围的大小。TTC染色法依据正常细胞具有脱氢酶可以使其还原为红色，而梗死的细胞由于细胞膜损伤脱氢酶释放而不被染色，因此能较明显地区分心肌梗塞区域。本实验采用TTC大体标本染色定量测定心室梗死重量，实验结果证实复方荭草冻干粉针可明显缩小冠脉结扎犬的心肌梗塞范围，与假手术比较差异显著，且具有一定的量效关系。分段氧的供需平衡是维持心功能的前提条件，是心功能能否恢复正常的标志［11,12］；本实验中，采用动脉血与冠状窦的氧分压差表示心肌的氧的供应；研究结果提示，模型组的心肌氧的供应明显减少，与假手术比较差异显著，而复方荭草冻干粉针2.4，4.8 g/kg剂量组均可以明显增加心肌氧的供应。冠状动脉结扎导致心肌细胞的缺血，最终导致缺氧，糖的有氧氧化受阻，ATP生成显著减少，离子梯度紊乱，膜稳定性降低，从而导致酶的外漏［13］。严重缺氧时溶酶体肿胀破裂，致使大量溶酶体酶释出，导致心肌细胞及其周围组织溶解、坏死［14］。肌酸磷酸激酶（CK）和乳酸脱氢酶（LDH）释放入血，因此CK，LDH是评价心肌缺血损害程度的非常重要的客观指标［13］，其升高程度与心肌损害程度相平行，通过测定血中CK及LDH活性，可间接推测心肌梗塞面积大小与程度［15］。本实验结果表明急性心肌梗塞犬血清LDH及CK的活性明显升高，而复方荭草冻干粉针剂明显降低其活性，提示复方荭草冻干粉针可以阻止胞质中存在浓度很高的一些酶的大量溢出，在一定程度上减轻了细胞膜损伤程度，起到稳定溶酶体膜的作用，因此抑制了胞内酶的释放，改善心肌代谢，这可能是其抗心肌缺血的重要机制之一。心外膜心电图已成为心血管药理研究中一种常用方法，心电图上Σ-ST表示心肌损伤程度，N-ST表示心肌损伤范围［16］。本研究结果提示，冠状动脉结扎后15 min，各组心外膜电图Σ-ST与N-ST即明显升高，提示心外膜电图的确是反映急性心肌梗塞的敏感指标，复方荭草冻干粉针对Σ-ST与N-ST均具有一定的改善作用。以上实验结果提示，复方荭草冻干粉针剂对急性心肌梗塞的各项指标具有明显的改善作用，可能是其治疗胸痹心痛的药理学基础；为复方荭草冻干粉针剂的临床研究与应用奠定了实验依据。其治疗心肌梗塞的的作用机制有待于进一步探讨。
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　　基金项目：贵州省中药现代化基金项目(No.200403)
       (贵阳医学院，贵州 贵阳  550004；南京中医药大学，江苏 南京  210029）