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       【摘要】 
       目的探讨北五味子活性成分的最佳提取工艺。方法以北五味子提取物出率及其五味子甲素、乙素、总木脂素等指标对北五味子乙醇回流提取法、乙醇渗滤提取和超临界流体萃取进行了对比研究。结果3种提取方法对比显示，虽五味子浸膏率无显著变化，但超临界流体萃取方法总木脂素、乙素、甲素的含量均高于传统回流和渗滤提取方法。结论超临界流体萃取应用于北五味子活性成分的提取，具有省时、高效、节能等优点，可作为工业生产提取的理论依据。
       【关键词】  北五味子； 提取工艺； 高效液相色谱法
       
       Study on Extractive Technologies of Active Components from Schisandra chinesnsis (Turcz.) Baill.
       WU Yanling， PIAO Huishan
       Pharmacy of College, Yanbian University Jilin Province, Yanji 133000, China
       Abstract：ObjectiveTo study the best extractive technologies of Schisandra chinesnsis (Turcz.)Baill..MethodsContrast ethanol refluent extract, ethanol seeping extract and supercritical fluid extraction (SFE) of Schisandra chinesnsis (Turcz.) Baill. with the rate of paste and contents of schisandrin A, schisandrin B and total lignans which were the essential active components in Schisandra chinensis Baill. as the test indexes.ResultsIn the three methods, the rates of paste were no significant different. The contents of schisandrin A, schisandrin B and total lignans extracted by SFE were higher than those of the others.Conclusion SFE method applied in extraction from Schisandra chinesnsis (Turcz.)Baill. is quick, simple, and can save energy. It can provide theory foundation for industrial production.
       Key words：Schisandra chinesnsis (Turcz.) Baill.;  Extractive technology;  HPLC
        五味子为木兰科植物五味子(Schisandra chinesnsis (Turcz.)Baill.) 的干燥成熟果实，收载于《中国药典》2000年版，俗称北五味子。北五味子是生长于中国东北，遍布小兴安岭、伊春、桃山、延边等地的一种道地药材，对神经系统、心血管系统、消化系统等具有多种药理作用。现代研究证明，五味子生物活性成分主要是木脂素和挥发油、木脂体等［1］。
        北五味子活性成分的提取研究主要是采用水提、乙醇回流提取和渗漉提取法等［2，3］。这些方法提取时间长、活性成分提取率低。超临界流体萃取技术的研究表明，超临界流体萃取应用于天然产物的提取具有选择性高、操作时间短、有效成分得率高、流程简单、能耗低、过程无有机溶剂残留等优点。本文以五味子超临界流体萃取法的总提取物出率及其五味子甲素、乙素、总木质素为指标，与五味子乙醇回流提取法和乙醇渗漉提取法进行了对比研究。
       1  仪器与试药
        722型光栅分光光度计（上海第三分析仪器厂）；SCL—10AVP型高效液相色谱仪；SPD—10AVP紫外检测器（日本岛津公司）；TG328B型分析天平（上海上平仪器公司）。TC-SFE-50-5-120S型超临界流体仪（沈阳天诚）。
        北五味子药材采收于吉林省汪清县；五味子甲素对照品（批号0764-200107，中国药品生物制品检定所）、五味子乙素对照品（批号110765-200205，中国药品生物制品检定所）；色谱纯甲醇，水为双蒸水，其余均为分析纯试剂。
       2  方法与结果
       2.1  提取液的制备
       2.1.1  乙醇回流提取法取五味子300 g加生药量6倍的95%乙醇，加热回流提取2次，3 h/次，过滤，合并提取液，滤液减压回收乙醇浓缩成浸膏，计算出膏率。结果见表1。
       2.1.2  乙醇渗漉提取法取五味子300 g加95%乙醇浸泡24 h后进行渗漉提取，以10 ml/min的流速，共接收生药量10倍体积的渗漉液，渗漉液减压回收乙醇浓缩成浸膏，计算出膏率，结果见表1。
       2.1.3  超临界流体萃取法［4］取五味子300 g，粉碎后过40目筛，均匀添满提取罐，萃取时间为3 h，萃取压力为21MPa，温度37℃，CO2流量为5 L/min。出膏率结果见表1。
       2.2  五味子总木脂素的测定方法［5］
