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       【关键词】  人芽囊原虫；,,石榴根皮；,,胡黄连；,,,杀虫效果；,,,形态
       摘要：目的探讨石榴根皮等9种中草药杀人芽囊原虫的效果。方法采用不同浓度中草药水提液进行体外抗人芽囊原虫实验，并用光镜观察作用后人芽囊原虫的形态变化。结果随着药物作用时间的延长和药物浓度的增加，石榴根皮、胡黄连、黄连、苦楝皮对人芽囊原虫有不同程度的凋亡现象，这些药物对人芽囊原虫的MIC值分别为 0.1，0.6，0.8，0.8 g/ml，光镜观察虫体表膜凹陷，剥脱，破裂。低浓度胡黄连药物作用虫体后均转变成包囊，而白头翁、南瓜子、使君子、槟榔、苦参对人芽囊原虫均无作用。结论 石榴根皮、胡黄连可直接作用于虫体表膜，具有较强的杀人芽囊原虫的作用。
       关键词：人芽囊原虫；  石榴根皮；  胡黄连；   杀虫效果；   形态
       The Trichomnacidal Effect of Nine Chinese Herbs on the Blastocystis hominis
       SU Shuilian, CHEN Guifeng*,  ZHANG Ruiqi, XIE Qiongjun, LIAO Hua
       （Gannan Medical College, Ganzhou, Jiangxi Province 341000,China）
       Abstract：ObjectiveTo study the effect of Psidium guajaual  and other eight Chinese herbs on the Blastocysitis hominis. MethodsTrchomonacidal effect of Chinese herbs was investigated using various concentration of Chinese herbs water extract against Blastocysitis hominis in vitro.The morphological changes of the Blastocysitis hominis were observed by light microscope.ResultsWith prolongation of the time of drug action and increase of its concentration, Psidium guajaul, Picrorhra scrophulariitlora Pennell, Coptis chiennsis Franch and Melia azedarach Linn have the effect of apoptosis to Blastocystis hominis. Their lowest concentrations were respectively 0.1,0.4,0.6,0.8g/ml.We can observe the cell membrance hollowed,exfoliated  and ruptured. The Blastocystis hominis change into cyst with low concentration of Picrohica scrophulariitlora Pennell. And Pulsatilla chinenensis Bunge Regel, Cucurita moschata Ouch, Quisgualis indical, Areca actechata Duch and Sophora flavescens Aic have no effect to Blastocystis hominis.ConclusionPsidium guajaual and Picrorhica scrophulariitlora Pennell destroyed cell membrane directly and exhibited effective trichomonacidal Blastocystis hominis action.
       Key words：Blastocystis hominis；  Psidium guajaual；  Picrorhica scrophulariitlora Pennell；  Trichomonacidal effect;   Objective conformation
   
　　人芽囊原虫(Blastocystis hominis 简称B.h)是近20年被人们所重视的与腹泻相关的人体寄生原虫。在我国，已将其所致疾病列为新发传染病［1］，人芽囊原虫病一般呈散在发病，但在赣南崇义县于1996年发生过暴发流行［2］。我院2002级新生B.h感染率为10.09%（426/43）［3］。我们曾用甲硝唑对感染者进行治疗，3个月后复查大多数阴转效果不佳，且易复发。另有研究表明甲硝唑具有致畸和致癌作用［4］。文献报道石榴根皮性酸、味涩，具有涩肠、止血、杀虫之功效［5］。主要治疗细菌性痢疾、阿米巴痢疾和多种感染性疾病。胡黄连等具有解毒杀虫的功效［6］。为了提供、开发新的抗原虫的中草药实验数据，我们用了9种中草药在体外观察杀B.h的效果。现报道如下。
       　1  材料
       1.1   B.h虫株  虫株分离自赣南医学院附属医院消化科、儿科病人的粪便，在（36±0.5）℃的普通厌氧培养箱中培养，每3天传代1次，共传代20次的培养液。
       1.2   药物  实验用药（购自本院附属医院中药房及当地医药公司门市部），全部为中医药书中具有清热解毒和驱虫效果的中草药。
