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       【摘要】 
       目的建立筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的高效液相色谱测定方法。方法用二氯甲烷甲醇（4∶1）提取样品，ODSC18色谱柱，甲醇水（80∶20）为流动相，流速0.8 ml/min，检测波长270 nm，外标法定量分析。结果分离度1.8，RSD=1.59%，平均回收率104.6%。结论 该法分离度、精密度及稳定性好，可作为筋骨消痛丸的质量控制方法。
       【关键词】  筋骨痛消丸； 丹参酮ⅡA； 高效液相色谱法
       
       HPLC Determination of Tanshinone ⅡA in Jingutongxiao Pills
       FENG Kun, CHEN Baolong, XIE Wen
       Academy of Traditional Chinese Othopedics and Traumatology of Henan Province, Luoyang 471002, China
       Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of thanshinone ⅡA in Jingutongxiao Pills. Methods Chloroform-methanol (4∶1) was used as the solvent to prepare the samples. ODS-C18 was used as stationary phase. Methanol-water (80∶20) was used as the fluid phase. The flow rate was 0.8 ml/min. The detection wavelength was 270 nm. Quantitatively analytic method was external standard means. Results The resolution was 1.8, RSD was 1.59%. The average recovery was 104.6%. Conclusion The results showed the method has good resolution precision and accuracy. The method can be used for the quality control of Jingutongxiao Pills.
       Key words：Jingutongxiao Pills;  Thanshinone ⅡA;  HPLC
        筋骨痛消丸是国家三类中药，由丹参、鸡血藤、香附、桂枝、白芍、川牛膝等组成，具有活血行气、温经通络、消肿止痛的功能，主治骨质增生引起的关节疼痛、肿胀、活动受限等症。筋骨痛消丸质量标准规定用薄层扫描法测定丹参ⅡA酮含量，由于薄层扫描法的定量精度较低,稳定性不高，不利于产品的生产和质量控制。为此，本文用高效液相色谱技术，建立了筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的HPLC快速测定法，以提高产品质控精度，保证产品生产和质量的稳定性。
       1  仪器与试剂
       1.1  仪器  
       Waters 510 高效液相色谱泵，Waters486 检测器，U6K 进样器，Baseline 810 色谱工作站。
       1.2  试剂 
       丹参酮ⅡA标准对照品为中国药物生物制品鉴定所生产，筋骨痛消丸为河南省洛正制药厂产品［（97）卫药准字Z106号］，甲醇（色谱纯），重蒸水，二氯甲烷（分析醇）。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件 
       高效液相色谱柱Zorbax，ODS-C18 (4.6 mm × 250 mm, 5 μm）, 美国杜邦公司；流动相为甲醇-水（80：20）；流速 0.8 ml/min；检测波长 270 nm，灵敏度 0.05AUFS，柱温为室温。
       2.2   供试液制备 
       取筋骨痛消丸样品及阴性对照样品适量研成细粉，精确称取细粉1.20 g 置于25 ml离心管中，加 10 ml 二氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶剂，超声提取 30 min，离心取上清，残渣重复提取两次，合并3次上清液，水浴回收溶剂至干，残留物用甲醇溶解并定容至 25 ml，经0.45 μm微孔滤膜过滤，取续滤液为供试液。
       2.3   柱效与分离度 
       用标准对照品溶液测得色谱柱理论塔板数为 12840，样品中丹参酮ⅡA峰与邻峰的分离度为 1.8，阴性对照样品在目标峰位置无吸收峰干扰。
       2.4  线性关系与标准曲线 
       称取丹参酮ⅡA标准品 10.00 mg，用甲醇溶解，定容至 10 ml为1.00 mg/ml的标准贮液。分别吸取一定量标准贮液，稀释至浓度为 1～800 μg/ml的系列标准溶液。进样10 μl，测定目标峰积分面积，以色谱峰积分面积为纵坐标，以标准浓度为横坐标作图，结果在 10～400 μg/ml 浓度范围内，色谱峰积分面积与进样浓度线性关系良好，线性回归方程为 Y=1.011 64×108X-1.15×106，相关系数 r=0.999 6。
       2.5   回收率测定 
       取已知丹参酮ⅡA含量的筋骨痛消丸样品细粉约 1.00 g，精密称量 5 份，每份精密加入定量的丹参酮ⅡA标准对照品，混合后按样品处理方法处理，进样 10 μl，测定目标峰面积，用标准曲线计算样品中丹参酮 ⅡA的含量，计算结果样品中丹参酮ⅡA回收率为 104.6%。
       2.6   精密度与重复性
       用标准对照品溶液连续进样 10 次，测得精密度RSD=1.12%，对同一样品细粉同时取 6 个样，按上述方法提取、分析，重复性 RSD=1.59%。
       2.7  丹参酮ⅡA的热稳定性分析
       样品供试液制备后，分别在室温常规条件下和冷藏避光条件下保存10 min，4，8，12，24 h和48 h，分别测定各放置时间样品中的丹参酮ⅡA含量，测定结果表明，供试液在室温常规条件下保存8 h内，或冷藏避光条件下保存24 h内测定，不会影响分析结果。
       2.8  样品含量测定 
       分别取3个批号的筋骨痛消丸样品，按上述方法处理制备供试液，测定样品中丹参酮ⅡA含量，3批样品中的含量分别为 0.035 4%，0.033 9%，0.034 8%。
       3  讨论
        参考相关文献，对比研究了甲醇、二氯甲烷、二氯甲烷-甲醇不同比例的溶剂对筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的提取效果，结果用二氯甲烷-甲醇（4∶1）混合溶剂对筋骨痛消丸中丹参酮ⅡA的提取较完全。本方法有较好的分离度和精密度。样品供试液制备后，在室温下8 h内或在闭光的条件下48 h内有较好的稳定性，可以作为产品的质量控制指标。
        
       【参考文献】
         　　［1］于 彤，吴秀清.高效液相色谱法测定复方丹参颗粒中丹参酮ⅡA的含量［J］.中药材，1998，21（8）：421.
       
       ［2］谭生建，王文明，胡文祥，等.HPLC法测定通脉冲剂中丹参ⅡA的含量的研究［J］.中国中药杂志，1999，24（9）：545.
       
       ［3］杨毅恒，张晓乐，王淑庆，等.乳结消散片中丹参酮ⅡA的含量测定［J］.中国药学杂志，2001,36（1）：56.