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       【关键词】  安胎养血合剂；,,肾移植；,,免疫抑制；,,大鼠
       摘要：目的研究安胎养血合剂对大鼠肾移植急性排斥反应的影响，为其在器官移植免疫治疗上的应用提供实验依据。方法建立大鼠异体肾移植急性排斥反应模型（SD→Wistar），随机分为4组，每组12只。I组，生理盐水对照组(NS)，NS 10 ml/(kg・d)。II组，中药安胎养血合剂组，中药10 ml/(kg・d)。III组，CsA(cyclosprorine,CsA)组，CsA 10 ml/(kg・d)。IV组，中西医结合组，中药10 ml/(kg・d)，CsA 2.5 ml/(kg・d),两者间隔30 min。观察各组肾移植大鼠的存活时间，术后第6天取血测定血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)的水平，并行移植肾病理学检查。结果中药安胎养血合剂可以延长受体鼠的存活时间，与CsA联合应用具有协同作用，可以明显延长受体鼠的存活时间，其方剂对移植肾的功能具有保护作用并能改善移植肾的形态和病理变化。结论 中药安胎养血合剂对大鼠肾移植急性排斥反应有一定的抑制作用；与CsA具有协同作用。
       关键词：安胎养血合剂；  肾移植；  免疫抑制；  大鼠
       The Effect of Chinese Medicine AnTaiYangXue Mixture on Acute Rejection Reaction in Renal Transplantation Rats
       SUN Deguang， BI Xudong, ZHAO Jing， WANG Wei
       （First Affiliated Itospital, Liaoning Medical College, Jinzhou, Liaoning 121001, China; Liaoning Medical College, Liaoning, Jinzhou 121001,China）
       Abstract：ObjectiveTo study the effect of Chinese Medicine AnTaiYangXue Mixture(ATYXM) on acute rejection reaction of renal transplantation in rat and provide experimental basis for application of this recipe in organ transplantation.MethodsAllogenic rat renal transplantation model was established from SD to Wistar and randomly divided into 4 groups,12 rats in each group.Group 1:control group, nomal saline(NS)was administered intragastricly(10ml・kg-1・d-1)；Group 2:ATYXM group(10 ml・kg-1・d-1);Group 3：Cyclosporin A(CsA) group(10ml・kg-1・d-1); Group 4:Integrated traditional and western medicine group(10ml・kg-1・d-1+ CsA 2.5 ml・kg-1・d-1）.The recipient rat survival time was observed.Six rats were killed on the sixth day after operation to examine the histopathological changes of grafted kidney and to measure the levels of blood creatinine(Cre) and urea nitrogen(BUN).ResultsATYXM and CsA could both prolong survival time of recipient rats.The combined application of CsA could markdedly prolong survival time of recipient rat. ATYXM coule also protect kidney function and improve pathological changes of transplanted kidney.ConclusionATYXM has a definite inhibition effect on acute rejection reaction in renal transplantation, and might have a synergism with subtreatment dosage of Cyclosporin A(CyA).
       Key words：AnTaiYangXue Mixture；  Renal transplantation；  Immune inhibition；  Rats
   
