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       【关键词】  超声波提取；,,枇杷叶；,,总黄酮；,,鉴别
       摘要：目的为充分利用枇杷叶植物资源，避免资源的浪费，探讨枇杷叶总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从枇杷叶中提取黄酮类物质，对所提取的黄酮类物质进行验证，并用紫外分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=0.909 0 mg/ml，回收率为100.9%，其纯度和产率均较高。结论该方法采用全物理过程，无任何污染，是提取枇杷叶黄酮类物质的有效途径。
       关键词：超声波提取；  枇杷叶；  总黄酮；  鉴别
       The Total Flavanone of  Folium Eriobotryae Extraction and the Identification by Ultrasonic Wave
       HUANG Suoyi， LI Wei bin， YANG Wenhui，LI Rong
       （Department of Chemistry, Youjiang Medical College for Nationalities，Baise Guangxi 533000，China）
       Abstract：ObjectiveTo investigate the extraction and identification methods of total flavanone from Folium Eriobotryae.  MethodsThe flavonoids were extracted from Folium Eriobotryae with ultrasonic wave and ethanol extraction. The spectrophotometry was used toextract and check the flavanone of Folium Eriobotryae.  ResultsBy this method the density of the total flavanone of Folium Eriobotryae leaves obtained was C=0.909 0mg/ml and the rate of  recovery was 100.9%. ConclusionThis text provides the extraction and punfication methods to get the outcome and the purity of the flavanone is high. This method is a purely physical process and has no pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of folium eriobotryae leaves.
       Key words：Ultrasonic wave treatment;  Folium eriobotryae;  Total flavanone;  Identification
   
　　枇杷叶为蔷薇科常绿小乔木植物枇杷Eriobotrya japonica (Thnnb.) Lindl.的叶,味苦，性凉。用于肺热咳嗽，气逆喘急，胃热呕逆，烦热口渴，清肺止咳，降逆止呕。治疗腰椎增生性关节炎、前列腺增生、术后疼痛、痹症、肩周痛、消除乳房硬块及辅治神经疾病等症状［1，2］。研究表明［3，4］：枇杷叶的主要化学成分为橙花叔醇、金合欢醇以及丰富的黄酮类化合物。尚有α和β蒎烯、莰烯、月桂烯、对聚伞花素、芳樟醇、α衣兰烯、α和β金合欢烯、樟脑、橙花醇、牛儿醇、α毕澄茄醇、榄香醇、顺β,γ己烯醇和芳樟醇氧化物。亦含苦杏仁苷、熊果酸、齐墩果酸、酒石酸、柠檬酸、苹果酸、鞣质、维生素B和维生素C等，还含山梨糖醇。有文献报道枇杷叶中总黄酮的提取方法采用水提法［3］，但是，这种方法的提取效率仍然较低。近年来，超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道［4，5］，表明其具有能耗低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明，利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等，可加速植物材料中的有效成分进入溶剂，从而增加有效成分的提取率，缩短提取时间，并且还可避免高温对提取成分的影响［5］，但超声技术应用于提取枇杷叶中黄酮类物质的研究尚未见报道。本文报道用超声波提取枇杷叶总黄酮及鉴别。
       1  仪器与试剂
       1.1  仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；UV755B紫外可见分光光度计（上海分析仪器总厂）；ZFI型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂)；SHBIII循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。
       1.2  试剂 95%乙醇AR；亚硝酸钠AR；硝酸铝AR；氢氧化钠AR；三氯化铝AR；盐酸AR；氨水AR；冰醋酸AR；醋酸乙酯AR；芦丁标准品（中国药品生物制品检定所）；新鲜枇杷叶采自右江民族医学院校园内。
       2  方法与结果
       2.1  总黄酮成分提取 取新鲜枇杷叶，烘干，粉碎。称取枇杷叶粉末约6 g，加80 ml 95%乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇，超声波提取2.5 h，抽滤，合并两次滤液，减压回收乙醇至滤液仅剩5~7 ml为止，放置100 ml容量瓶中，用60%乙醇稀释至刻度，得样品液。
