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       【摘要】 
       目的比较山茱萸不同炮制品中马钱素含量。方法高效液相色谱法。结果各炮制品中的马钱素含量相对于生品含量有所降低。结论不同的炮制方法对山茱萸中的马钱素含量有明显影响。
       【关键词】  山茱萸； 炮制； 马钱素； 高效液相色谱法
       
       The Comparison of the Contents of  Loganin in Fructus Corni by Different Processes
       HU Haitao, ZHANG Zhenling, ZHU Xuan
       Henan University of Traditional Chinese Medicine , Zhengzhou  450008, China
       Abstract：Objective To compare the contents of Loganin in Fructus Corni by different processe. MethodsHPLC.ResultsThe contents of prepared Loganin were lower than those of the crude herb.ConclusionThe different process have obvious effects on the contents of Loganin in Fructus Corni.
       Key words：Fructus Corni;  Process;  Loganin;  HPLC
        山茱萸具有补益肝肾、涩经固脱之功效，用于眩晕耳鸣、腰膝酸痛、阳痿遗精、遗尿、尿频、崩漏带下、大汗虚脱、内热消渴等症，是成药六味地黄丸、八味地黄丸等的重要原料。目前认为山茱萸中所含的熊果酸、齐墩果酸 、山茱萸苷、马钱素、没食子酸、莫诺苷等为其主要活性成分［1］，具有降低血糖、 增强免疫、利尿、降压、抗炎等药理作用［2］。《中国药典》2005版规定测定马钱素含量作为山茱萸药材质量控制指标［3］。山茱萸临床和入中成药多用其炮制品，并认为山茱萸生用以敛阴止汗力强，蒸制后以补肾涩精，固精缩尿力胜，酒炙后借酒力温通，助药势，降低其酸性，滋补作用强［4］。马钱素作为山茱萸中水溶性有效成分之一，其结构属于环烯醚萜苷类成分，炮制加热和加辅料对其含量肯定有一定影响，但目前尚未见到有关报道。本研究以马钱素为考察指标，比较不同炮制方法对其含量的影响，以期为制定山茱萸合理的炮制工艺提供实验依据。
       1  器材
       1.1  仪器与试剂BS210S型电子天平（北京赛多利斯天平有限公司）；高效液相色谱仪：LC-2010A(SHIMADZU)；检测器 SPD-M10A；工作站：Class－VP；H66025T超声清洗机（无锡超声电子设备厂）；101A-2型干燥箱（中华人民共和国上海市实验仪器总厂）；LDZX-40BI型立式自动电热压力蒸气灭菌器（上海申安医疗器械厂）。马钱素对照品（由北京格润得科技公司提供，纯度在98%以上）；黄酒（河南濮阳亚光酒厂）；甲醇（天津四友生物有限公司）、乙腈(杭州百林)为色谱纯；氯仿、无水乙醇等均为分析纯。
       1.2  药材由宛西制药股份公司提供，产于河南西峡县山茱萸GAP种植基地，经河南中医学院生药学科陈随清教授鉴定为山茱萸科植物山茱萸Cornus officinalis Siet. et Zncc.的干燥成熟果肉。
       2  方法
       2.1  样品制备根椐《中国药典》净制要求，取山茱萸样品，除去杂质和残留的果梗和核，即为净山茱萸，再按不同炮制方法的要求炮制成为以下实验样品。
       2.1.1  生品取山茱萸样品，除去杂质和残留的果梗和核，放置备用。
       2.1.2  加压酒蒸品取净山茱萸100 g，缓慢加入40 ml黄酒搅拌均匀，加盖密闭闷润20 min后将样品放入压力锅中蒸制，待温度升至115℃后，保持该温度1 h，取出摊于瓷盘中，于烘箱中80℃烘3 h至干，取出，置干燥器中放凉备用。
       2.1.3  酒蒸品取净山茱萸100 g，缓慢加入40 ml黄酒搅拌均匀，加盖闷润40 min，置于滤布上摊开，放在蒸笼上蒸3 h后，于烘箱中80℃烘3 h至干，取出，置干燥器中放凉备用。
       2.1.4  酒炖品取净山茱萸100 g，缓慢加入20 ml黄酒搅拌均匀, 加盖闷润60 min，置不锈钢锅中，隔水炖3 h，摊于瓷盘中，于烘箱中80℃烘3 h至干，取出，置干燥器中放凉备用。
       2.1.5  清蒸品取净山茱萸100 g，置于滤布上摊开，放在蒸笼上蒸3 h后，取出摊于瓷盘中，于烘箱中80℃烘 3h至干，取出，放于干燥器中放凉备用。
       2.2  山茱萸不同炮制品中水分含量比较按照《中国药典》规定方法［3］分别称取山茱萸炮制品粗粉3 g，平铺于干燥至恒重的扁形称量瓶中，精密称定，打开瓶盖，在105℃干燥5 h，将瓶盖盖好，移至干燥器中，冷却30 min，精密称定重量，再在上述温度干燥1 h，冷却，称重，至连续两次称重的差异不超过5 mg为止。根据减失的重量，计算山茱萸不同炮制品中水分的含量。结果见表1。表1  山茱萸不同炮制品中水分的含量结果（略）