　　肾移植是各种肾脏疾病终末阶段的最有效的治疗方法，近年来取得了很大的进展。随着HLA配型和新的免疫抑制剂的应用，急性排斥反应的次数和严重程度明显下降。但是，急性排斥反应（AR）仍是近20年来肾移植的一种常见的严重并发症［1，2］，也是影响慢性排斥反应以及移植物和受体预后的最主要的危险因素［3］。我国学者自1975年开始将中医中药应用于抗肾移植术后急性排斥反应，使我国的肾移植具有中国特色。随着研究的深入，临床上已经取得可喜可贺的成绩，逐渐体现出中医中药的特色。一些单味中药和复方已在临床上广泛应用［4］。根据中医辨证论治精神,将安胎法用于肾移植患者,像保护胎儿一样保护移植肾［5］，可以抑制肾移植后急性排斥反应，其基本方是由安胎补肾药和益气养血药组成。以安胎补肾药和益气养血药为基础组成中药复方安胎养血合剂，本实验通过建立大鼠异体肾移植模型，观察安胎养血合剂对肾移植急性排斥反应的影响，为临床应用提供实验依据和理论基础。
       　1  材料与方法
       1.1   动物选取清洁级、近交系、健康雄性SD大鼠和Wistar大鼠分别作为供、受体，体重分别为250～300   g。Wistar大鼠购于中国医科大学实验动物中心，SD大鼠购于锦州医学院实验动物中心。
       1.2   药品
       1.2.1   环孢素A（CsA）环孢素A软胶囊由华北制药有限公司生产，规格25 mg/粒。
       1.2.2   安胎养血合剂的组成生地15 g，元参9 g，益母草30 g，黄芩15 g，杜仲12 g，续断15 g，狗脊15 g， 丹参15 g，川芎9 g，当归15 g，甘草6 g。由锦州医学院附属第一医院中药局提供免煎中药饮片，加水制成浓度为生药100 g/100 ml溶液，灌胃给药。
       1.3  分组造模成功后随机分为4组，每组12只，术后第2天开始给药，1次/d，连用6 d。I组，生理盐水对照组，术后生理盐水(NS) 10 ml/(kg・d)灌胃。II组,中药安胎养血合剂组，术后安胎养血合剂10 ml/(kg・d)灌胃。III组，CsA组，术后CsA 10 mg/(kg・d)，抽取CsA软胶囊中的药液溶于脂溶性维生素中灌胃给药。IV组，中西医结合组，中药安胎养血合剂10 ml/(kg・d)+CsA2.5 mg/(kg・d)术后灌胃给药，两者间隔30 min。
       1.4  模型制备参照Fisher等［6］和毕旭东等［7］的方法建立大鼠肾移植模型，采用供体肾动脉带腹主动脉、供体肾静脉带下腔静脉、输尿管带膀胱瓣，供受体主动脉与主动脉端侧吻合、下腔静脉与下腔静脉端侧吻合，膀胱与膀胱吻合，术中切出受体对侧肾的方法，移植完毕后放入代谢笼。
       1.5  观察指标
       1. 5.1   存活时间排除手术原因死亡的大鼠,观察各组受体的存活时间。
       1. 5.2   移植肾功能每组另外6只于术后第6天处死，大鼠异体肾移植急性排斥反应发展快者在第5天，发展较慢者第7天可达顶峰［8］。主动脉采血，利用全自动生化分析仪测定血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN)水平。
       1. 5.3   移植肾的形态变化
       1. 5.4  病理学检查术后第6天动脉采血后切取移植肾，10%中性福尔马林固定，石蜡包埋切片, HE 染色, 镜下观察组织学变化，按Banff(1997)［9］标准观察排斥反应情况。
       1.6   统计学方法采用SPSS 11.5统计软件进行统计分析，所有数据均以(±s)表示，用t检验和F检验进行统计学分析。检验标准均取P＜0.05为有显著性差异。
       　　2  结果
       2.1  受体大鼠存活时间的比较见表1,对照组受体大鼠术后8 d 内均死亡,经病理证实均有急性排斥反应,平均存活时间为(6.50±1.05)d。中药安胎养血合剂组受体大鼠存活时间为(8.50±1.05)d , III组大鼠存活时间为（9.00±1.41）d 。IV组大鼠存活时间为（12.33±2.42）d 。
       表1   不同组受体大鼠存活时间（略）
       与Ⅰ组比较，*P＜0.01；与Ⅱ、Ⅲ 组比较，#P＜0.05
       2.2  受体鼠肾功能比较结果见表2。
       表2  术后第6天各组血清BUN，Cr含量（略）
       与Ⅰ组比较，*P＜0.05；#P＜0.01；与Ⅱ，Ⅲ组比较，ΔP＞0.05
       2.3  移植肾病理变化见图1～5，在术后第6天采集移植肾组织, I组肾脏排斥反应严重可见移植肾体积明显增大，间质水肿并炎性细胞浸润、主要为淋巴细胞的弥漫性浸润, 间质细胞的浸润波及肾小管, 部分肾小管坏死变性, 呈常见的小管炎的改变。II组及III组有类似对照组的病理表现, 镜下差别不明显。但较I组病理改变轻。IV组肾小球血管轻度扩张渗血, 少量中性粒细胞、淋巴细胞、单核细胞浸润, 间质少量细胞浸润, 表明肾移植的急性排斥反应受到明显的抑制 。
       　　3  讨论