       2.2  测定方法依据  以芦丁为对照品测定枇杷叶中总黄酮的含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成络合物，在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
       2.3  定量实验总黄酮的含量测定
       2.3.1   波长的选择  取样品液适量，在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下，经硝酸铝显色后，以试剂为空白参比液在420~700 nm波长范围测定螯合物的吸光度，螯合物于510 nm波长处有最大吸收，故测定时选用此波长。
       2.3.2  标准曲线的绘制  分别精密吸取芦丁对照液（0.10 mg/ml）0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 ml于10.00 ml容量瓶中，分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加10%硝酸铝溶液0.30 ml，摇匀，静置6 min；再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml，用60%乙醇稀释至刻度，摇匀，静置12 min，以试剂作空白，于510 nm处测定吸光度。结果见表1。
       表1  紫外可见分光光度计测定（略）
       2.3.3  提取物含量的测定  精密吸取样品液0.50 ml，置10.00 ml容量瓶，按标准曲线的制备方法测定其吸光度A=0.635，根据回归方程：A=2.230×10-4+14.46C，计算样品中总黄酮的含量C=0.909 0 mg/ml。
       2.3.4  回收实验  精密量取样品液1.00 ml，加入标准芦丁对照品1.00 ml（0.10 mg/ml），同前样品测定方法操作测定吸光度，求出回收率为100.9% 。
       2.4  定性实验总黄酮的鉴别
       2.4.1  颜色反应紫外光下呈色反应：取该样品溶液点在滤纸上，在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。浓氨水反应：取该样品溶液点在滤纸上，将滤纸在氨水上方熏0.5min，立即在紫外光下观察，呈极明显的黄褐色荧光斑点。三氯化铝反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加１％三氯化铝乙醇溶液，吹干。在可见光下呈灰黄色，在紫外光下呈黄色荧光斑点。乙酸镁反应：取样品溶液点在滤纸上，滴加1%乙酸镁甲醇溶液，吹干，紫外光下呈黄色斑点。盐酸镁粉反应：取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉，再加入浓盐酸数滴（1次加入），在泡沫处呈紫红色。
       2.4.2  纸层析取样品溶液10μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5为展开剂，上行展开5 h，取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下，可见荧光斑点。
       　3  讨论
       实验结果表明，本实验方法工艺简单，回收率为100.9%，利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法，达到省时、高效、节能的目的，此方法采用全物理过程，无任何污染，是一条理想的提取黄酮类物质的途径，具有广阔的应用前景。黄酮类化合物是一大类天然产物，广泛存在于植物界，是许多中草药的有效成分。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇，其它包括双氢黄（醇）、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等［6］。天然来源的生物黄酮分子量小，能被人体迅速吸收，能通过血脑屏障，能进入脂肪组织，进而体现出如下功能：消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。　　黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用［7］。近年来，世界上掀起了植物药开发的热潮，植物药以其天然低毒的特点倍受青睐，而黄酮类化合物以其广谱的药理作用引人瞩目，枇杷叶分布广泛，本文实验结果表明，枇杷叶中含有较为丰富的黄酮。因此，枇杷叶具有广泛开发和利用价值，值得综合利用加强资源开发。
       参考文献：
       ［1］  陈小刚.常用中草药临床新用［M］.广州：广东科技出版社，2005：69.
       ［2］  光  阳.枇杷叶新用途［J］. 湘西科技，2003，1:32.
       ［3］  林启训. 枇杷叶黄酮类化合物的水浸提工艺研究［J］.农业工程学报，2005，21(7):190.
       ［4］  刘祥义. 超声波提取元宝枫叶总黄酮方法研究［J］.云南化工，2003，30（1）：27.
       ［5］  谢明杰，宋  明，邹翠霞，等. 超声波提取大豆异黄酮［J］.大豆科学，2004，23(1):75.
       ［6］  夏杏洲，张  辉，魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究［J］.食品研究与开发，2002，23(5):35.
       ［7］  华光军，郭  勇.黄酮类化合物药理研究进展［J］.广东药学，1999，9（4）：9.
       (右江民族医学院，广西 百色  533000)