文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【关键词】  脑血舒通；,,大鼠；,,局灶性脑缺血
       摘要：目的研究脑血舒通对脑缺血的保护作用。方法电凝大鼠一侧大脑中动脉造成局灶性脑缺血(MCAO),观察脑血舒通对大鼠行为、大脑皮质内脑梗塞区神经细胞数量、尼氏小体含量、脑组织含水量的影响；采用结扎小鼠双侧颈总动脉形成急性脑缺血模型，并进行了小鼠常压耐缺氧实验，观察小鼠存活时间。结果脑血舒通33.33，16.67，8.33 mg/kg改善MCAO大鼠行为障碍，可显著增加局灶性脑缺血大鼠大脑皮质内脑梗塞区周围神经细胞数量、神经细胞内尼氏小体含量，降低脑组织含水量，具有显著保护神经细胞的作用。脑血舒通50，33.33，16.67 mg/kg能明显延长结扎双侧颈总动脉小鼠存活时间和小鼠常压下的耐缺氧时间。结论 脑血舒通对实验性脑缺血具有明显保护作用。
       关键词：脑血舒通；  大鼠；  局灶性脑缺血
       Protection Effect of Naoxueshutong Injection on Cerebral Ischemia in rats
       ZHANG Juan， LIU Bangmin, WANG Yong, QIAN Haibing, ZHOU Chunyang, HUANG Guojun
       (Chengdu University of TCM, Chengdu 611731，China; Shanxi College of TCM,Xianyang 712083, China)
       Abstract：ObjectiveTo study the protection effect of Naoxueshutong injection on cerebral ischemia.MethodsFocal cerebral ischemia was produced by permanent occlusion of the proximal of the right middle cerebral artery(MCA). The neurologic status of each rat was carefully evaluated at 24 h after surgery. The cerebral infarction numbers of neurons and nissls stains ,the water content were measured. Acute incomplete cerebral ischema was induced by ligaturing bilateral carotid arteries. Anoxia was produced by close normobaric hypoxia.ResultsNaoxueshutong injection 33.33,16.67,8.33 mg/kg could obviousely markedly improve the neurologic status，increase the  numbers of neurons and nissls stains ,and decrease the water content of brain. Naoxueshutong injection 50,33.33,16.67 mg/kg could prolong the dieing time of mice  after ligating both sides of the common carotid artery .Under hypoxia the survival time of experimental mice was evidently prolonged.ConclusionNaoxueshutong injection has a protective effect on cerebral ischemia.
       Key words：Naoxueshutong;  Rats;  Focal cerebral ischemia
   
　　纯中药制剂脑血舒通（冻干），具有活血化淤、祛风通络等作用，其制剂广泛用于治疗心、脑血管疾病、冠心病和脑供血不足等疾病。本实验就其抗脑缺血的作用,进行了研究，为其临床应用提供实验依据。
       1  器材
       1.1  药物脑血舒通（冻干）粉针剂（以三七总皂苷为主；规格：含注射用中药皂苷100 mg/支，成都中医药大学中药炮制制剂教研室，产品批号040801；舒血宁注射液(规格：5 ml/瓶，黑龙江珍宝岛制药有限公司，批号20040405）；血栓心脉宁胶囊（吉林华康药业股份有限公司，批号040908）。
