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       【关键词】  沙参；,,抑菌活性；,,最低抑菌浓度
       摘要：目的对沙参提取物的体外抑菌活性进行初步研究。方法用水50%乙醇浸提有机溶剂萃取，以纸片法进行活性测定。结果提取物对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌有抑制作用，最低抑菌浓度为5 mg/ml，50%乙醇提取效果优于水，醋酸乙酯萃取液抑菌效果最明显。结论 沙参提取物是一种有效的抑菌药物。
       关键词：沙参；  抑菌活性；  最低抑菌浓度
       Studies on Antibacterial Properties Isolated from Radix Adenophorae
       HU Dinghui，DING Jiangang,  YUAN Qiping*
       (Department of Biology, Mianyang Normal University,Sichuan,621000，China； College of Life Science and Engineering,Southeast, Mianyang 621010，China)
       Abstract：ObjectiveTo study the antibacterial properties of root extracts from Radix Adenophorae.MethodsThe different extracting solvent was tested with the filter paper method.ResultsThe antibacterial function of the extract by 50% alcohol had evident effect on Staphylococcus aureus and Pseudomonas aeruginosa with the minimum inhibition concentration (MIC) 5 mg/ml. The main antibacterial constituent was focused on the extract of ethyl acetate.ConclusionThe extract from Radix Adenophorae was an effective antibacterial drug.
       Key words：Radix Adenophorae；  Antibacterial properities；  MIC
   
　　沙参有北沙参Radix  Glehhniae和南沙参Radix Adenophorae之分［1］。北沙参为伞形科多年生草本植物珊瑚菜和根，而南沙参为桔梗科沙参属多年生草本植物轮叶沙参Adenophora tetraphylla（Thunb.）Fisch.，杏叶沙参Adenophora stricta Miq.及阔叶沙参Adenophora pereskiae-folia (Fisch.) G. Don）的根，它是常用中药之一，具有养阴清肺、化痰、益气等功效，临床上主要用于治疗肺热燥咳、阴虚劳嗽、干咳痰黏、气阴不足、烦热口干等症［2］，但对于其抑菌方面的活性却未见报道。因此本实验以南沙参植物轮叶沙参、杏叶沙参为原料，以其干燥根提取物为实验药剂，用传统的体外抑菌活性实验方法，初步研究沙参对几种常见的致病菌的抑制作用，旨在寻找新的有效的抗菌药物，并进一步开发沙参的药用价值。
       1  材料和方法
       1.1  材料
       1.1.1   沙参购自四川诚隆药业有限公司。
       1.1.2  菌种 大肠杆菌Escherichia coli、金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus、绿脓杆菌Pseudomonas aeruginosa由绵阳师范学院分子生物与微生物制药重点实验室提供。
       1.1.3  培养基  采用牛肉膏蛋白胨培养基。
       1.1.4  化学试剂  乙醇、正丁醇、醋酸乙酯、石油醚、丙酮均为国产分析纯。
       1.2   方法
       1.2.1  沙参粗提液的制备  准确称取沙参5 g，分别以蒸馏水、50%乙醇浸泡过夜，离心弃沉淀，得粗提液，减压浓缩至25 ml，该溶液分别用正丁醇、醋酸乙酯、石油醚、乙醚萃取，充分振荡，静置，直到两相液面完全分开。用分液漏斗将有机溶剂相与水相分开，收集有机溶剂分别进行抑菌活性研究。
