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       【关键词】  心肌缺血/再灌注损伤；,,保护作用；,,,褐毛甘西鼠尾
       摘要：目的与复方丹参注射液（丹参+三七）比较，探讨复方褐毛甘西鼠尾（褐毛甘西鼠尾+三七）对大鼠离体心肌缺血再灌注损伤的保护作用及其在抗心肌缺血再灌注损伤方面替代丹参的可行性。方法采用离体Langendorff缺血再灌注模型，低灌15min复灌30min。实验后检测灌流液中MDA含量及LDH，CK，SOD，GSHPx活性，实验过程全程记录冠脉流量、心率和心肌收缩力。结果复方褐毛甘西鼠尾注射液能显著降低离体缺血再灌注后MDA，CK，LDH水平，升高SOD和GSHPx，且作用强度相似于复方丹参；褐毛甘西鼠尾复方注射液能明显增加冠脉流量，增强再灌注期间的心肌收缩力；此两药均减慢缺血再灌注过程。结论 复方褐毛甘西鼠尾有较好的抗心肌缺血再灌注损伤作用，褐毛甘西鼠尾可在抗心肌再灌注损伤方面替代丹参。其机制可能与抗氧自由基损伤有关。
       关键词：心肌缺血/再灌注损伤；  保护作用；   褐毛甘西鼠尾
       The Protective Effect of Compounded Injection Made from Sanqi and Hemaoganxishuwei Native to Yunnan on Isolated Myocardial Ischemia/Reperfusion in Rats
       DUAN Weigang, LI Huilan， ZHANG Rongping， SU Yanhong, ZHENG Chunlan*
       (Department of Pharmacology of Kunming Medical College，Kunming 650031, China)
       Abstract：Objective To investigate the cardial protection induced by the compounded injections made from SPM+PN during ischemia/reperfusion in rats in vitro.MethodsThe Langendorff model in vitro was introduced, we perfused the heart at a low flow rate with Kreb"s solution for 15min at first, then followed normal perfusion for 30min. We examined the contents of maleic dialdehyde (MDA) and the activities of lactate dehydrogenase (LDH), creatine kinase (CK), superoxide dismutase (SOD), and glutathione peroxidase (GSHPx) in the flow of effluent after reperfusion. Contractile force, perfusion flow, and rhythm were recorded during experiment. ResultsInjection of SPM＋PN was able to decrease the contents of MDA, CK, LDH, increase actmcties of SOD and GSH-Px in vitro, and the effect was similar to that of SM+PN; The injection of SPM+PN was able to enhance ventrical contractile force, increase coronary flow, and slacken heart rate. ConclusionThe compounded injection from SPM+PN possesses cardial protective effect against ischemia/perfusion injury, which is not less powerful than the injection from SM+PN, and which suggests SPM can be a likely replacer for SM to protect myocardium from ischemia/reperfusion injury. The mechanisms of which may be associated with deactivating oxygen free radicles.
       Key words:Ischemia/reperfusion injury;  Protection;  S. przewalskii Maxim. Var. mandarinorum stib.;  Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen
   