        从山茱萸不同炮制品中水分含量可以看出，所有炮制品中含水量都在7%～13%以内，符合《中国药典》规定。此外，实验中所有炮制样品中的马钱素含量都按干燥品计算。
       2.3  HPLC法测定马钱素含量
       2.3.1  色谱条件色谱柱为ODS柱4.6 mm×250 mm(大连依利特)；乙腈-水（15∶85）为流动相；检测波长240 nm；柱温25℃；流速1ml/min；分析时间20 min。
       2.3.2  对照品溶液的制备精密称取马钱素对照品0.46 mg置2 ml容量瓶中，加甲醇(色谱纯)使溶解并定容至刻度，摇匀，微孔滤膜过滤（0.45 μm）,即得浓度为0.23 mg·ml-1马钱素对照品溶液。
       2.3.3  标准曲线绘制依次自动进样马钱素对照品溶液1， 3， 5， 7 ，9 μl于高效液相色谱仪中，按上述色谱条件测定,并对结果进行分析。以峰面积积分值为纵坐标，对照品含量为横坐标，绘制标准曲线。回归方程为：Y=1 274 329.13X-17 626.1，r=0.999 9。结果表明在0.23～1.15 μg范围线性关系良好。见表2和图1。表2  山茱萸马钱素标准曲线数据（略）
       2.3.4  精密度实验连续自动进样马钱素对照品溶液5 μl，按前述条件测定峰面积积分值，计算RSD值，结果表明精密度良好RSD=0.097%。结果见表3。表3  精密度考察结果（略）
       2.3.5  稳定性实验分别在0，2，4，6，8，10 h自动进样马钱素对照品溶液5μl，照前述色谱条件测定峰面积积分值计算RSD值，结果表明马钱素在10 h内稳定性良好,RSD=0.15％。结果见表4。表4  稳定性考察结果（略）
       2.3.6  重复性实验称取山茱萸同一样品粗粉5份各约1 g，精密称定，按照供试品溶液制备方法和色谱条件，制备供试品溶液并注入高效液相仪，计算含量， RSD=1.63％。结果见表5。表5  重复性实验结果（略）
       2.3.7  加样回收率实验取已知马钱素含量的山茱萸粉末约0.5 g，精密称定，共5份，分别加入马钱素对照品，以下按供试品溶液制备项下操作，得到5份加样回收供试液。自动进样各加样供试液10  μl，测定，用外标法根据峰面积积分值进行计算。结果见表6。表6  加样回收率实验结果（略）
        每份加入对照品4.040 mg ，样品含量8.081 0 mg·g-1。
       2.3.8  供试品溶液的制备各取样品粗粉约1 g，精密称定，置具塞三角瓶中，加入30%甲醇10 ml，超声提取15 min，倾出上清液抽滤，重复上述操作4次，用适量30﹪甲醇清洗残渣,合并滤液，定容至50ml容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。
       2.3.9  样品含量测定取各供试品溶液分别自动进样5μl，测定马钱素峰面积积分值，计算样品含量。对照品和样品色谱图见图2～4。结果见表7。表7  不同炮制品中的马钱素含量（略）
        熊果酸含量和马钱素含量均是以干燥品计，且是两次测定的平均值
        从表7可知，马钱素含量相对于生品含量均有所降低，由高到低依次为生品>酒炖品>加压酒蒸品>酒蒸品>清蒸品。
       3  讨论
       3.1  山茱萸由于药用历史悠久，炮制方法较多，本实验所采取的是临床常用的炮制方法，加压酒蒸、清蒸、酒炖、酒蒸等炮制工艺中的加酒量、闷润时间、炮制时间，均经正交实验优选确定。由于实验内容较多，篇幅所限，正交实验的研究过程没有报道。
       3.2  实验结果表明，不同炮制方法和加入的辅料对马钱素含量有一定影响，其炮制品中马钱素含量相对于生品均有所降低，且以清蒸品含量最低。马钱素含量降低的原因可能是马钱素属于环烯醚萜苷类，在一定条件下易发生水解，炮制加热和加入辅料对其能产生一定影响的缘故。
       3.3  据药理作用研究表明，山茱萸具有免疫调节、抗炎、抗休克、降糖、强心作用，其不同成分具有不同的免疫药理活性［4］。其中熊果酸体外具有一定的促进免疫效应，并有抑菌、安定、降温和抗糖尿病等作用［1］；马钱素在低浓度(0.016ｍｇ/ｍｌ)时有促进淋巴细胞转化作用而高浓度(0.500ｍｇ/ｍｌ)时则有抑制作用,提示马钱素对免疫反应有双向调节作用［5］。本研究以马钱素作为山茱萸不同样品的考察指标，正是以其药理作用为依据的，山茱萸炮制前后马钱素含量的变化，对其药理作用肯定有影响，其具体量效关系有待于进一步研究。
        
       【参考文献】
         　　［1］潘 扬,王天山.植物山茱萸化学成分的研究概况［J］.南京中医药大学学报,1998,14(1):61.
       
       ［2］郭富礼,张振凌. 山茱萸不同炮制品中熊果酸含量的比较［J］. 时珍国医国药,2002,13(7):404.
       
       ［3］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社,2000:22，附录53.
       
       ［4］龚千峰.中药炮制学［M］.北京：中国中医药出版社，2003：302.
       
       ［5］楚 晋.山萸肉化学成分及其药理活性的研究［J］.中国自然医学杂志,1999. 11(1):46.