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       【关键词】  抗衰老软胶囊；,,二苯乙烯苷；,,高效液相色谱法
       摘要：目的2,3,5,4’四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷的含量测定方法学考察。方法用高效液相色谱（HPLC）法测定抗衰老软胶囊中2，3，5，4’四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷的含量,流动相为乙腈水（17∶83）, 检测波长320 nm。结果范围为0.355～284μg/ml，r=0.999 9,平均回收率为97.7％，RSD=1.73%。结论该方法比较简单可靠，可用于制剂的质量控制。
       关键词：抗衰老软胶囊；  二苯乙烯苷；  高效液相色谱法
       Determination  of  2，3，5，4’tetrahydroxystilbene2OβDglucoside in Antiaging Soft Capusles
       SONG Zirong,   LIU Xianliang,   HUANG Yanghua
       （Jiangxi College of TCM,  Nanchang 330006,China; Jiangxi Oushi Pharm Company Limited,Xinyu 338004,China; Jiangxi Shangao Pharmaceutics Company Limited，Fuzhou 344800,China）
       Abstract：ObjectiveTo determine  2，3，5，4’tetrahydroxystilbene2OβDglucoside in Radix multiflori in Antiaging Soft Capusles.MethodsHPLC was used in the quantitative analysis using acetonitrile:water(17∶83)as mohile phase,the flow rate was 1.0 ml/min and the detection wavelength was 320 nm.Results2，3，5，4’tetrahydroxystilbene 2OβDglucoside was linear within the range of 0.355～284μg/ml with a correlation cofficient of 0.9999. The average recovery was 97.7% and RSD was 1.73%.ConclusionThe HPLC method is simple,reliable,accuate  and practical in quality control of Antiaging Soft Capusles.
       Key words：Antiaging Soft Capusles;  2，3，5，4’tetrahydroxystilbene 2OβDglucoside；  HPLC
   
　　蓼科植物何首乌Polygonum multiflorum Thunb. 的根与根茎，系江西欧氏药业有限责任公司开发的功能食品抗衰老软胶囊中的主要成分。2,3,5,4’四羟基二苯乙烯2OβD葡萄糖苷（以下简称二苯乙烯苷）是其有效成分之一，本文用HPLC法对其含量测定的方法学进行了考察。现将结果报道如下。
       　　1  器材
       LC10A高效液相色谱仪(日本岛津),SPD10A可见-紫外检测器,CLASSVP色谱工作站。二苯乙烯苷对照品由中国生物制品检定所提供（批号：0844200003），抗衰老软胶囊由江西欧氏药业有限责任公司提供，乙腈为色谱纯，水为超纯水。所用试剂，如未注明规格，均指分析纯。
       　2  方法与结果［1］
       2.1  色谱条件［1］色谱柱为Spherigel C18柱，5μm,4.6×150 mm，流动相为乙腈水（17∶83），柱温30℃，流速1.0 ml/min，检测波长320 nm，进样量20 μl，灵敏度0.05 AUFS。从对照品的扫描图可见，二苯乙烯苷在320 nm处有最大吸收，选择320 nm为测定波长。在选定条件下，二苯乙烯苷和样品中其他组分可基线分离。二苯乙烯苷与其相邻色谱峰的分离度大于1.5。按二苯乙烯苷峰计算，理论塔板数为4 000以上。同时取阴性供试品溶液进样，结果表明，阴性供试品在二苯乙烯苷位置处无干扰色谱峰。
       2.2  溶液的制备
       2.2.1  对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的二苯乙烯苷约7 mg，置25 ml量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（二苯乙烯苷对照品溶液的浓度为0.284 mg/ml）。根据文献报道［2］和二苯乙烯苷的溶解性［3］，测定采用氯仿脱脂，50%甲醇作为溶剂，超声提取二苯乙烯苷。
       2.2.2  供试品溶液的制备提取方法的考察，精密称取抗衰老软胶囊（批号20020301）内容物1.0 g，置50 ml离心管中，加氯仿10 ml，振摇，离心（5 000 r/min，15 min），残渣加50%甲醇25ml，分别用超声和回流的提取方法提取30 min，共2次，提取液放冷后用甲醇定容至50 ml，滤过，取续滤液，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，进样，测定其含量。结果见表1。
       表1  不同提取方法的比较（略）
       以上结果表明，超声处理和回流提取含量接近，同时超声简便，故确定提取方法为超声提取。
       2.3  线性关系照实验溶液的制备项下方法配制对照品溶液，并做系列稀释，20 μl进样，记录色谱图，测定其峰面积。结果见表2。并以峰面积值对对照品溶液浓度进行回归，得标准曲线方程。
       表2  二苯乙烯苷对照品测定结果（略）
       并以峰面积值（y）对进样量（x）作图，Y=1E-05x-0.040 9，r=0.999 9。以上结果表明，在0.355～284 μg/ml范围内，二苯乙烯苷峰面积值与对照品溶液浓度有良好的线性关系。
       2.4  回收率实验取已知含量的样品（批号20020301）约1.0 g，分别加入对照品溶液（0.284 mg/ml）1 ml，按上述样品制备方法和色谱条件，制备加样回收供试品溶液并注入色谱仪，以下列公式计算回收率。结果见表3。回收率（%）=测得量（mg）制剂中含量（mg）     加入对照品量（mg）×100%
       表3  二苯乙烯苷加样回收实验结果（略）
       回收率平均值=97.7%   RSD=1.73%，结果表明，加样回收良好。
       2.5  精密度考察吸取上述供试品溶液，重复进样6次，二苯乙烯苷的峰面积值的RSD<2%。结果见表4。实验表明，RSD=1.53%，精密度良好。
       2.6  稳定性实验样品溶液的稳定性实验，以新配制的样品溶液为标准，放置于室温，分别于0，6，12，24 h及30 h，分别进样20 μl，测得样品中二苯乙烯苷峰面积值的RSD<2%。结果见表5。
       表4  二苯乙烯苷精密度考察结果（略）
       表5  二苯乙烯苷样品溶液稳定性考察结果测定（略）
       实验结果表明，二苯乙烯苷样品供试溶液在室温下30 h内稳定性良好。
       2.7  重现性实验按拟定的含量测定方法，对同一批样品（20020301）分别制备样品供试液，测得峰面积值并计算含量。RSD<2%，结果见表6。
       表6  样品重现性实验（略）
       实验结果表明，二苯乙烯苷样品供试溶液重现性良好。
       2.8  含量测定按上述样品制备方法制3批供试品，吸取样品供试溶液，按上述色谱条件测定。结果见表7。
       表7  样品中二苯乙烯苷含量测定结果（略）
       3  讨论
       抗衰老软胶囊的基质是紫苏油，因此在实验溶液的制备过程中用氯仿脱脂，然后再用超声提取，避免了油脂对色谱柱的损伤。实验表明，采用HPLC测定抗衰老软胶囊中二苯乙烯苷的含量，操作较为简单，重现性好，灵敏可靠，可用于该制剂的质量控制。
       参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000.
       ［2］  刘小平，李  惠，徐海星，等．高效液相色谱法测定安神益脑丸中二苯乙烯苷的含量研究［J］.中医药学刊，2004，22(4)：746.
       ［3］  鲁  静，粟晓黎，董海荣，等．高效液相色谱法测定何首乌及制首乌中羟芪衍生物的含量［J］.药物分析杂志，2000，20(2)：104.
       (江西中医学院，江西 南昌  330006；江西欧氏药业有限责任有限公司，江西 新余  338004；江西山高制药有限公司，江西 抚州  344300)