       3.1  安胎养血合剂对肾移植急性排斥反应的作用及机理安胎养血合剂由安胎补肾药和益气养血药为基础组成，本研究发现本实验中安胎养血合剂组比对照组受体鼠的存活时间明显延长，术后BUN，Cr值较对照组也明显降低，表现出对移植肾的功能有显著的保护作用，同时也能改善移植肾的形态和病理变化。安胎养血合剂对大鼠肾移植急性排斥反应有一定的抑制作用，延长受体存活时间，并与CsA联合应用有一定的协同作用，可以减少CsA的用量，从而减轻CsA的毒副作用。经实验研究，杜仲、桑寄生，川断，党参，当归，丹参，赤芍组成的方剂可以降低巨细胞病毒感染发生率，血和尿IL-6水平［10］。
       图1（略） 
       图2 （略）
       图3 （略）
       图4 （略）
       图5  （略）
       中医学认为，正常妇女怀孕是“肾以系包”而“护胎者气也,养胎者血也”，胎儿能够在母体内生长发育不致流产,是靠肾的功能和气血的营养,如肾虚则胎元不固, 气虚则不能护胎, 血虚则不能养胎, 从而导致流产。肾移植患者都表现为气血两虚、肾亏阴损。根据中医辨证论治精神,可以用保护胎儿的方法保护移植肾。叶朗清等将安胎药用于肾移植后防止免疫排斥，获得成功，叶朗清等将安胎药用于肾移植后防止免疫排斥，获得成功，认为胚胎对母体是同种异体移植，与肾移植有相同之处。这充分说明传统中医的安胎方法具有抑制母体发生免疫反应排斥胎儿的作用，起到了调节免疫功能的作用。传统中医的安胎方法具有抑制母体发生免疫反应排斥胎儿的作用，起到了调节免疫功能的作用。肾脏移植后所出现的发热、少尿、体重增加、移植肾肿大、血压增高等急性排斥反应，属于中医的“淤血”范畴。在肾脏移植手术中，因阻断肾循环而造成的血液循环障碍，引起肾组织的严重缺血和缺氧，这种肾循环所阻断的病理变化，应看作为“淤血”。故宜采用补肾安胎、活血化淤的药物，安胎养血合剂正是根据此法用于肾移植急性排斥反应中。另外近年来许多学者观察到流产孕妇中有一部分属于免疫学上的原因，妊娠同免疫密切相关，而移植肾脏能否不被排斥也同免疫问题有关，两者之间有类同之点。
       3.2  中药抗排斥的研究前景当前治疗排斥的基本方法仍是使用大量的抗排斥药物，CsA是临床常用的抗排斥药物，可是副作用较大，有很强的肾毒性并可造成肝功能损害。其他常用的一些免疫抑制药物，如FK506，MMF（骁悉）都有一定的毒性，且价格昂贵，临床应用都具有一定的限制。中医中药在抗肾移植术后急性排斥反应以及肾移植中的其他应用，学者们已作了较深入的探讨，对提高肾移植病人的质量及移植肾的存活作出了一定的贡献，并发现了一些可喜的药物如雷公藤、冬虫夏草等。但是关于肾移植术后急性排斥反应中医辨证分型的研究以及高效、无毒的中药剂型的研究都还很少。许多学者对于怎样从中药中筛选和研制出适合中国国情、易于推广应用、高效低毒或无毒的新的免疫抑制剂更寄予厚望。
       　　参考文献：
       ［1］  Li B,Hartono C,Ding RC,et al.Noninvasive diagnosis of renal-allograft rejection by measurement of messenger RNA for perforin and granzyme B in. urine ［J］.N Engl J Med ,2001 ：344 ,947.
       ［2］  Pascual M, Theruvath T,Kawai T,et al. Strategies to improve long-term outcomes after renal transplantation［J］.N Engl J Med ，2002，346：580.
       ［3］  Yvo W.J.Sijpkens,Ilias I.N.Doxiadis,et al. Early Versus Late Acute Rejection Episodes In Renal Transplantation［J］. Transplantation ,2003,75(2)：204 .
       ［4］  金钟大，陈江华.中医药在肾移植临床中的应用及实验研究概况［J］.中国中西医结合杂志，2003，23（7）：558.
       ［5］  叶郎清,谢  桐,徐琴君,等.安胎法对同种肾移植的临床观察［J］.中医杂志,1981 ,22(3) ：22.
       ［6］  Fisher B,Lee S.Microvascular surgical technique in research,with special reference to renal transplantation in the rat［J］.Surgery,1965,58(5)：904.
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       ［9］  Racusen LC , Solez K, Colvin RB , et al . The Banff 97 workingclassification of renal allograft pat hology ［J］.Kidney Int ,1999 ,55 ：713.
       ［10］  姜宗培，陈雄辉，邓创惠，等.中西医结合治疗在防止肾移植排斥反应中的作用和机制［J］.中国中西医结合肾病杂志，2001，2(2)：77.
       基金项目：辽宁省教育厅高等学校科学研究项目（No.202173363）
       (辽宁医学院附属第一医院，辽宁 锦州  121001；  辽宁医学院，辽宁 锦州  121001)