       1.2  动物大鼠，SD种，一级，体重160～200 g，雌雄各半；小鼠，昆明种，一级，体重18～22 g，雌雄各半。由成都中医药大学实验动物研究中心提供。动物质量合格证：SCXK（川）200411号。
       1.3  仪器AO石蜡切片机(美国AO公司)；OlympusBX50型光学显微镜(日本Olympus公司)；MIAS2000型计算机图像工作系统(四川大学智胜软件股份有限公司)。
       　2  方法
       2.1  脑血舒通对阻断大脑中动脉所致大鼠局灶性脑缺血模型的防治作用将大鼠按性别及体重分层随机搭配分成5组，每组10只，雌雄各半。即模型对照组：生理盐水0.5 ml/100 g体重；脑血舒通（冻干）高、中、低3种剂量组：33.33，16.67，8.33 mg/kg（浓度分别为6.67，3.33，1.67 mg/ml，给药容积均为0.5 ml/100g体重）；舒血宁注射液（阳性对照药物）：0.83 ml/kg［将原注射液稀释6倍（即原注射液1ml加入生理盐水5ml），给药容积为0.5 ml/100 g体重］。用10%水合氯醛溶液400 mg/kg对大鼠腹腔注射进行麻醉，取右颞入颅，局部去毛，常规消毒，切开皮肤，清晰暴露卵圆孔上方鳞骨隆起部，于其前方0.3 mm处作2.5 mm×4 mm骨窗，划破硬脑膜，暴露大脑中动脉近侧段，用微电热凝闭，造成大鼠局灶性脑缺血性病理模型。在复制大鼠脑缺血模型前3 d开始给药，各组均腹腔注射给药，1次/d，共给药7 d。末次给药后24 h，将大鼠麻醉，将大鼠股动脉剪断放血致死，细心剖取大鼠全脑组织，放入FAA液固定48 h后，逐级酒精脱水，二甲苯透明、浸蜡，石蜡包埋。用美国AO公司制造的AO石蜡切片机常规切片，片厚4 μm，制片后甲苯胺蓝染色。以日本Olympus公司制造的OlympusBX50型光学显微镜观察。
       2.1.1  行为检测按马怡等［1］的方法，对动物进行行为评分。满分为11分，分数越高，动物的行为障碍越严重。
       2.1.2   对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血模型大鼠大脑皮质内脑梗塞区神经细胞数量的影响在40×视野下观察甲苯胺蓝染色脑组织切片，寻找位于大脑皮质内的脑梗塞区域。用低倍（100×）视野下观察脑梗塞区域神经细胞，然后换成高倍视野（400×）下进一步观察脑梗塞区域神经细胞及邻近神经细胞的形态结构。选择梗塞区域周围脑组织4个视野，在MIAS2000图像分析仪检测计数神经细胞数目。
       2.1.3  对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血模型大鼠大脑皮质内脑梗塞区神经细胞内尼氏小体含量的影响选择梗塞区域周围脑组织4个视野，在MIAS2000图像分析仪检测相应神经细胞浆内尼氏小体含量（尼氏小体总数、尼氏小体面积、尼氏小体平均光密度、尼氏小体积分光密度、尼氏小体平均黑度）。
       2.2   脑血舒通对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血模型大鼠脑水肿的影响实验组别、动物数、药及剂量、给药途径、给药天数、脑缺血模型的复制方法［1］等均同于2.1项下,对阻断大脑大鼠中动脉所致局灶性脑缺血模型的治疗作用的实验。实验结束将大鼠股动脉剪断放血致死。小心剖取出完整脑组织，切下左脑半球前端组织约400 mg左右，精确称重（湿重）。然后放入恒温干燥箱（80℃）48 h，取出称重（干重），计算出脑组织含水量：
       脑组织含水量（%）=［（湿重干重）/湿重］×100%
       2.3   脑血舒通对结扎小鼠双侧颈总动脉致脑缺血后存活时间的影响［2］将小鼠按性别及体重分层随机搭配分成5组，每组10只，雌雄各半。分别作为：空白对照组，生理盐水0.1 ml/10 g体重；脑血舒通（冻干）高、中、低3种剂量组，50，33.33，16.67 mg/kg（浓度分别为5，3.333，1.667 mg/ml，给药容积均为0.1 ml/10 g体重）；舒血宁注射液（阳性对照药物）：1.25 ml/kg［将原注射液稀释8倍（即原注射液1 ml加入生理盐水7 ml），给药容积为0.1 ml/10 g体重］。各组均腹腔注射给药，1次/d，连续7 d。于末次给药后1 h，用乙醚将小鼠轻度麻醉，纵向切开颈部皮肤，分离出双侧颈总动脉，用丝线同时结扎小鼠双侧颈总动脉后，立即开始记录小鼠的存活时间。
