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       【关键词】  动脉粥样硬化；,,正交实验设计；,,复方水蛭胶囊
       摘要：目的探讨复方水蛭胶囊组方单因素效应、量-效关系以及可能存在的交互作用。方法以高脂喂饲结合腹腔注射维生素D3制备动脉粥样硬化大鼠模型，应用正交实验设计，组方各因素取两水平，以血清NO、ET作为观察指标。结果组方中赤芍、丹参、山萸肉用1水平时可提高NO水平，随用量增加NO水平下降；水蛭、黄芪、降香、红花、郁金随用量增加NO水平升高。降香可降低ET水平，随用量增加效应提高；水蛭一般用量时可明显降低ET水平，但随用量增加效应降低。对NO和ET的影响水蛭与黄芪存在交互作用，同时使用可明显提高NO水平、降低ET水平，两者用量比例以1∶1.5为宜。结论复方水蛭胶囊能提高NO水平、降低ET水平而调节血管内皮功能。
       关键词：动脉粥样硬化；  正交实验设计；  复方水蛭胶囊
       Singlefactor Analysis on Effect of Compound Shuizhi Capsule in Preventing and Treating Atherosclerosis
       GUO Guangye, ZHEN Caihua, ZHAO Jianfeng, TANG Jing, LUO Hua, LIU Jinli
       (Shijiazhuang TCM Hospital, 050051, China; College of TCM Integrated with Western Medicine, Hebei Medical University, Shijiazhuang, Hebei 050091, China)
       Abstract：ObjectiveTo explore the single-factor effect of Compound Shuizhi capsule, the dose-effect relationship and the possible interaction of various factors in the compound.MethodsRat model of atherosclerosis was prepared by feeding high-fat and intraperitoneal injection of VD3. Orthogonal experiment designs were used and every factors took two levels with NO and ET as observatory indicators.Results1 level of Chishao, Danshen and Shanyurou could increase NO level, while the NO level reduced with the increasing dosage of them. The level of NO was heightened with the increasing dosage of Shuizhi, Huangqi, Jiangxiang, Honghua, Yujin. Jiangxiang could reduce the ET level, and its effect was enhanced with the increasing dosage. Shuizhi, in its general quantity, could obviously reduce the ET level, while the large dosage of it caused the weaker effect. Huangqi interacted with Shuizhi in the effect on NO and ET. Huangqi and Shuizhi used at the sametime could significantly increase the NO level and reduce the ET, and the best proportion of dosage was 1 to 1.5.ConclusionCompound Shuizhi capsule can regulate the blood vessel endothelial function by increasing the NO and reducing the ET level.
