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       【关键词】  麝香乌龙丸；,,药理研究；,,抗炎；,,镇痛
       摘要：目的通过对麝香乌龙丸抗炎、镇痛的药理研究，为临床应用提供实验依据。方法建立小鼠耳廓肿胀、大鼠足跖肿胀、佐剂性关节炎和棉球肉芽肿炎症模型，研究其抗炎作用；采用小鼠扭体法和热板法,观察其镇痛作用。结果对小鼠耳廓炎症、大鼠足跖肿胀、佐剂性关节炎、棉球肉芽肿等均有明显抑制作用（P＜0.01）；能明显抑制炎性渗出液和白细胞趋化，并能明显减少冰醋酸引起的小鼠扭体次数、延长扭体出现时间和显著提高小鼠热板痛阈值（P＜0.01）。结论麝香乌龙丸有明显的抗炎、镇痛作用。
       关键词：麝香乌龙丸；  药理研究；  抗炎；  镇痛
       Pharmacological Study of Musk-Aconite-Earthworm Pill on Anti-inflammatory and Analgesic
       WANG Zhiwen, ZHANG Aiguo, YUAN Qiang, ZHAO Wenyi, SUN Lili, JIA Xiurong, CHENG Aiguo
       (Affiliated Hospital of North China Coal Medical University, Tangshan, Hebei 063000, China)
       Abstract:ObjectiveTo study the anti-inflammatory and analgesic effects of Musk-Aconite-Earthworm Pill(MAEP) to provide an experimental foundation for clinical application.MethodsThe anti-inflammatory effect was determined with the models of the swelling of mouse ear, the rat carrageenin paw edema, adjuvant arthritis and the cotton ball like granuloma of mouse. The analgesic effect was determined with mouse writhing test and the hot plate test.ResultsThe MAEP could lessen the oedema of mouse"s ears and toes, decrease swelling of joints, inhibit inflammatory disease and the granuloma hyperplasia(P＜0.01). It could depress inflammatory exudates and leukocyte chemotaxis, reduce the writhing times causing by glacial acetic acid, decrease mouse threshold induced by heat stimulation(P＜0.01).ConclusionMusk-Aconite-Earthworm Pill possesses the analgesic and anti-inflammatory effects.
       Key words:Musk-Aconite-Earthworm Pill;  Pharmacological study;  Anti-inflammatory;  Analgesic
   