　　中药丹参Salvia miltiorrhiza Bunge, SM和三七Panax notoginseng (Burk.) F.H.Chen, PN是中国传统的活血化瘀中药，常一起配伍使用用于缺血性心肌病的治疗。前期研究表明：褐毛甘西鼠尾注射液在体内外均能显著抑制ADP、血小板活化因子（PAF）、花生四烯酸（AA）诱导的血小板聚集［1］；增加离体心脏冠脉流量；对抗心肌缺血引起的红细胞压积升高，加快血流速度，增加毛细血管开放数目，改善微循环、血液流变学和血流动力学特征［1］；减轻心肌缺血时超微结构的病理变化，减少心肌细胞凋亡（闫彩珍《滇丹参、甘西鼠尾、褐毛甘西鼠尾药效学研究》2001昆明医学院硕士研究生论文）；有较好的抗心肌缺血(ischemia)和再灌注损伤(ischemia/reperfusion injury, IR)的作用［3］。丹参（Salvia miltiorrhiza Bunge，SM）系唇形科（Labiatae）鼠尾草属（Salvia）植物，含有丹参酮ⅡA（tasnhinone ⅡA）、隐丹参酮（cryptodanshinone）等二萜醌类化合物，鼠尾草列酮（salvilennone）、丹参内酯（tanshilactone）等其他二萜类化合物和丹参酚（salviol）、原儿茶酸（protocatechuic acid）丹参素, 即（3,4-二羟苯基）乳酸、丹参酸甲、乙、丙（salvianic A、B、C）、原儿茶醛（protocatechuicaldehyde）等酚酸类化合物［4］。三七Panax notoginseng(BurK.)F.H.Chen为五加科人参属植物，主要含有人参皂苷（ginsenoside）Rb1，Rb2，Rb3等皂苷类化合物［4］，两药均为中国传统的活血化瘀、消肿定痛的名贵中药材，合用有明显的协同作用。褐毛甘西鼠尾（S. przewalskii Maxim. var. mandarinorum stib., SPM）为丹参的同科同属植物，盛产于云南，含二萜醌类化合物，在云南部分地区或民间广泛作为丹参的代用品用于缺血性心脏病的治疗［5］。由于丹参和三七资源相对紧张，探讨褐毛甘西鼠尾替代丹参与三七合用治疗缺血性心肌病的可行性具有重要意义。
       　1  材料
       1. 1  药品与试剂
       1.1.1  丹参注射液生药含量1.5 g/ml，上海第一生化药业公司，批号011003；与血塞通按3∶1（以生药含量计）配制即得复方丹参注射液。
       1.1.2  血塞通注射液即三七总苷，100 mg相当于生药1 g ［6］，主要成分为人参皂苷（ginsenoside）Rb1，Rg1，R1，云南植物药业有限公司，批号200204051。
       1.1.3  复方褐毛甘西鼠尾注射液1 g/ml，由褐毛甘西鼠尾注射液和血塞通注射液配制（比例3∶1，以生药含量计）。褐毛甘西鼠尾注射液由昆明医学院药学系制备。
       1.1.4  检测试剂盒MDA试剂盒，南京建城生物工程研究所，批号20030821；LDH试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号130041；CK试剂盒，中生北控生物科技股份有限公司，批号090061；SOD试剂盒，南京建城生物工程研究所，批号20030901；GSHPx试剂盒，南京建城生物工程研究所，批号20020316。
       1.1.5  Kreb"s液（mmol/L）NaCl 128； KCl 4.7； CaCl2 2.2; MgCl2 0.6； NaH2PO4 0.8；NaHCO3 1215； Glucose 5.6； pH7.4，氧饱和30 min，滤过，pH7.4。
       1.2  仪器平衡记录仪，U35型，日本岛津；临床分光光度计，CL-770型，日本岛津。
       1.3  动物成年SD（Sprague-Dawley）大鼠，体重250～300g，雌雄兼用。由云南省天然药物药理重点实验室提供，合格证号：滇动物证第2001034号。
       　　2  方法［7］
       健康SD大鼠，体重250～300 g，雌雄兼用，50只，随机分为5组。生理盐水组（NS）、复方丹参注射液（SM）高（8 mg/ml）、低（4 mg/ml）剂量组，褐毛甘西鼠尾复方注射液（SPM）高（8 mg/ml）、低（4 mg/ml）剂量组，每组10只。以上浓度均为动脉套管中的终浓度。在缺血前5 min经动脉套管侧管由微量注射泵给药。大鼠击头致死，迅速取出心脏，置于4℃克氏液中，挤出心脏中的残留血液，除去周围组织，游离主动脉，进行主动脉插管，按Langendorff法恒压、恒速灌流。心尖处夹蛙心夹，通过张力换能器与平衡记录仪连接，记录心室收缩幅度。先将心脏稳定10min，调节灌流速度8 ml/min左右，恒量恒速（6 ml/min，5 min）注射相应药物或生理盐水后即进行心脏低灌（0.4 ml/min）15 min。随后再进行30 min再灌注。实验过程中记录给药前、低灌前、低灌0，10，15 min和再灌1，5，10，20，30 min的心率、冠脉流量和心室收缩幅度。再灌注30min后收集心脏灌流液，按说明书测定MDA，LDH，CK，SOD和GSHPx含量。统计学分析采用SPSS11.0 for Windows软件包进行，所有数据用±s表示，组间比较采用单因素方差分析，两两比较采用LSD法进行，若方差不齐则采用Tamhane"s T2法。