       Key words：Atherosclerosis;  The orthogonal experiment designs;  Traditional Chinese medicine and pharmacology
   
　　复方水蛭胶囊系石家庄市中医医院名老中医治疗冠状动脉粥样硬化性心脏病传统组方，在气虚血淤为冠心病心绞痛主要发病机理的中医学术思想指导下立法组方，具有益气填精、化淤通络功效，经过数十年临床应用，疗效确切。本研究旨在通过动物实验的方法，应用正交实验设计探讨组方药物单因素效应及量效关系，以完善组方。
       1  材料与方法
       1.1  材料
       1.1.1  动物选用Wistar大鼠90只，雌性，清洁级，体重180~200克，合格证编号DK0508067，由河北省实验动物中心提供。
       1.1.2  药品维生素D3注射液（江苏吴中实业股份有限公司苏州第六制药厂，产品批号050314）；胆固醇（河北博海生物工程有限公司，批号20050628）；胆酸（河北博海生物工程有限公司，批号20050708）；丙硫氧嘧啶（上海复星朝晖药业有限公司、生产批号20050602）。
       1.1.3  试剂与仪器一氧化氮（NO）试剂盒，硝酸还原酶法（南京建成生物工程研究所）；血浆内皮素（ET）采用平衡法（试剂盒购自天津九鼎医学生物工程有限公司）。BFX5320型医用低速离心机（白洋离心机厂）；XH6020C 四探头全自动Y免疫计数器（西安国营二六二厂）；TOSHIBA TBA40FR全自动生化分析仪。
       1.2  方法
       1.2.1  正交实验设计复方水蛭胶囊组成（因子）及各因子水平：A：水蛭10 g；B：黄芪15 g；C：山萸肉10 g；D：丹参15 g；E：川芎10 g；F：赤芍10 g；G：当归10 g；H：郁金10 g；  I：红花10 g；J：降香6 g。各因子取两水平，即1水平（L1）和2水平（L2）。以上用量为L1；各因子L2为以上各剂量的3倍。考虑水蛭和黄芪存在交互作用（A×B）。
       表1  正交设计（略）
       1.2.2  大鼠食饵性动脉粥样硬化模型建立将大鼠饲养于塑料大鼠笼内，室温控制在 15～25℃，自然采光，饮用自来水，自由进食，适应性喂养1周，随机取6只作为空白对照，其余大鼠制备模型。空白对照组喂食基础饲料；模型组喂食高脂饲料（3%胆固醇、0.5%胆酸钠、0.2%丙基硫氧嘧啶、5%白糖、10%猪油、81.3%基础饲料）。造模开始一次性腹腔注射维生素D3 60万IU/kg，对照组给予等体积生理盐水，造模时间共6周。取模型大鼠6只作为模型对照；其余随机分为12组作为中药观察组，每组6只。第7周开始中药组按2 ml/只，依次灌喂1～12号实验药物；模型组、空白对照组分别以等容积生理盐水灌胃，1次/d，共6周。观察、记录动物生长与进食情况，每周测体重。第12周末禁食12 h，断头取血分离血清备检。
       1.2.3  观察指标一般情况观察；一氧化氮（NO）；血浆内皮素（ET）。
       2  结果与分析
       2.1  一般情况观察空白组大鼠毛色光泽，活动自如，活泼，饮食正常。模型组与中药组开始体重增长较快，皮下脂肪厚，但随实验进程，毛发色泽暗淡，活动减少，精神状态较差，进食量减少；给药之后，中药组明显好于模型组。通过观察发现灌胃之前舌质紫暗，给中药1周后大多数动物舌质变淡红。说明复方水蛭胶囊确能改善血液循环状态。
       2.2  各因素对NO的影响组方中各药用1水平即用一般量时对NO的效应依次为：赤芍、丹参、山萸肉、水蛭与黄芪同时使用，当归、川芎、郁金、红花、降香。其中赤芍、丹参、山萸肉，水蛭与黄芪同时使用作用比较明显。从量效关系看：降香、红花、郁金随用量增加NO水平提高；赤芍、丹参、山萸肉随用量增加NO水平降低；川芎,当归对NO则无明显影响。结果见表2。
       表2  复方水蛭胶囊各因素对NO影响的正交实验结果与直观分析（略）