       1.3  培养基  Locke"s鸡蛋血清(LockeEggSerum ，LES) 双相培养基［5］，成30°斜面置90 ~100℃烤箱加热凝固制成。转种前每管加5 ml洛氏液，14％灭活的无菌新生小牛血清（购自中国杭州四季青生物工程材料有限公司）及碱性抗生素溶液（0.4%氨苄青霉素，0.1%链霉素，0.000 6%两性霉素B）即可转种。
       　2  方法
       2.1  药液制备  将9种中草药（干药）各10 g，分别装入250 ml三角烧瓶内，各置50 ml蒸馏水中，浸泡过夜，然后放入80℃水浴箱中热浸4 h。过滤除去药渣，滤液分别用文火浓缩至药液浓度为1，4，6，8。3 000 r/min离心10 min，取上清，抽滤除菌，调整渗透压，置无菌瓶中，4℃保存备用。
       2.2  光学显微镜观察   每种中草药配制4个药物浓度组，分别为0.1，0.4，0.6，0.8 g/ml，同时设无药对照组。取出培养36h的人芽囊原虫培养管，分别等量从培养基底层吸出20 μl虫体悬液滴于载玻片上，加盖玻片镜检。用血细胞记数器做计数观察，计算出每mm3所含虫数。每管虫体浓度约为1×103个/ml, 然后用不同浓度的药液1ml加入各培养管中，放置（36±0.5）℃培养箱中。培养2，4，8，12 h后分别吸取各管虫液滴片镜检，用高倍镜观察虫体活动状态，计算虫体死亡率。培养24 h后对死亡率为100%的实验管进行转种，（36±0.5）℃继续培养48 h，观察是否有B.h存活，所有实验重复3次。
       　3  结果
       同一作用时间，石榴根皮、胡黄连、黄连、苦楝皮组的B.h死亡率均高于对照组（P＜0.01），且虫体死亡率随药物浓度增加而增高（P＜0.01）；同一药物浓度，随着作用时间延长，B.h死亡率也逐渐增高（P＜0.05）。高倍镜下，石榴根皮组作用2 h后，1，4，6，8 g/ml浓度组虫体全部凋亡，形态发生明显改变。大部分虫体胞膜边缘模糊，虫体凹陷裂解（图１）。而胡黄连组作用2 h后1，4g/ml浓度组虫体全部诱导成包囊（图2）。作用8 h后6，8 g/ml浓度组虫体全部死亡。再将石榴根皮及胡黄连虫液组转种培养24 h，均未见B.h生长。苦楝皮、黄连对虫体作用不强，而白头翁、南瓜子、使君子、槟榔、苦参对人芽囊原虫无作用。结果见表1。对照组虫体完好无缺（图3）。
       图1  （略）
　　
　　图2  （略）
       图3  对照组（正常培养的人芽囊原虫）（略）
       MIC测定：结果显示石榴根皮、胡黄连对人芽囊原虫凋亡最快，时间最短，MIC最低。而黄连、苦楝皮作用不强，槟榔、苦参、白头翁、南瓜子、使君子对人芽囊原虫均无作用。结果见表2。
       表1  9种中草药体外杀人芽囊原虫效果（略）
       表2  9种中草药B.h实验的MIC比较（略）
       　　4  讨论
       中药石榴根皮Psidium guajaual是落叶灌木或小乔木，具有涩肠止泻止血、解毒杀虫的功效。临床常用于治疗久痢、久泻、便血、脱肛、崩漏、白带、虫积腹痛等症［6］。近年研究表明，石榴根皮具有对多种细菌和流感病毒有抑制作用［7］。胡黄连是玄参科多年生长低矮草木植物，是一种常用药材。有清热、除湿、明目、补肝、益胆、杀虫的效用。本研究证实，石榴根皮具有明显的杀灭人芽囊原虫的作用，0.1 g/ml浓度的药物作用2 h对B.h均具有杀灭和裂解作用。胡黄连早期可诱导虫体成囊，随着药物浓度的增加，作用时间的延长，B.h死亡率增高，即杀虫效果和药物浓度及作用时间成正相关。0.6 g/ml浓度的药物作用8 h人芽囊原虫全部凋亡。且转种后均无B.h生长。选择合适的药物浓度和作用时间进行光镜观察是研究药物作用机制的关键。据此，本次实验选用低浓度石榴根皮药液，虫体快速凋亡、裂解，充分显示了石榴根皮的杀虫效果，但无法观察虫体表膜受损的动态变化过程，其确切机制值得进一步研究。低浓度胡黄连药液能充分观察虫体受药物作用的变化，先将滋养体诱导成囊，然后在高浓度药物作用后，虫体迅速死亡。黄连、苦楝皮对人芽囊原虫作用不强，而白头翁、南瓜子、使君子、槟榔、苦参对人芽囊原虫均无作用，故认为石榴根皮、胡黄连水提液均有杀人芽囊原虫的作用。石榴根皮、胡黄连是一种常见中草药，我国资源丰富，成本低廉，毒性低。本次实验为利用石榴根皮、胡黄连研制新的外用兼口服的高效低毒的抗人芽囊原虫药物奠定基础。
       　　参考文献：
       ［1］  潘孝彰. 新发传染病［M］.北京：人民卫生出版社, 2004,153.
       ［2］  吴国宏，熊以树，曹镐禄，等. 一起人芽囊原虫病爆发流行的调查研究［J］.中国寄生虫学防治杂志  2000，13(1)：25.
       ［3］  苏水莲，陈桂凤，腾敏昌,等.大学新生肠道寄生虫感染情况调查［J］.中国寄生虫学防治杂志，2003，16(6)：381.
       ［4］  Goldman P. Metronidazole: proven benefit and potential risks［J］.Jones Hopkins MED J,1980,147:1.
       ［5］  苏水莲，严宜明，陈桂凤，等.  3种培养基体外培养人芽囊原虫的效果观察［J］.中国寄生虫学防治杂志，2004，17（6）：375.
       ［6］  杨丽平，杨永红 . 石榴皮的研究进展［J］.云南中医中药杂志 ，2004，25（3）：45.
       ［7］  江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科技出版社，1996：1262.
       (江西省赣南医学院，江西 赣州  341000)