　　麝香乌龙丸出自宋代《普济本事方》(原名:麝香圆），由麝香、川乌、地龙、全蝎、黑豆组成，为治白虎历节而设。在保证药效、减少毒副反应的前提下，将原方中天然麝香改为人工麝香，生川乌改为制川乌，采用现代制剂工艺，制成丸剂。前瞻性对类风湿性关节炎进行了临床疗效观察［1］，取得良好治疗效果。为进一步探讨临床药理学基础，开展了抗炎、镇痛药理实验研究。现将结果报道如下。
       　1  材料
       1.1  动物选用昆明种小鼠和Wistar大鼠，均由华北煤炭医学院动物实验中心提供。
       1.2  药品麝香乌龙丸由华北煤炭医学院附属医院研制，批准文号为唐卫药剂字（93）普-003-104（现为冀药制字Z20051581）。将其溶解，在乳钵内研细与嗜黄胶加助溶剂吐温配成混悬液，备用。乙酰水杨酸，济南永宁制药有限公司出品；消炎痛，石家庄市第一制药厂出品；氢化可地松注射液，河北秦皇岛制药厂出品；生理盐水，郑州化学制药厂出品。
       1.3  试剂和仪器氯胺酮、二甲苯、角叉菜胶、弗氏完全佐剂、冰醋酸等实验所需试剂及打孔器、电子分析天平、恒温水浴箱、电热箱等仪器均由华北煤炭医学院药理教研室提供。
       2  方法
       2.1  抗炎作用
       2.1.1  对二甲苯致小鼠耳廓炎症的影响［2，3］取体重18~22 g雄性昆明种小鼠40只，随机分为4组，分别灌胃等容生理盐水、麝香乌龙丸2.0 g/kg、乙酰水杨酸0.2 g/kg，1次/d，连续3 d。于最后1次给药90 min后用微细针管在右耳均匀滴二甲苯0.04 ml/只致炎，30 min后颈椎脱臼法处死小鼠，立即剪下双耳，用直径8 mm的打孔器分别在左右耳相同部位取下耳片，用电子分析天平分别称重，根据两耳片差值求出肿胀度，并求出肿胀抑制率。
       2.1.2  对大鼠角叉菜胶足跖肿胀的影响［2，3］取体重150~180 g的雄性大鼠30只，随机分为3组，分别灌胃等容生理盐水、麝香乌丸1.0 g/kg，乙酰水杨酸0.2 g/kg，1次/d，连续给药4 d。于最后1次给药30 min后，分别在大鼠左后肢足跖筋膜处注射1%角叉菜胶混悬液0.1 ml/只致炎。致炎1，2，3，4 h时采用修改Buttle"s微量吸管容积测量法分别测定左后肢足跖容积，与其致炎前足跖容积作对照，求出的差值作为肿胀度。根据致炎1 h和3 h时与生理盐水对照组相比较，求出抑肿率。
       抑肿率（%）=对照组平均肿胀度-给药组平均肿胀度     对照组平均肿胀度×100%
       2.1.3  对大鼠完全弗氏佐剂性关节炎的防治作用［2，3］取体重150~180 g雄性大鼠48只，随机分为A，B，C，D 四组，每鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂0.1 ml致炎。A组为佐剂空白对照组，灌胃等容生理盐水；B组为麝香乌龙丸预防组，给药剂量1.0 g/kg，致炎后第7天灌胃给药，连续给药10 d；C组为麝香乌龙丸治疗组，给药剂量为1.0 g/kg；D组为消炎痛阳性对照组，给药剂量5 mg/kg。C，D组均在致炎后第14天灌胃给药，连续给药10 d。以致炎后24 d足踝肿周长、爪杵状肿、关节肿、尾结节及耳壳红斑总积分作为结果，进行组间比较，求抑制率。
       2.1.4  对大鼠细胞趋化作用影响［4］取体重150~180 g雄性大鼠20只，随机分为两组，对照组和麝香乌龙丸1.0 g/kg组。于实验前72，48，24，1 h灌胃给药4次，对照组给等容生理盐水。用3 mg/kg氯胺酮麻醉后，于大鼠右侧胸腔注入0.5%角叉菜胶0.5 ml/只致炎。致炎后5 h处死动物，打开右侧胸腔，用刻度吸管吸取胸腔渗出液，记录渗出量和白细胞计数，作组间比较。
       2.1.5  对大鼠棉球肉芽肿增生的影响［2，3］取体重150~180 g雄性大鼠30只，随机分为A，B，C 三组，然后用3 mg/kg氯胺酮腹腔注射，麻醉后，在无菌操作下切开两腋下皮肤，各植入20 mg消毒棉球，缝合切口。从手术当日开始，A组给等容生理盐水，B组灌胃给麝香乌龙丸1.0 g/kg，C组腹腔注射氢化可地松10 mg/kg。连续给药9 d后处死动物，打开原切口，将棉球连同周围结缔组织一起取出，剔出脂肪组织，放烘箱中80℃烘干，称重，减掉棉球重量，以每100 g鼠肉芽组织称重，作组间比较。