       因此，临床当以提高NO为目的时可以选用赤芍、丹参、山萸肉、水蛭与黄芪同时使用，但用量不宜大，取一般量即可。如果选用降香、红花、郁金则应适当加大用量。
       2.3  各因素对ET的影响组方中各药对ET的影响多不明显，加大用量后即2水平时，其效应大多也未明显增加。其中只有水蛭和降香两味药效应比较明显，降香随用量增加效应提高，而水蛭则小量时即有明显的影响，随用量增加效应反而降低。组方中其他药物虽然也有一定的作用，但意义不大。结果见表3。
       表3  复方水蛭胶囊各因素对ET影响的正交实验结果与直观分析（略）
       因此临床上单纯以降ET为目的时，可以选用降香、水蛭，水蛭用一般量即可，而降香用量可适当增加。
       2.4  对NO，ET综合效应在组成固定处方时对NO和ET的影响综合考虑，因此将对NO，ET效应相加为综合效应。其中降香、水蛭、黄芪、红花、郁金、川芎随用量增大其效应也增加，其中降香、水蛭、黄芪、红花、郁金较有意义，因此在临床选用时可适当加大用量。而川芎量效虽然也表现出正效应，但意义不大，考虑药物的副作用，应以一般量为好。赤芍、丹参、山萸肉、当归量效关系则表现为负效应，随用量增大其作用反而降低，因此临床应用时不应盲目增加用量，否则不但不能收到预期的效果，反而增加副作用的发生机率。结果见表4。
       表4  复方水蛭胶囊各因素对NO，ET影响的综合效应分析（略）
       表中数据为“基础效应”；各因子基础效应=（各因子试验均数－模型均数）/模型均数×100；模型组NO均数=16.40，ET=396.78
       2.5  水蛭和黄芪对NO和ET影响的交互作用水蛭和黄芪存在交互作用，见表5。
       表5  水蛭和黄芪对NO和ET影响的反应作用分析（略）
       从交互作用看，无论是对NO还是ET的影响，水蛭和黄芪都取同一水平最好。也就是说二者用量要有一定的比例，保持平衡，体现了中医药性的气血关系。从量效关系看，对NO的影响随二者用量的增加NO水平提高；对ET的影响其量效关系不明显。因此，如果临床以提高NO水平为目的，或者考虑综合效应，则可适当加大水蛭、黄芪的用量；只考虑ET时则用一般量即可。
       　　3  讨论
       冠心病心绞痛属于祖国医学“胸痹”“心痛”的范畴。临床表现为胸部闷痛，痛有定处，常遇劳而发，多伴有心悸气短等症。本病多见于中老年人，“年四十，阴气自半”，心肝肾亏损，气血渐衰，行血无力，血脉淤滞，心络痹阻。因此我们认为本病的基本病机为气虚血淤，以气虚为本，血淤为标，据此组成的复方水蛭胶囊具有补气填精、化淤通络的作用。内皮细胞功能障碍参与冠心病的发生、发展和转归整个过程。改善或逆转内皮细胞功能障碍，是防治冠心病重要目标之一。目前，测试内皮功能常用的指标有ET，NO，TXB2，6-Keto-PGF1α等。NO具有扩张血管、保护内皮、防止多种血细胞对内皮的黏附和损伤、抑制血小板活化聚集、抗血管平滑肌细胞增殖等作用；ET则具有与之相对的生理效应，如收缩血管、促使血小板黏附聚集、促进平滑肌细胞增殖等作用。NO和ET之间的平衡是体循环调节和局部血流灌注的主要决定因素。本研究显示，复方水蛭胶囊组方可显著降低ET并升高NO含量，调节ET/NO的平衡，恢复血管内皮的功能，使机体内环境的失调状态趋于正常，从而达到“阴平阳秘”的状态，阻止或延缓动脉粥样硬化的发展。正交实验设计是一种处理多因素，多水平的实验方法，通过对试验数据的分析可以了解每一味药在复方中的作用。结果表明，复方水蛭胶囊组方能通过提高NO，降低ET水平而调节血管内皮功能。对NO的影响以赤芍、丹参、山萸肉、水蛭与黄芪同时使用作用比较明显，临床当以提高NO为目的时可以选用赤芍、丹参、山萸肉、水蛭与黄芪同时使用，但用量不宜大，取一般量即可。如果选用降香、红花、郁金则应适当加大用量。对ET的影响则以水蛭和降香两味比较明显，降香随用量增加效应提高，而水蛭则小量时即有明显的影响，随用量增加效应反而降低。因此临床上单纯以降ET为目的时，可以选用降香、水蛭，水蛭用一般量即可，而降香用量可适当增加。如果临床需要在提高NO同时降低ET的综合作用，则选用降香、水蛭、黄芪、红花、郁金，并可适当增加用量。水蛭与黄芪存在交互作用，二者用量以1∶1.5效果较好。
       基金项目：河北省中医药管理局资助项目（No.05060）
       (河北省石家庄市中医医院  050051；河北医科大学中西医结合学院，河北 石家庄  050091)