       2.4   脑血舒通对小鼠耐常压缺氧存活时间的影响［3］将小鼠按性别及体重分层随机搭配分成5组，每组10只，雌雄各半。分组和除阳性组外给药同2.3项下，血栓心脉宁胶囊（阳性对照药物）组：1.5 g/kg（浓度为0.075 g/ml，给药体积为0.2 ml/10 g体重，灌胃给药）。给药1次/d，连续3 d。各组小鼠给药后1 h，将每只小鼠单独（1只/瓶）放于200 ml的广口磨口瓶（瓶内放置用纱布包裹的钠石灰5g，以吸收小鼠呼出的CO2和水分）内，立即将涂搽有凡士林的瓶口盖严密闭，使之不漏气。立即用秒表记录瓶口密闭至小鼠呼吸停止（死亡）的间隔时间，作为小鼠的“存活时间”。
       2.5   统计学处理实验数据以±s表示，组间差异的显著性检验运用SPSS 11.5软件提供的单因素方差分析方法。若方差齐性，两组之间的比较用LSD法检验；若方差不齐，两组之间的比较用Tamhane"s T2法检验。
       3  结果
       3.1   脑血舒通对阻断大脑中动脉所致大鼠局灶性脑缺血模型的防治作用
       3.1.1  对大鼠行为障碍的影响MCAO后，所有动物出现不同程度的神经运动功能障碍,模型组尤为明显。主要表现为跛行和手术对侧瘫痪，Bederson法检查阳性。经脑血舒通及舒血宁治疗,动物造模后24 h脑缺血大鼠的行为障碍有不同程度的改善。结果见表1。
       3.1.2  对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血模型大鼠行为缺陷程度、大脑皮质内脑梗塞区神经细胞数量的影响结果见表1。
       表1  脑血舒通（冻干）对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血模型大鼠大脑皮质内梗塞区神经细胞数的影响（略）
       与模型对照组比较，**P＜0.01；与舒血宁注射液组比较，▲▲P＜0.01
       从表1可见，脑血舒通（冻干）给药治疗7 d，对阻断大脑中动脉所致大鼠局灶性脑缺血神经细胞损伤具有显著的防治性保护作用，可显著增加脑缺血模型大鼠大脑皮质内脑梗塞区周围神经细胞数量。脑血舒通（冻干）高、中、低3种剂量组（33.33，16.67，8.33 mg/kg）较模型对照组分别增加63.61%，32.48%，34.89%，P＜0.01。阳性对照药物舒血宁注射液高剂量也具有类似的作用，可使大鼠大脑皮质内脑梗塞区神经细胞数量增加38.20%，P＜0.01。
       3.1.3  对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血模型大鼠大脑皮质内脑梗塞区神经细胞内尼氏小体含量的影响 结果见表2。
       表2  脑血舒通（冻干）对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血模型大鼠大脑皮质内梗塞区神经细胞内尼氏小体含量的影响（略）
       与模型对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；括号内数据为与模型对照组比较的增加百分率（%）
   
　　从表2可见，脑血舒通（冻干）还可显著增加大脑皮质内脑梗塞区神经细胞内尼氏小体含量。主要表现在：与模型对照组比较，脑血舒通（冻干）3种剂量（33.33，16.67，8.33 mg/kg）可使大脑皮质内脑梗塞区神经细胞内尼氏小体总数分别增加72.51%(P＜0.01)，56.32%(P＜0.01)，63.07%(P＜0.01)；使尼氏小体面积总和分别增加120.98%(P＜0.01)，58.42%(P＜0.05)、85.05%(P＜0.05)；使尼氏小体平均光密度总和分别增加74.61%(P＜0.01)、60.43%(P＜0.01)，67.54%(P＜0.01)；使尼氏小体积分光密度总和分别增加120.08%(P＜0.01)，64.12%(P＜0.01)，89.42%(P＜0.01)；使尼氏小体平均黑度总和分别增加65.84%(P＜0.01)，43.26%(P＜0.05)，48.85%(P<0.05)。阳性对照药物舒血宁注射液高剂量也具有类似的作用，可使尼氏小体总数、面积总和、平均光密度总和、积分光密度总和及平均黑度总和分别增加73.86%(P＜0.01)，65.75(P＜0.05)，68.32%(P＜0.01)，71.58%(P＜0.05)和91.74%(P＜0.01)。
3.2  对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血模型大鼠脑水肿的影响结果见表3。
       表3  脑血舒通（冻干）对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血模型大鼠脑水肿的影响（略）
       与模型对照组比较，**P＜0.01;n=10
   