       2.2  镇痛作用
       2.2.1  对小鼠扭体反应的影响［2~4］取体重16~20 g昆明种小鼠30只，雌雄各半，随机分为3组，分别灌胃等容生理盐水、麝香乌龙丸1.0 g/kg、乙酰水杨酸0.2 g/kg，于给药40 min后每鼠腹腔注射0.6%冰醋酸0.2 ml，然后观察小鼠的痛阈及扭体出现的时间，以后肢伸展，腹部贴板扭曲及腹肌间歇收缩为指标，记录20 min内各组扭体次数，并计算各药的镇痛百分率。
       镇痛百分率（%）=对照组平均扭体数-给药组平均扭体数     对照组平均扭体数×100%
       2.2.2  对小鼠痛阈（热板法）的影响［2~4］取体重16~20 g的雌性小鼠，将小鼠逐个放在（55±0.5）℃恒温器触板上，小鼠自放在热板上至出现舔后足所需时间（s）作为该鼠的痛阈值。凡舔后足时间小于5 s或大于30 s或跳跃者弃去不用,将合格的30只小鼠随机分为3组.重复测其正常痛阈值,取两次正常痛阈平均值,作为给药前痛阈值。然后分别灌胃等容生理盐水、麝香乌龙丸1.0 g/kg和乙酰水杨酸0.2 g/kg，连续3 d，于末次给药后30，60，120 min时分别测小鼠痛阈值。如60 s仍无反应，将小鼠取出，以免烫伤，其痛阈值按60 s计算。将给药前后的痛阈值做统计处理。
       2.3  统计方法结果用±s表示，SPSS11.5软件进行统计学分析，采用单因素方差分析进行组间比较。
       　3  结果
       3.1  抗炎作用
       3.1.1  对二甲苯致小鼠耳廓炎症的影响麝香乌龙丸1.0 g/kg对二甲苯所致耳廓炎症有非常显著抗炎作用，与0.2 g/kg乙酰水杨酸作用相当，而高剂量的麝香乌龙丸抗炎作用低于低剂量组，说明麝香乌龙丸其抗炎作用并不随剂量增加而增加。结果见表1。
       表1  对二甲苯致耳廓炎症的影响（略）
       与生理盐水组比较，*P＜0.01；n=10
       3.1.2  对大鼠角叉菜胶足跖肿胀的影响麝香乌龙丸、乙酰水杨酸对大鼠角叉菜胶诱发的足跖肿胀均有明显的抑制作用，致炎1 h和3 h时抑肿率分别达62.90%，62.96%，肿胀高峰抑肿率分别为44.68%，30.14%，作用相近。结果见表2。
       表2  对大鼠角叉菜胶足跖肿胀的影响（略）
       与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=10
       3.1.3  对大鼠弗氏佐剂性关节炎的防治作用麝香乌龙丸对完全弗氏佐剂所致原发性和继发性损害有明显抑制作用，预防组对早期出现的炎症反应抑制率为69.04%，而治疗组对已出现的足踝肿、足爪杵状肿、关节肿个数、尾结节及耳壳红斑的抑制率为76.96%，治疗效果与5  mg/kg消炎痛作用相当。结果见表3。
       表3  对大鼠弗氏佐剂性关节炎的防治作用（略）
       与佐剂对照组比较，*P＜0.01；n=12
       3.1.4  对大鼠白细胞趋化作用的影响麝香乌龙丸可明显降低胸腔炎症渗出液量和白细胞计数（P＜0.01），提示麝香乌龙丸能抑制白细胞游走，具有明显抗炎作用。结果见表4。
       表4  对大鼠白细胞趋化作用影响（略）
       与生理盐水组比较，*P＜0.01；n=10
       3.1.5  对大鼠棉球肉芽肿增生的影响麝香乌龙丸灌胃与腹腔注射氢化可地松对大鼠棉球肉芽肿增生都有明显抑制作用（P＜0.01），且1.0 g/kg麝香乌龙丸与10 mg/kg氢化考地松效果相近（P＞0.05）。结果见表5。
       表5  对大鼠棉球肉芽肿增生的影响（略）
