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       【关键词】  天山岩黄芪根;,,多糖含量;,,分光光度法
       摘要：目的研究天山岩黄芪根中多糖的含量。方法采用分光光度法测定天山岩黄芪根中多糖的含量，以葡萄糖为对照品，以苯酚-浓硫酸为显色剂，在486 nm处测定样品溶液的吸光度。结果标准曲线为A=51.654C + 0.037 2，r=0.999 8，RSD为 1.28%，1.50%。结论该方法操作简单，灵敏度高。
       关键词：天山岩黄芪根;  多糖含量;  分光光度法
       Determination of the Polysaccharide in the Roots of Hedysarum semenovii Regelet Herd
       Hailiqian・Taoerdahong, SUN Lian, ABUDOUXUKUER Tuerxun, HE Yan
       (Xinjiang Medical Univesrsity,Urumqi, Xinjiang 830054,China)
       Abstract:ObjectiveTo study the quantity of Polysaccharide in the roots of Hedysarum semenovii Regelet Herd. MethodsUses method in spectrophotometric to determine the Polysaccharide in the roots of Hedysarum semenovii Regelet Herd.Take the glucose as the comparison, take the phenol - strong sulfuric acid as the developer, λ= 486nm determination sample solution attracts the luminosity.  ResultsThe standard curve was A=51.654C+0.037 2,r=0.999 8, RSD was 1.28% and1.5%(n=5).  ConclusionThis method is simple,sensitive and accurate.
       Key words:Hedysarum semenovii Regelet Herd;  Polysaccharide;  SX-spectrophotometry
   
　　豆科岩黄芪属植物，具有补气固表、利尿托毒、排脓、敛疮生肌之功能［1］。现代药理研究证明其有强心、利尿、降压、护肝、抗肾炎和提高免疫等作用。该属植物化学成分较复杂，其中具有生物活性的成分有多糖、木质素类、黄酮类化合物、香豆苯醚类、生物碱类、皂苷类、甾体类、氨基酸、微量元素等众多的生物活性物质［2~8］。天山岩黄芪Hedysarum semenovii Regelet Herd为豆科(Leguminosea)岩黄芪属(Hedysarum Linn.)植物，分布于新疆乌鲁木齐、伊犁、阿勒泰、塔城等地区，经过调研和文献查新得知，对天山岩黄芪中多糖的提取及含量测定未见报道。因此，为了资源开发，我们首次对天山岩黄芪中多糖的提取及含量测定进行研究。多糖不仅是机体的重要组成部分，还具有提高机体免疫 、抗菌、抗病毒、抗衰老 、抗肿瘤、抗突变、降血脂、降血糖、防辐射以及改善动物生产性能等多种生物活性，同时由于它自身对细胞毒性极小，对正常细胞影响很小，因此多糖作为药物对于治疗多种免疫缺损疾病和自身免疫疾病有显著的效果。为此，我们采用可见分光光度法对天山岩黄芪根中多糖的含量进行了测定，为今后进一步地研究、开发该药用植物资源提供参考。
       　1  材料与试剂
       1.1  样品来源天山岩黄芪6月份采自新疆乌鲁木齐东山区，采后洗净，晾干，60℃烘干，粉碎后过60目筛备用。
       1.2  仪器与试剂SX721分光光度计(上海第三分析仪器厂)，紫外分光光度仪，超声仪(SK8210HP)，水浴锅，酒精计，漏斗，分液漏斗，无水葡萄糖，苯酚分析纯，浓硫酸，95%乙醇，氯仿，正丁醇，活性碳。
       2  方法与结果
       2.1  多糖的提取与精制［9,10］天山岩黄芪根粉100 g加水适量超声提取3次，30 min/次，过滤，合并滤液，浓缩，加95%醇至含醇量为80 %，静置过夜（4℃），过滤，分离出沉淀，加适量水溶解，加95%醇至含醇量为80 %，再静置过夜（4℃），过滤，分离出沉淀，加水溶解，除蛋白（氯仿∶正丁醇=4∶1），共除20次，加活性炭脱色，抽滤，加95%醇至含醇量为80%，静置过夜（4℃，过滤，分离出沉淀，冷冻干燥得多糖（0.505 1g），密封备用。
       2.2  溶液的制备
       2.2.1  葡萄糖标准溶液的制备精密称取105℃干燥至恒重的葡萄糖0.1 g，置100 mg容量瓶中，加蒸馏水至刻度，再精密吸取10 ml于另一容量瓶中，再加蒸馏水至刻度，摇匀备用，得0.1 mg/ml的葡萄糖标准溶液。