       　3  结果
       3.1  复方褐毛甘西鼠尾注射液对大鼠离体心肌缺血再灌注后灌流液生化指标的影响结果见表1。
       3.2  褐毛甘西鼠尾复方注射液对大鼠心肌离体缺血再灌注期间心率、冠脉流量和心肌收缩幅度的影响结果见表2～4。
       表1  实验药液对离体心肌缺血再灌注大鼠灌流液MDA，LDH，CK，SOD，GSH-Px的影响（略）
       与NS组比较，*P＜0.05， **P＜0.01；n=10
       表2  实验药液对离体心肌缺血再灌注大鼠心率的影响（略）
       与NS组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与同剂量SM组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；n=10
       表3  实验药液对离体心肌缺血再灌注大鼠冠脉流量的影响（略）
       与NS组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；与同剂量SM组比较，#P＜0.05，##P＜0.01；n=10
       表4  实验药液对离体心肌缺血再灌注大鼠心肌收缩幅度的影响（略）
       与NS组比较，*P＜0.05, **P＜0.01;n=10
       　4  讨论
       心肌细胞损伤后CK和LDH将释放在细胞外液，在离体灌流中，灌流液中CK和LDH活性的高低一定程度上反映了心肌损伤的严重性。本实验研究表明复方褐毛甘西鼠尾注射液与复方丹参注射液均有降低灌流液LDH和CK活性，表明两复方制剂具有抗心肌缺血再灌注损伤作用。这两种复方制剂还能改善再灌注后的心脏功能，表现为增强心肌收缩力。同时增加冠脉流量，有利于心肌恢复氧供，在再灌注期间恢复心肌功能可能起到促进作用。两种复方制剂对心率的抑制作用可能是钙拮抗作用所为［8，9］。自由基损伤在心肌缺血再灌注损伤中的作用不庸置疑，离体灌流液中SOD，GSH-Px的活性下降和MDA的含量增加从不同侧面反映了自由基损害的程度。本实验表明这两种复方制剂均能升高灌流液SOD和GSH-Px活性，降低MDA含量而呈现抗心肌缺血再灌注损伤作用。表明这两种复方制剂有抗自由基损伤的作用。文献报道表明，本复方制剂三七中的人参皂苷［10］和丹参［11］（特别是丹参素）均能有效消除缺血再灌注期间的氧自由基，本研究支持此观点。在本实验中与同剂量复方丹参表较，褐毛甘西鼠尾复方制剂对各生化指标的影响未见明显差异，表明抗离体心肌缺血再灌注损伤的作用存在相似性。已知丹参酮IIA是丹参的指标性有效成分，植物化学研究表明，褐毛甘西鼠尾中的含量不低于丹参［12］，前期研究也表明，褐毛甘西鼠尾单方制剂在抗心肌缺血再灌注损伤方面也相似于丹参（秦剑《三种鼠尾草注射液对大鼠心肌缺血的影响和对心肌缺血再灌注损伤的保护作用》.2003昆明医学院硕士学位论文），故认为褐毛甘西鼠尾在抗心肌缺血再灌注损伤方面与丹参相似。前期研究对照发现（秦剑《三种鼠尾草注射液对大鼠心肌缺血的影响和对心肌缺血再灌注损伤的保护作用》2003昆明医学院硕士学位论文），复方褐毛甘西鼠尾制剂降低血清CK，升高血清SOD强于同剂量的单方制剂，表明复方制剂间还存在一定的协同作用。
       参考文献：
       ［1］  何洪静, 李惠兰, 张荣平, 等. 滇丹参, 甘西鼠尾, 褐毛甘西鼠尾水提取液对鼠血栓形成及微循环的影响［J］.天然产物研究与开发, 2003, 15(2)：144.
       ［2］  闫彩珍, 李惠兰, 张荣平, 等. 滇丹参, 甘西鼠尾, 褐毛甘西鼠尾对离体豚鼠心脏的影响［J］.昆明医学院学报, 2002, 1：14.
       ［3］  郑虎占, 董泽宏, 佘  靖，等. 中药现代研究与应用（第2卷）［M］.北京：学苑出版社, 1997：1099.
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       ［7］  陈  奇. 中药药理研究方法［M］.北京：人民卫生出版社， 1993：522.
       ［8］  徐长庆, 王孝明, 范劲松, 等. 丹参酮IIA对豚鼠单个心肌细胞跨膜电位及L-型钙电流的影响［J］. 中国病理生理杂志，1999， 15(10)：877.
       ［9］  熊志刚, 陈俊秀, 孙家均. 三七总皂甙对心肌动作电位及慢钙通道电流的影响［J］. 中国药理学报，1989，10(2)：122.
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       ［11］  郭来敬, 张志仁, 陈东辉, 等. 电子顺磁共振检测心肌缺血再灌产生的氧自由基及其保护的实验研究［J］. 心肺血管病杂志， 2000，19(1)：58.
       ［12］  胡建林, 张荣平, 李惠兰, 等. 3种滇产鼠尾草属植物丹参酮IIA的薄层扫描定量［J］. 中成药， 2000，22(10)：723.
       (昆明医学院，云南 昆明  650031)