       与生理盐水组比较，*P＜0.01；△为每100 g鼠重之干重；n=10
       3.2  镇痛作用
       3.2.1  对小鼠扭体反应的影响麝香乌龙丸与乙酰水杨酸均可明显延长扭体出现的时间和减少扭体次数（P＜0.01），且1.0 g/kg麝香乌龙丸与0.2 g/kg乙酰水杨酸镇痛作用强度相似（P＞0.05）。结果见表6。
       表6  对小鼠扭体出现时间及次数的影响（略）
       与生理盐水组比较，*P＜0.01；n=10
       3.2.2  对小鼠痛阈（热板法）的影响麝香乌龙丸与乙酰水杨酸均可明显提高小鼠热板痛阈值（P＜0.01），且1.0 g/kg麝香乌龙丸与0.2 g/kg乙酰水杨酸延长疼痛反应时间相近。结果见表7。
       表7  对小鼠痛阈（热板法）的影响（略）
       与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01；n=10
       　4  讨论
       我院关节炎科研组经对历代文献及古代秘方挖掘整理，发现宋代《普济本事方》中的“麝香圆”对“历节病”治疗记载尤为突出，并提到“凡是历节及不测疼痛，一二服便差。”该方自宋代以后，多次出现在历代古医籍版本中，均曰“对关节诸风走痛立效”。说明该方被历代医家所推崇。麝香乌龙丸是在挖掘“麝香圆”的基础上，经反复制剂工艺研究和多年临床应用研制成的治疗类风湿性关节炎的纯中药制剂。本文药理实验研究表明，麝香乌龙丸对动物非免疫性和免疫性多种炎症模型和异物肉芽肿均有明显的抑制作用，并能明显提高痛阈值和延长疼痛反应时间，其抗炎、镇痛作用与0.2 g/kg乙酰水杨酸相当；在实验结束后解剖大小鼠，肉眼观察乙酰水杨酸给药组部分鼠胃局部有出血、糜烂、溃疡出现，而麝香乌龙丸组未发现有此副作用出现。现代药理实验表明［5］，麝香水提物对小鼠巴豆油耳部炎症、大鼠琼脂性关节肿、酵母性关节肿、佐剂性关节炎均具有明显的抑制作用，对大鼠烫伤性血管渗透性增加，羧甲基纤维素引起的腹腔白细胞游走，亦具有明显的抑制作用。有报道［6］，川乌对各种致炎剂如角叉菜胶、二甲苯等诱发大鼠足肿胀及巴豆油气囊肿渗出、肉芽组织增生、白细胞游走、PGE合成均有明显抑制作用，且对佐剂性关节炎等免疫炎症有显著抑制作用，同时还有明显镇痛作用。还有报道［7，8］，地龙、全蝎具有免疫抑制及镇痛作用。综上所述，麝香乌龙丸具有良好的药理学基础。通过临床观察，麝香乌龙丸对缓解关节疼痛、晨僵、消除关节肿胀、恢复关节功能等有明显疗效。该药有望开发成对类风湿性关节炎起到提高早期治愈率、控制中期发展、改善晚期症状的纯中药制剂。
       参考文献：
       ［1］  王志文，韩炳生，贾秀荣，等.麝香乌龙丸治疗类风湿性关节炎150例疗效观察［J］.四川中医，2000，18（4）：18.
       ［2］  徐淑云，卞如濂，陈  修.药理实验方法学，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，1991：714.
       ［3］  李仪奎.中药药理实验方法学［M］.上海：上海科学技术出版社，1991：299.
       ［4］  陈  奇.中药药理研究方法学［M］.北京：人民卫生出版社，1996：377.
       ［5］  朱秀媛，王文杰，徐桂芳，等.麝香的药理研究Ⅱ・麝香及其有效成分的抗炎作用［J］. 药学学报，1988，23（6）：406.
       ［6］  师海波，周重楚，李延忠，等.川乌总碱的抗炎作用［J］.中国中药杂志，1990，15（3）：46.
       ［7］  耿  晖.地龙药理作用研究概况［J］.时珍国医国药，2000，11（10）：952.
       ［8］  谭银合，郭建生.全蝎的化学成分及其镇痛作用的研究进展［J］.湖南中医药导报，2001，7（5）：210.
       (华北煤炭医学院附属医院，河北 唐山  063000)