       2.2.1  标准曲线的制备精密称取五味子乙素对照品7.5 mg，置于1.0 ml量瓶中，加氯仿溶解定容，分别吸取2,4,6,8,10,12,14,16 μl注入20 ml试管中，以6 μl氯仿为空白，挥去氯仿，依次加入10%变色酸水溶液0.5 ml，浓硫酸3.0 ml，蒸馏水1.5 ml，摇匀，在沸水中加热30 min，溶液呈紫红色，取出冷却，在570 nm处测定吸收度，回归方程：A=1.32×10-3C+3.52×10-3； r=0.999 2。五味子乙素在15～120 μg之间有良好的线性关系。
       2.2.2  样品的总木脂素含量测定分别取乙醇回流提取物、乙醇渗漉提取物以及超临界流体萃取物，精密称取1 g，加氯仿20 ml溶解，定量转移至50 ml量瓶中，加氯仿释至刻度。精密吸取0.2 ml，同对照品项下操作。测定吸收度，以五味子乙素的标准曲线计算总木脂素的含量，结果见表1。
       2.3  五味子甲素、乙素HPLC含量测定［6］
       2.3.1  色谱条件及系统适用性实验色谱柱：YMC-Pack ODS柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；柱温：40℃；流动相：甲醇-水（70∶30）；体积流量：0.6 ml/min；检测波长：254 nm。在选定条件下，五味子甲素峰、乙素峰和样品中其他组分色谱峰可达基线分离，且与其他相邻色谱峰分离度大于1.5，分别按五味子甲素和乙素峰计算，理论板数均在5 000以上。色谱图见图1～3。
       2.3.2  对照品溶液的制备精密称取五味子甲素、五味子乙素对照品各10mg，分别置10 ml量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜（φ0.45 μm）过滤，即得。
       2.3.3  供试品溶液的制备精密称取3种不同方法提取的浸膏各1 g，置50ml量瓶中，加甲醇适量，超声处理30 min，加甲醇稀释至刻度，摇匀。微孔滤膜（φ0.45μm）过滤，即得。
       2.3.4  五味子甲素、乙素线性关系的考察精密吸取五味子甲素、乙素对照品溶液（1 mg/ml）2.5，5.0，7.5，10，12.5，15 μl，依次注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积。分别以峰面积积分值为纵坐标，五味子甲素、乙素进样量为横坐标，绘制标准曲线，并计算回归方程，结果显示五味子甲素进样量在2.5～15 μg 范围内，有较好的线性，Y=1.426 95×105X +1.393 13×105，r=0.999 85。五味子乙素进样量在2.5～15 μg 范围内，有较好的线性，Y =5.460 67 ×105X-1.2610 ×104，r=0.999 9。
       2.3.5  精密度实验精密吸取同1份供试品溶液10 μl，重复进样5次，测定五味子甲素峰面积积分值，得RSD=1.05%；测定五味子乙素峰面积积分值，得RSD=1.18%。
       2.3.6  重现性实验对同一样品，制备供试品溶液，平行制备5份，进样，测定五味子甲素峰面积积分值，RSD=1.63%；测定五味子乙素峰面积积分值，RSD=1.49%。
       2.3.7  稳定性实验精密吸取同1份供试品溶液10 μl，于0，2，4，6，8，10，12 h进样，测定五味子甲素、乙素峰面积积分值， RSD分别为1.57%，1.31%（n=7）。结果表明：供试品溶液在12 h内基本稳定。
       2.3.8  加样回收率实验各取已知含量的3种样品中加入五味子甲素、乙素对照品一定量，按供试品预处理方法并测定结果，五味子甲素平均回收率95.5%，RSD为2.10%，五味子乙素平均回收率97%，RSD为1.49%。
       2.3.9  供试品测定取不同提取方法提取的3种样品各精密称定1g，置50 ml量瓶中，加甲醇溶解并定容，吸取5～10 μl，按2.1项下操作进样测定。结果见表1。表1  不同提取工艺测定结果（略）
       3  结果与讨论
       3.1  超临界流体萃取北五味子活性成分最佳工艺条件为：萃取压力21MPa，温度37℃，CO2流量5 L·min-1。
       3.2  超临界流体萃取法与乙醇回流和乙醇渗滤提取法相比，没有有机溶剂残留，大大简化工艺；避免较长时间加热等因素对有效成分造成的损失；且具有提取设备简单、操作容易、有效成分提取率高、含杂质少等特点。该工艺为工业生产建立了理论性基础，具有实际的指导意义。
       3.3  根据实验数据分析，超临界流体萃取浸膏量与乙醇渗滤法和乙醇回流法无明显差异，但是总木脂素含量与五味子乙素、甲素含量明显高于渗滤和回流提取法。
       3.4  参考《中国药典》2005年版五味子及南五味子项下，本实验HPLC的测定波长选定为254 nm。对流动相的系统组成和比例进行了研究比较，采用了甲醇-水，乙腈-水-醋酸等系统，根据分离情况，选择甲醇-水（70∶30）较适宜，分离度达到1.5以上。建立HPLC法可以在同一流动相同一波长下同时测定五味子甲素、乙素。
       【参考文献】
         　　［1］中国医学科学院药物研究所.中草药现代研究（第1卷）［M］.北京:北京医科大学中国协和医科大学联合出版社,1995.
       
       ［2］杨 放,袁 军,付 平.五味子的研究概况［J］.华西药学杂志,2003,18(6):438.
       
       ［3］宋小妹,曹林林,董 彬.南五味子有效成分提取工艺研究［J］.现代中医药,2003,1(5):74.
       
       ［4］周庆华.超临界萃取技术最佳方法的研究［J］.哈尔滨理工大学报,2003,8(3):125．
       
       ［5］河海冰,唐 星,于叶淼.生脉粉针剂中五味子醇甲和总木脂素的含量测定［J］.沈阳药科大学学报, 2005,22(4):282.
       
       ［6］杜英峰,袁志芳,张兰桐,等.RP-HPLC法测定五味子及维肝福泰片中五味子甲素和五味子乙素的含量［J］.中草药, 2004,35(5):519.