　　从表3可见，脑血舒通（冻干）对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血模型大鼠给药治疗7 d，均可使大鼠脑水肿程度显著降低。与局灶性脑缺血模型对照组比较，3种剂量(33.33，16.67，8.33 mg/kg) 组脑组织含水量分别降低3.84%，3.49%和3.13%（P＜0.01）。阳性对照药物舒血宁注射液高剂量组也有显著减轻脑水肿作用，降低3.45%（P＜0.01）。结果表明脑血舒通（冻干）对阻断大脑中动脉所致局灶性脑缺血模型具有显著减轻脑水肿的作用。
       3.3  对结扎小鼠双侧颈总动脉致脑缺血后存活时间的影响结果见表4。
       表4  脑血舒通（冻干）对结扎小鼠双侧颈总动脉所致脑缺血后存活时间的影响（略）
       与模型对照组比较，**P＜0.01；与空白对照组比较，▲P＜0.05;n=10
   
　　从表4可见，脑血舒通（冻干）具有抗脑缺血的作用，可显著延长结扎小鼠双侧颈总动脉所致脑缺血后的存活时间。与空白对照组比较，脑血舒通（冻干）高、中、低3种剂量（50，33.33，16.67 mg/kg）使小鼠脑缺血后的存活时间分别延长58.24%，40.60%，22.74%（P＜0.01）。阳性对照药物舒血宁注射液高剂量(1.25 ml/kg)也具有抗脑缺血作用，可显著延长小鼠脑缺血后的存活时间，延长31.79%（P＜0.01）。
       3.4  脑血舒通（冻干）对小鼠常压缺氧存活时间的影响结果见表5。
   
　　从表5可见，脑血舒通（冻干）具有显著的抗缺氧作用，可显著延长小鼠在常压缺氧条件下的存活时间。与空白对照组比较，脑血舒通（冻干）高、中、低3种剂量（50，33.33，16.67 mg/kg）使小鼠常压缺氧的存活时间分别延长36.82%（P＜0.01），25.20%（P＜0.01）和11.40%（P＜0.05）。阳性对照药物血栓心脉宁胶囊高剂量(1.5 g/kg)灌胃给药后亦具有抗缺氧作用，使小鼠存活时间延长15.74%（P＜0.01）。
       表5  脑血舒通（冻干）对小鼠常压缺氧存活时间的影响（略）
       与模型对照组比较，** P ＜0.01；n=10
       4  讨论
       实验中采用的大鼠MCAO模型，发现术后24 h, MCAO大鼠手术对侧前肢均出现明显的运动障碍。提示大脑中动脉阻断后皮质运动区或纹状体产生缺血性损伤。形态学研究表明，MCAO后24 h，颞侧皮质出现明显的梗塞灶，光镜下可见大量的神经细胞变性坏死,呈现胞体皱缩，核固缩深染，为行为改变提供了病理学依据。腹腔注射脑血舒通后神经症状明显减轻，在光镜视野下可见甲苯胺蓝染色切片上，脑缺血模型组大鼠海马CA1区神经细胞数目明显减少，残存的神经细胞水肿、体积增大、胞浆较空亮，其内所含尼氏小体明显减少，胞核水肿、增大、染色变浅，核仁清楚。脑血舒通（冻干）3种剂量组和舒血宁注射液高剂量组大鼠海马CA1区神经细胞数量较多，神经细胞水肿不同程度减轻，胞浆内尼氏小体不同程度增多，胞核水肿不同程度减轻，染色较深，核仁清楚。同时脑血舒通（冻干）还能一定程度地减轻脑水肿,表明脑血舒通(冻干)对局灶性脑缺血损伤具有明显保护神经细胞的作用，其作用机制除了增加大脑皮质内脑梗塞区周围神经细胞数量外，还可显著增加大脑皮质内脑梗塞区神经细胞内尼氏小体含量。文献报道［4］缺氧对机体是一种劣性刺激，降低了机体内营养物质的氧化和能量供应。脑组织在缺血缺氧时会导致脑组织能量代谢障碍，出现脑组织的病理形态和机能失调，严重缺氧可致死亡。因此，脑血舒通（冻干）的抗缺氧作用，提示它可能改善脑组织缺氧损害导致的能量代谢障碍，是其治疗脑缺血时发挥保护脑细胞和保护脑功能的重要作用之一。综上所述，脑血舒通(冻干)可明显改善局灶性脑缺血大鼠的脑代谢，维持脑缺血状态下神经细胞的正常形态和功能，延缓、减轻其坏死，并能延长小鼠缺血缺氧存活时间，具有明显的脑缺血保护作用。
       　参考文献：
       ［1］  马  怡，黑爱莲，金有豫，等.银杏叶注射液对实验性大鼠局灶性脑缺血的保护作用［J］. 首都医科大学学报，1999,20(1)：21.
       ［2］  李东安,李中平,张慧颖. 脑栓通胶囊药效学实验研究［J］.中国中医药信息杂志，2003，10（4）：37.
       ［3］  李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科学技术出版社，1991：153.
       ［4］  杜贵友,赵  雍,曹春雨,等.脑塞通的脑保护作用研究［J］.中国中药杂志，2003，28(9)：856.
       (成都中医药大学，四川 成都  611731；  陕西中医学院，陕西 咸阳  712083)