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       【关键词】  渗漉提取；,,冬凌草；,,,正交实验,；,,冬凌草甲素
       摘要：目的采用正交试实验法研究冬凌草的渗漉提取工艺。方法以冬凌草甲素的含量为考察指标，选择浸泡时间、渗漉流速、收集量3个因素，每个因素3个水平进行实验。结果优选出渗漉提取的最佳工艺为A2B1C3，即用95%乙醇浸泡12 h后，以每公斤药材每分钟3 ml流速渗漉，收集10倍量渗漉液。结论 采用该法提取具有提取快速、节省溶剂，有效成分提取率高等优点。
       关键词：渗漉提取；  冬凌草；   正交实验 ；  冬凌草甲素
       Studies on Percolation Extraction Process of Rabdosia rubescens
       YU Li, YIN Mingwen,  L Jieli, JIA An, YUAN Ke
       (Pingdingshan College of Industry, Pingdingshan 467000 ,China; Zhengzhou University, Zhengzhou 450003，China; College of Pharmacy, Henan University of Traditional Chinese Medicine, Zhengzhou 450003,China )
       Abstract：ObjectiveTo study the percolation extraction process of Rabdosia rubescens by orthogongal texts.MethodsSoaking time, flow speed and volume of collection solution were the three factors, and three levels of each factor were condrected to optimize the extraction process. ResultsThe best process was A2B1C3, i. e. extracting with 95% EtOH that soaking 12 h, the flow rate was 3 ml. each kilogram materia medica each minite is 3 and ten times the volume of percolation solution were collected. ConclusionThe Method has the advantage of rapid extraction speed, saving solvent, higher extraction rate etc.
       Key words：Percolation extracting;  Rabdosia rubescens;  Orthogonal test;   Oridonin
   
　　冬凌草Rabdosia rubescens Hemsl为唇形科香茶菜属多年生草本植物，主产于我国黄河流域及其以南各地区。具有清热解毒、消炎止痛等功效。其主要成分冬凌草甲素具有很强的抗肿瘤活性［1］。对于冬凌草中有效成分的提取，一般选用95%乙醇为溶剂，采用回流法、冷浸法、渗漉法、破碎法等进行提取。研究结果表明［2］,由于有效成分冬凌草甲素为一热敏性成分，故提取不宜采用热回流法，而室温提取法中的破碎提取仅限于实验室小规模，离工业化生产尚有距离。对于大规模工业化生产，最适合的提取方法应为渗漉提取或冷浸提取。为了确定出渗漉提取法的最佳工艺条件，本文采用正交实验法进行研究，优选出了最佳工艺条件。
       　1  器材
       Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；自动进样器；HP1100化学工作站；R201B旋转蒸发仪（上海申胜生物技术有限公司），渗漉筒（用8 cm×12 cm层析柱代替），微量分析天平（EETTLER AE 240瑞士）。冬凌草于200310购自河南省济源市药材公司。冬凌草甲素对照品：自制，含量99.22%。色谱纯甲醇，双蒸水，其它试剂均为分析纯。
       　2  方法与结果
       2.1   色谱条件 色谱柱为ODSC18柱，流动相为甲醇水(55∶45)，柱温25℃，检测波长λ=242 nm。
       2.2   标准曲线的绘制  精密称取冬凌草甲素对照品10.00 mg，加甲醇定容至25 ml量瓶中，摇匀后得到浓度为400 μg/ml的对照品溶液。分别进样上述浓度为400 μg/ml的冬凌草甲素对照品溶液0.2，0.4，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0，8.0 μl，记录峰面积。结果冬凌草甲素进样量在0.08 ～1.32 μg之间，峰面积与冬凌草甲素进样量呈良好线性关系，回归方程：Y=1 464.410 36X+30.618 38，r=0.999 97。
       2.3  样品溶液的制备   分别精密称取冬凌草全草粗粉9份，每份500 g，用95%EtOH 500 ml拌匀，密闭使其溶胀3 h，分别装入渗漉筒中，按正交实验表中所选取的3因素3水平进行渗漉提取，吸取渗漉液5 ml用甲醇定容至100 ml量瓶中，测定时分别吸取10 μl进样，记录峰面积，计算冬凌草甲素的含量。
       2.4   正交设计   通过正交实验，以冬凌草甲素的含量为考察指标，选用L9(34)正交方案，以浸泡时间、渗漉流速、收集量3个因素，每个因素3个水平设计实验方案。结果见表1。以冬凌草甲素的含量作为考察指标，选用 L9(34)安排实验，实验数据及方差分析结果见表2～3。
       表1  因素水平（略）
       表2  正交实验设计及实验数据（略）
       表3   方差分析（略）
       　　3  讨论
       在正交实验中选取冬凌草中的主要有效成分冬凌草甲素的含量作为优选正交方案的指标，方差分析结果表明，因素A和因素B对冬凌草甲素的含量均有显著的影响，因素C有极显著性影响。根据表2直观分析结果，最佳组合应为A2B1C3。因此，优选出渗漉提取的最佳工艺为：将冬凌草全草粗粉用95%乙醇溶胀3 h后装入渗漉柱中，用95%乙醇浸泡12 h后，以每公斤药材每分钟3 ml流速渗漉，收集10倍量渗漉液。与冷浸法相比，渗漉提取由于始终保持一定的浓度差，所以提取效率有所提高，且提取液中有效成分的含量高于冷浸法［3］，并具有设备简单、操作方便、溶剂用量适中、不需加热，有利于不耐热成分不被破坏等特点。该工艺可进行放大供工业化生产参考。
       　参考文献：
       ［1］  刘晨江, 赵志鸿. 冬凌草的研究进展 ［J］. 中国药学杂志, 1998, 33(10)： 577.
       ［2］  袁  珂, 胡润淮, 张庆岭, 等. 冬凌草不同提取工艺的研究 ［J］.  中草药, 1997，28(7)： 405.
       ［3］  袁  珂, 胡润淮, 翟剑波. 正交试验法优选冬凌草的提取工艺［J］. 中国现代应用药学, 1998, 15(5): 14.
       (平顶山工学院，河南 平顶山  467000；  郑州大学，河南 郑州  450003； 河南中医学院药学院，河南 郑州  450003)