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       【关键词】  丹酚酸B 高效液相色谱 含量测定
       A Study on the HPLC Method for Salvianolic Acid B in Radix Salviae Miltiorrhizae
       JIANG Lihua，XU Tiansheng，CHEN Xingxing,LIU Qiang
       College of TCM, Southern Medical University, Guangzhou, Guangdong,510515,China
       Abstract：ObjectiveTo improve the HPLC  method  for Salvianolic acid B in Radix Salviae Miltiorrhizae.MethodsDanshen(Radix Salviae Miltiorrhizae) was extracted for 20 min with ultrasonic wave method instead of 1h with refluxing-heated. ResultsUltrasonic wave method is more simple with the same extraction rate.ConclusionUltrasonic wave method is worth to extending in HPLC method of Salvianolic acid B in Radix Salviae Miltiorrhizae.
       Key words：Salvianolic acid B;  HPLC;  Determination
        
        丹参为唇形科植物丹参Salviae miltiorrhizae Bge.的干燥根及根茎。丹酚酸B(salvianolic acid B)是从丹参中提取分离出来的一种既有咖啡酰缩酚酸结构又有新木质素骨架的水溶性成分,具有抗氧化清除自由基、抗前列腺肿瘤、防治神经退行性疾病、抗肝纤维化等作用,具有较高的开发利用前景［1］。《中国药典》2005版及现在报道中丹酚酸B的HPLC测定方法中,供试品溶液的制备方法采取的是用75％甲醇加热回流1 h提取，以HPLC进行含量测定,该法重现性好,但操作复杂,耗时费能,有必要进行改进研究。
       1  材料与仪器
        药材购于广州广弘中药材有限公司，经南方医科大学中医药学院中药鉴定教研室陈兴兴鉴定为唇形科植物丹参(Salviae Miltiorrhizae Bge.)的干燥根及根茎。甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析纯。
        Agilent 1100高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司，美国惠普HEWLETT PACKARO 8453紫外检测器），BP110S电子天平（德国），上海科导SK1200H超声波提取器（工作频率：59KHZ，功率45 W ）。
       2  方法与结果
       2.1  丹酚酸B供试液的制备 
       2.1.1  回流提取法［2］ 取本品中粉约0.2 g［同时另取本品粉末测定水分（附录Ⅸ H第一法）］，精密称定，置具塞锥形瓶中精密加入75％甲醇50 ml，称定重量，加热回流1 h，取出放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取滤液，即得,编号为1。
       2.1.2  超声提取法取本品中粉约0.2 g［同时另取本品粉末测定水分（附录Ⅸ H第一法）］4份，精密称定，分别置于4个100 ml容量瓶中，加入75％乙醇4 ml超声提取10，20，30，40 min，精密量取1 ml置10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得。编号分别为2，3，4,5。
       2.2   HPLC测定回流提取法和超声提取法丹酚酸B的含量
       2.2.1  色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇乙腈甲酸水(30∶10∶1∶59) 为流动相；检测波长为286 nm 。理论板数按丹酚酸B峰计算应不低于2 000。按上述色谱条件，取丹酚酸B对照品与样品分别进样，结果见图1，丹酚酸B与杂质峰达到了较好的基线分离。
       2.2.2  对照品溶液的制备精密称取在60℃减压干燥4 h丹酚酸B对照品1.4 mg，加甲醇制成10 ml的溶液［2］，制成溶液浓度为0.14 mg/ml。
       2.2.3  标准曲线的制作取丹酚酸B对照品溶液2，4，8，10，12，14 μl分别进样，测定峰面积，以峰面积Y对进样量X进行线性回归，得回归方程：Y＝160.93X-6.976，r＝0.999 9。结果表明丹酚酸B在0.28～1.12 μg与峰面积线性关系良好。
       2.2.4  精密度实验取样品溶液5 μl，重复进样6次，结果丹酚酸B峰面积RSD为0.28％。
       2.2.5  重现性实验取“2.1 丹酚酸B供试液的制备”的5份供试液，进样测定，结果丹酚酸B峰面积RSD为1.26％。
       2.2.6  稳定性考察取样品溶液5 μl，分别在制备后0，2，4，8，12，24 h测定，结果丹酚酸B峰面积RSD为1.82％，表明24h内溶液稳定。
       2.2.7  回收率实验平行在5份样品溶液中加入丹酚酸B对照品溶液1.7 ml，依法操作，测定，结果平均回收率为95.5％，RSD为1.14％。
       2.2.8  样品测定分别吸取以上1，2，3，4，5号各10 μl注入高效液相色谱仪，按上述色谱条件测定。结果见表1。表1  5种供试品溶液的测定结果（略）
        结果说明, 超声提取10，20，30，40 min同2005版《中国药典》中加热回流1 h丹酚酸B的提取效果基本相同,提示在实际操作中，可以用超声提取20 min代替加热回流1 h的提取方法。
       3  讨论
        利用超声波产生的空化现象可细化各种物质以及制造乳浊液，加速植物中的有效成分进入溶剂，使其进一步提取，以增加有效成分的提出率。超声能会转变为热能，可以使药物组织内部的温度瞬时升高，加速有效成分的溶解。同时，超声波可以利用辐射压强和超声压强引起的机械作用，使生物分子解聚。使细胞壁上的有效成分溶解于溶剂之中。超声波产生的空化现象会产生大量的显微气泡，利用这些气泡的“定向扩散”形成共振腔，破坏了细胞膜和生物大分子，加速有效成分的扩散。超声波能破坏植物药材的细胞，使溶媒能渗透到药材细胞中，从而加速药材中的有效成分溶解于溶媒中，以提高有效成分的提出率。超声波提取不会改变有效成分的结构，并且缩短了提取时间，提高了提出率，从而为中草药成分的提取提供了一种快速、高产的新方法。
        与《中国药典》方法比较本方法一方面继承了原方法的优点，另一方面改进了原方法的一些缺陷，在保证丹酚酸B提取率的前提下，缩短了提取时间，含量测定结果与《中国药典》无显著差异。因此能更好地适用于常规检验工作和厂方大批量生产时的质量控制。
        
       【参考文献】
         　　［1］吴 浩,胡 春,王金辉.丹酚酸类化合物合成研究进展［J］.沈阳药科大学学报，2006，23（1）：60.
       
       ［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2005：211.