       2.2.2  苯酚溶液的制备称取苯酚100 g，加锌片0.1 g，NaHCO3 0.05 g，蒸馏，收集182℃馏分，称取此馏分5 g，加蒸馏水95 ml，置棕色瓶中备用，得浓度为5%的苯酚溶液。
       2.2.3  天山岩黄芪多糖液的制备精密称取干燥至恒重的天山岩黄芪多糖0.1g，置100mg容量瓶中，加蒸馏水至刻度，再精密吸取10ml于另一容量瓶中，再加蒸馏水至刻度，摇匀备用，得0.1mg/ml的天山岩黄芪多糖溶液。
       2.3  最大吸收波长的选择分别配制0.1 mg/ml的葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖、甘露糖、醛糖溶液，分别精密吸取1 ml于具塞试管中，分别加苯酚试液1 ml，摇匀，迅速加浓硫酸5 ml，振摇2 min后，旋转于沸水浴中加热15 min，取出置冷水中冷却置室温，以苯酚-浓硫酸溶液为空白，用紫外分光光度仪在400~800 nm范围内，扫描光谱图，得上述糖溶液的最大吸收分别为486，488，479，488，479 nm。以同样的方法处理天山岩黄芪多糖样品溶液，在486 nm处有最大吸收。
       2.4  葡萄糖标准曲线的绘制分别精密吸取配制的0.1 mg/ml的标准溶液0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0 ml于具塞试管中，分别加蒸馏水1.0，0.8，0.6，0.4，0.2，0 ml，分别给试管编号。分别加苯酚试液1 ml，摇匀，迅速加浓硫酸5ml，振摇2 min后，旋转于沸水浴中加热15 min，取出置冷水中冷却置室温，以苯酚-浓硫酸溶液为空白，于486 nm处测吸光度,得回归方程A=51.654C+0.037 2，r=0.999 8（n=5），线性关系较好。
       2.5  测定换算因子f精密称取已干燥至恒重的天山岩黄芪多糖4.048 mg于100 ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，得多糖供试品溶液。精密吸取该溶液2 ml，按“标准曲线”项下操作，测定486 nm处的吸光度为2.932 2，由回归方程计算供试品中葡萄糖的含量为0.056 mg/ml，按下式计算f。f=w/c,式中w为供试液中天山岩黄芪多糖的量（4.048 mg），由公式得f=3.614（n=3）。
       2.6  样品中多糖的含量测定精密称取样品1 g于100 ml容量瓶中，加水适量，80℃超声提取30 min，加水至刻线，吸取2 ml于具塞试管中，按“标准曲线”项下的操作，测定486 nm处的吸光度。多糖（%）=CDf/w×100%（C：样品溶液中葡萄糖的浓度；D：样品溶液的稀释倍数；f：换算因子；w：样品的质量；），由公式得多糖平均含量为7.35%。
       2.7  精密度实验精密吸取葡萄糖对照品溶液（0.1 mg/ml）0.4 ml，5份，天山岩黄芪多糖供试液（0.1 mg/ml）0.4 ml，5份，按“标准曲线”项下的操作，分别测定486 nm处的吸光度，计算得RSD1= 1.28%，RSD2=1.50%。
       　3  讨论
       通过对天山岩黄芪根中多糖的含量测定，可知其中多糖含量在5.23%～9.13%之间，可见用分光光度法测定天山岩黄芪根中多糖的含量是可行的。本方法稳定可靠，简单易行。本实验可为天山岩黄芪的产品开发提供一定的理论依据。
       　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：104.
       ［2］  海力茜,梁  鸿,赵玉英,等.多序岩黄芪化学成分研究［J］.中国中药杂志,2002,27(11):843.
       ［3］  海力茜,张庆英,梁  鸿,等.多序岩黄芪化学成分研究［J］.药学学报, 2003, 38 (8):592.
       ［4］  海力茜,张庆英,赵玉英,等.多序岩黄芪化学成分研究［J］.中国中药杂 志,2004,29(5):432.
       ［5］  徐建军,海力茜，王小青,等.新疆红芪化学成分研究［J］.华西药学杂志，2005,20(3):214.
       ［6］  海力茜，张  ，徐建军,等. HPLC法测定新疆红芪中芒柄花素的含量［J］.华西药学杂志，2005,20(3):214.
       ［7］  徐建军，海力茜，凯赛尔.新疆红芪化学成分研究［J］.华西药学杂志，2006,21(1): 47.
       ［8］  王小青,海力茜，帕丽达,等.天山岩黄芪不同部位中总黄酮含量的测定［J］.新疆师范大学学报，2006,58(25)：49.
       ［9］  江蔚新，朱正兰.超声波提取龙胆多糖的研究［J］.中草药杂志，2005，36（6）：862.
       ［10］  徐凌川，张  华，许昌盛，等. 超声波提取灵芝多糖的最佳工艺探讨［J］.中国中药杂志，2005，30（6）：471.
       基金项目：新疆维吾尔自治区少数民族科技骨干特培专项基金(No.20034)
       (新疆医科大学药学院, 新疆 乌鲁木齐  830054)