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       【摘要】 
       目的建立测定青黛中靛玉红的含量方法。方法采用高效液相色谱法，以spherisorb C18 (4.6 mm×200 mm)为色谱柱，甲醇0.1 mol/L乙酸铵(65∶35)为流动相，检测波长为280 nm，流速为1 ml/min，柱温35℃。结果青黛中靛玉红的含量在5.98～59.8 μg/ml范围内线性良好(r=0.999 5)。平均回收率99.87%，RSD 1.31% 。结论该方法测定简便快速、可靠，可作为青黛中靛玉红含量的质量控制。
       【关键词】  靛玉红； 青黛； 高效液相色谱法
       Determination of Indirubin from Indigo Naturalis by HPLC
       CHENG Lihui,LI Xiaomeng
       Guangdong Pharmaceutical University, Guangzhou,510224，China
       Abstract:ObjectiveTo establish the method of determination of indirubin from  Indigo Naturalis. Methods HPLC was employed, which chromatographic column was spherisorb C18 (4.6 mm×200 mm), mobile phase was methanol0.1 mol/L of ammonium acetate, flow rate was 1 ml/min, detection wavelength was 280 nm and column temperature was 35℃. ResultsA good linear correlationship was obtained when indirubin content ranged from 5.98 μg/ml to 59.8 μg/ml(r=0.999 5). Average recovery was 99.87%, RSD was 1.31%. ConclusionThis method is simple, rapid,  reliable and suitable for assay  of indirubin from Indigo Naturalis.
       Key words: Indirubin;   Indigo Naturalis;    HPLC
        青黛为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica 、爵床科植物马蓝Baphicacanthus cusia 、豆科植物木蓝Indigoferas tinctoria 、蓼科植物蓼蓝Polygonum tinctorium等的叶或茎叶,经加工制得的干燥蓝色粉末或团块,是常用中药。近年来研究发现, 靛玉红是青黛中的抗癌有效成分，主要抑制白血病细胞的DNA合成。为了有效控制其质量，制定科学的质量检测标准，确保疗效，本文采用高效液相色谱法测定其活性成分靛玉红的含量。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器Shimadzu HPLC仪 ，LC10ATVP溶液输送泵, SPD10AVP紫外可见检测器，SLC10AVP控制器，CTO10ASVP控温箱，LcSolution工作站。
       1.2   试药青黛(福建仙游)，靛玉红对照品(中国药品生物制品检定所，717200204，供定量测定用)，甲醇为色谱醇；乙酸铵、醋酸乙酯为AR）。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱为Spherisorb C18 (4.6 mm×200 mm)；流动相为甲醇0.1 mol/L乙酸铵(65∶35)；流速为1 ml/min；检测波长为280 nm；柱压为5.4 MPa；柱温35℃ ，Shimadzu SPD 10AV 紫外检测器。进样量10μl。理论板数按靛玉红色谱峰计算不低于2200，靛玉红色谱峰与相邻峰之间的分离度均大于1.5。
       2.2  对照品溶液的制备精密称取靛玉红标准品2.99 mg, 加适量醋酸乙酯超声溶解，并定容于25 ml容量瓶中，配制成浓度为119.6 μg/ml的对照液。
       2.3  供试品溶液的制备准确称量青黛1.3 g，置索氏提取器中，用醋酸乙酯提取，然后移到50 ml容量瓶中，用醋酸乙酯定容，混匀后用微孔滤膜过滤，作为供试品溶液。
       2.4  标准曲线的制备分别精密吸取对照品溶液0.5，1，2，3，4，5 mI 置于l0 ml量瓶中，用醋酸乙酯定容，摇匀并用微孔滤膜滤过。依次进样10 μl，按上述色谱条件操作，以峰面积分值为纵坐标，相应浓度为横坐标绘制标准曲线，进样线性回归，得回归方程y=4 786.5x +31 185(r=0.999 5)，结果表明靛玉红在5.98～59.8 μg/ml范围内线性关系良好。
       2.5   精密度实验取同一靛玉红对照品溶液连续进样5次，10 μl/次，根据峰面积计RSD=0.5%。
       2.6  稳定性实验取同一样品溶液分别在制备后12,24,36,48,60,72,84,96 h分别测定1次峰面积，结果RSD=0.8%，表明样品至少在4 d内稳定性良好。
       2.7  重现性实验取同一批样品(批号20060401)3份，按上述色谱柱条件测定其含量，结果平均含量为3.0 %，RSD＝0.9% 。
       2.8  加样回收实验在已知含量的样品(同批号20060401)供试液中，加人不同量的靛玉红对照品，按照含量测定方法进行测定。结果见表1。表1  回收率实验结果（略）
       2.9   样品测定
       按上述方法，对样品中靛玉红的含量进行测定。靛玉红对照品溶液及批号20060601样品的HPLC见图1～2，测定结果见表2。表2  样品测定结果（略）
       3  讨论
        流动相的选择：曾实验多种流动相，结果发现以甲醇－0.1 mol/L乙酸铵(65∶35)，样品中靛玉红与其它成分可达到基线分离，空白对照液亦无干扰。
        溶剂的选择：曾选用氯仿［1］和醋酸乙酯作溶剂实验。结果发现以醋酸乙酯作溶剂靛玉红与靛蓝可完全分离，分离效果与峰形均好。
        本文用HPLC法测定青黛中靛玉红的含量，实验证明，本法具有操作简便、快速、结果可靠、易于掌握的特点，是较理想的靛玉红质量控制方法。至于靛玉红含量的控制范围，有待进一步研究。
       【参考文献】
         　　［1］曹 红，刘 云．高效液相色谱法测定复方青黛片中靛蓝和靛玉红的含量［J］.药物分析杂志，1999，19(3)：195.