       1.2.2  抑菌活性测定纸片法 参考张文治等［3～5］法，用移液枪移取20 μl指示菌（金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌、大肠杆菌）悬液，接种在固体培养基上，涂布棒将菌液均匀涂布于平皿上。将直径为5 mm的灭菌滤纸圆片浸泡于中药提取液中，取出隔一定距离平铺于含菌培养皿中，在适宜的温度下（大肠杆菌37℃，金黄色葡萄球菌28℃，绿脓杆菌28℃）培养一定时间，观察结果，用游标卡尺测得抑菌圈直径，取其平均值，计算出抑菌率和最低抑菌浓度（MIC）。最低抑菌浓度是滤纸片周围刚出现抑菌圈的浓度［5］。以无待测样的试液作为空白，每个样品做两个平行，实验重复3次。抑菌率用下述公式计算［6，7］，
       抑菌率（%）＝实验组平均抑菌圈直径-空白滤纸片直径     空白滤纸片直径 ×100 %
       　　2  结果
       2.1   提取液对抑菌效果的影响分别用水和50%乙醇浸提沙参，选用金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、绿脓杆菌为指示菌株，实验结果表明两种溶液提取物对金黄色葡萄球菌抑制作用最强，对绿脓杆菌抑制作用次之，对大肠杆菌作用不明显，其中50%乙醇作为溶剂提取效果明显优于水，以金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌对两种溶液的提取效果作图。结果见图1～2。
       图1   水、50%乙醇提取物对金葡球菌抑制作用比较（略）
       图2  水、50%乙醇提取物对绿脓杆菌抑制作用比较（略）
       2.2  抑菌率沙参乙醇提取物对金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌具有明显的抑菌效果，其抑制作用随着药物浓度的增大逐渐增强，抑制率和浓度具有剂量依赖关系。当生药量为200 mg/ml时，对金葡球菌和绿脓杆菌的抑制率分别为138%，125%；当生药量为50 mg/ml时,对两种菌的抑制率分别为46.5%，21%。最低抑菌浓度均为5 mg/ml。结果见图3。
       图3  沙参提取物对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌的抑制率（略）
       2.3  萃取液抑菌实验结果沙参乙醇提取液经正丁醇、醋酸乙酯、石油醚、乙醚有机溶剂萃取后进行抑菌活性进行检测，结果表明醋酸乙酯萃取液抑菌效果最强，对金黄色葡萄球、绿脓杆菌均有较强的抑制作用，对大肠杆菌抑制作用较弱。石油醚、乙醚萃取液对3种指示菌不具有抑菌活性。结果见表1。
       表1  四种萃取液对指示菌的抑制作用（略）
       ＋＋＋ 代表抑菌圈直径＞10 mm；＋代表抑菌圈直径＜8 mm；－ 代表无抑菌作用
       　　3  讨论
       本实验初步研究了沙参提取物对几种常见致病微生物的生长抑制作用。在提取沙参抑菌物质的过程中，考虑到活性物质的稳定性，整个提取浓缩的过程始终控制在较低的温度下进行。提取实验结果提示沙参提取物的抑菌活性成分主要是中等极性类物质，如皂苷等化合物。抑菌结果表明沙参提取物对金黄色葡萄球菌、绿脓杆菌有显著的抑制作用，且抑菌浓度低，最低抑菌浓度为5mg/ml，抑菌效果与药物浓度呈正相关。绿脓杆菌属于假单胞菌属，为革兰氏阴性杆菌，金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，沙参提取物对以上两种菌的显著抑制作用，提示有望从沙参中开发出一种广谱抗生素，但对其抑菌机理尚需进一步的研究。研究结果可为沙参的临床应用提供理论基础。
       参考文献：
       ［1］  卢尚书. 沙参有南北沙参之别［J］.中国药业，1999,8(9)：13.
       ［2］  杜珍. 沙参处方用名之我见［J］.中国基层医药，1999，6(4)：231.
       ［3］  张文治.实用食品微生物学［M］.北京：轻工业出版社，1991.
       ［4］  程丽娟，唐  明，袁  静，等.微生物学实验技术［M］.北京：科学技术出版社，1993：57.
       ［5］  周帮靖.中草药抗菌活性研究方法［M］.重庆：重庆科技出版社，1987.
       ［6］  于平儒，邵红军.62中植物样品对菌丝活性的测定［J］.西北农林科技大学报，2001，29（6）：65.
       ［7］  孟昭礼，罗  兰.人工模拟杀菌剂银泰对10种植物病原菌的室内生物测定［J］.莱阳农学院学报，199，16（2）：124.
       (绵阳师范学院，四川 绵阳  621000；西南科技大学生命科学与工程学院，四川 绵阳  621010)