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       【摘要】 
       目的建立反相高效液相色谱（RP-HPLC）法测定银黄颗粒制剂中绿原酸含量的方法及测定不同厂家银黄颗粒制剂中绿原酸的含量。方法采用RP-HPLC法检测银黄颗粒制剂中绿原酸的含量，色谱条件：Kromasil C18色谱柱，以乙腈－甲醇－0.4%磷酸水溶液（含0.6%三乙胺，5∶15∶80）为流动相，流速1 ml/min，检测波长327 nm，柱温为室温。结果绿原酸在6.23×10-3～100.50×10-3 mg·ml-1范围内与峰面积呈良好的线性关系（r=0.999 8），平均回收率为98.30%，RSD＝2.35%(n=6)。结论所建立的色谱方法可以简便、准确测定银黄颗粒中绿原酸的含量，重现性较好。各厂家生产的银黄颗粒中绿原酸含量差别较大，有必要建立绿原酸的定量控制方法。
       【关键词】  银黄颗粒； 绿原酸； 高效液相色谱
       
       Determination of the Content of Chlorogenic Acid in Yinhuang Granules from Different Pharmaceutical Factories by RP-HPLC
       WANG Caifang,  HUANG Long  CHENG Qian,  DAI Guili,  ZHANG Zhenzhong,  ZHAO Yu
       1. Pharmacy School of Zhengzhou University， Henan Zhengzhou  450052, China；
       2. Pharmacy School of Zhejiang University，Zhejiang Hangzhou 310031, China；
       3. Zhengda Qingchunbao Pharmaceutical Corp., Hangzhou 310023, China
       Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method and determine the content of chlorogenic acid in Yinhuang Granules from different pharmaceutical factories. MethodsRP-HPLC was used to determine the content of chlorogenic acid in Yinhuang granules .The column was Kromasil C18. The mobile phase was nitrile- methanol- water (containing 0.6% triethylamine，5∶15∶80) , the detection wavelength was 327 nm. The column temperature was room temperature. ResultsThere was a good linear relationship between the concentration of chlorogenic acid and absorption area value in range of  6.23×10-3～100.50×10-3 mg·ml-1, r=0. 999 8. The average recovery was 98. 30%, RSD= 2.35%(n= 6). ConclusionThe chromatographic method established  can  be used simply and accurately to determine the content of chlorogenic acid  in Yinhuang granules and it has good repeatability.
       Key words：Yinhuang Granules;  Chlorogenic acid;  HPLC
       
       银黄颗粒是由金银花提取物、黄芩提取物加工制成的复方制剂，具有清热、解毒、消炎的功效，用于治疗急慢性扁桃体炎、急慢性咽喉炎、上呼吸道感染等［1，2］。绿原酸为本制剂主要药效成分之一。本文作者采用HPLC法测定了5个厂家的银黄颗粒制剂中绿原酸的含量。
        Agilent 1100LC色谱系统(美国)。银黄颗粒购自郑州市药店，绿原酸对照品购自中国药品生物制品检定所。试剂：乙腈(色谱纯)、甲醇(色谱纯)、甲醇(分析纯)、超纯水。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件Kromasil C18色谱柱，流速1 ml/min，检测波长：327nm，柱温为室温，流动相为乙腈甲醇0.4%磷酸水溶液（含0.6%三乙胺）（5∶15∶80）。
       2.2  对照品溶液的制备精密称取恒重干燥的绿原酸对照品2.01 mg置10 ml容量瓶中，加甲醇溶解定容，摇匀，即对照品贮备液。
       2.3  标准曲线的制备 
       从对照品贮备液中精密量取0.31，0.62，1.25，2.50，5.00 ml置10ml容量瓶中，用甲醇稀释，超声溶解后，加甲醇至刻度，即得6.23×10-3，12.46×10-3，25.13×10-3，50.25×10-3，100.50×10-3 mg/ml的绿原酸对照品溶液，进样20 μl/次，以峰面积为纵坐标，对照品浓度为横坐标，进行线性回归，得方程为：Y=20 870X-61.188 0，r=0.999 8。结果表明在6.23×10-3～100.50×10-3 mg/ml范围内，绿原酸浓度与峰面积呈良好的线性关系，其色谱图见图1-a。
       2.4 供试品溶液的制备每厂生产的银黄颗粒制剂同批3个包装袋内各取一份，研细，每份精密称取1 g，置100 ml容量瓶中，加90 ml甲醇超声提取30 min，放冷，加甲醇至刻度，摇匀，用0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液即得供试品溶液，每次进样20 μl。
       2.5 样品测定结果 
       分别精密吸取各供试品溶液各20 μl ,按上述色谱条件测定,结果见表1，其色谱图见图1-b。吸取20 μl色谱甲醇溶剂，进样，其作为空白对照，色谱图见图1-c。
       2.6  精密度实验精密吸取上述对照品溶液20 μl ,重复进样5 次,测定峰面积,其相对标准偏差RSD=2.17 % ,表明仪器精密度良好。
       2.7  稳定性实验 取表1中序号14供试品溶液20 μl,从0 h开始每间隔1.5 h按上述色谱条件测定1次，测定6次, 其相对标准偏差RSD＝2.52% ,结果表明7.5 h 内稳定。
       2.8  重现性实验 
       按拟定的含量测定方法,取表1中序号14的样品制备5 份供试液,测定绿原酸的含量,结果5 份含量RSD＝1.18%，重现性良好。表1  5个厂家银黄颗粒中绿原酸含量测定结果（略）
       2.9  回收率实验取表1中序号15所取样品(绿原酸含量7.39％)，精密加入一定量的绿原酸对照品,按供试品制备与测定方法,按上述色谱条件,平行做6 次,平均回收率为98.30%，RSD＝2.35%。
       3  结果
         
       本品为中药复方制剂,成分较为复杂,采用HPLC测定方中金银花中的主要成分绿原酸的含量,结果表明方法简单、灵敏度高、重现性好,所测结果准确,可用于本制剂的质量控制。
        本研究测定了5个厂家的银黄颗粒制剂，研究结果（见表１）表明，各个厂家生产的制剂所含绿原酸的含量相差较大，每个厂家生产的同批不同包装袋内所含绿原酸的含量相差也较大，而各厂家药品服用量却是相同的，这使得在临床应用该制剂时，有可能药效相差较大，故产生的副作用缓急有无也不同。因此，对银黄颗粒制剂中绿原酸含量应有所限定。
       【参考文献】
         　　［1］郑国平.高效液相色谱法测定银黄颗粒中黄芩苷的含量［J］.中国药业，2004,13(8):42.
       
       ［2］邹玉繁,汪小根.银黄颗粒抗炎、抗变态反应实验研究［J］.现代中药研究与实践，2004,18(3):59.