文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【关键词】  ,佛甲草；,,实验性肝损伤；,,保护作用；,,脂质过氧化
       摘要：目的:观察佛甲草对小鼠实验性肝损伤的保护作用。方法:分别采用四氯化碳（CCl4）、α萘异硫氰酸酯（ANIT）一次性灌胃中毒致小鼠急性肝损伤及黄疸模型，测定血清谷丙转氨酶（ALT）、总胆红素（TBiL）含量及血清、肝组织中丙二醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）水平和观察肝组织病理变化，分析佛甲草对上述指标的影响。结果:佛甲草能明显降低CCl4中毒性小鼠血清ALT、血清及肝组织中MDA含量（P<0.01）,使SOD，NO水平显著增高（P<0.01，P<0.001）; 能明显降低ANIT中毒性小鼠血清TBil含量(P<0.001); 肝脏病理组织学检查表明佛甲草能明显减轻肝细胞的变性和坏死。结论: 佛甲草对CCl4和ANIT所致的急性肝损伤有保护作用, 其机理可能与抗脂质过氧化及改善肝脏微循环, 恢复肝脏功能的作用有关。
       关键词：  佛甲草；  实验性肝损伤；  保护作用；  脂质过氧化
       Protective Effects  of  Sedum  Lineare  Thunb  on Experimental Acute   Hepatic  Injury in  Mice
       ZHOU  Qing， LIU Jianxin， ZHOU Li, XIONG Xiaoqin, ZHAO  Haiyan
       （Gannan Medical College,Ganzhou 341000, China）
       Abstract：Objective:To observe the protective effects of solution  isolated from sedum lineare  thunb on  experimental   acute  hepatic liver  injury in  mice. Methods:To observe the contents of total bilirubin and alanine aminotransferase (ALT)in serum ,the  contents of malondialdehyde(MDA) , activity of superoxide dismutase (SOD) , level of nitrogen monoxide in serum and  liver tissue ,hepato-pathohistologic  changes  by CCl4,αnaphthalin fluorescein isothiocyanate(ANIT) inducing  acute liver  injury and icterus  respectively in  mice  by  po, the effects of sedum  lineare  thunb on  the biochemical  changes  were analysed. Results:The results showed the extract of sedum lineare thunb could significantly decrease the contents of ALT in serum  and  the contents of  MDA in serum and liver tissue respectively  in CCl4 toxicomice（P<0.01）, increase  the activity of  SOD and  the level of NO  in serum and liver tissue respectively（P<0.01，P<0.001）;the extract could markedly reduce the contents of TBil in serum in ANIT toxicomice(P<0.001). The result of hepatopathohistologic examination  showed   the extract effectively decreased degeneration and necrosis of liver cells. Conclusion:The  extract of sedum lineare thunb has the protective effects on acute liver injury in mice induced by  CCl4   and ANIT.The  mechanism is likely related to its ameliorating microcirculation and  anti-lipid  peroxidation.
       Key words：Sedum  lineare  thunb;  Experimental hepatic injury;  Protective effect;  Lipid  peroxidation
   
　　佛甲草（sedum  lineare Thunb）为景天科植物佛甲草的全草，性味甘寒，具有清热、解毒、消肿等功效，民间用于治疗黄疸、迁延性肝炎、咽喉肿痛、痢疾等症［1］。有关佛甲草对小鼠实验性肝损伤的保护作用目前尚未见报道，故而进行了初步研究并探讨其机理。
       　　1  材料与方法
       1.1  材料
       1.1.1  佛甲草提取液的制备  佛甲草采自赣州,夏天采集，晒干后粉碎成粗粉，取适量蒸馏水加热提取2次,30  min/次,过滤,合并2次滤液并浓缩至适量,加入相当浓缩液3倍量的95%乙醇,放置冰箱48 h后减压过滤,滤液回收乙醇至无醇味,用蒸馏水调整至含4 g/ml的生药液。
       1.1.2  试剂  四氯化碳,分析纯，上海长江化工厂； α萘异硫氰酸酯；化学纯；北京通县育才精细化工厂；谷丙转氨酶试剂盒,卫生部上海生物制品研究所；总胆红素试剂盒，四川迈克科技有限公司；丙二醛、超氧化物歧化酶、一氧化氮试剂盒，南京建成生物工程研究所提供。
       1.1.3  动物  昆明种小鼠，体重(20±2)g，雌雄兼用，赣南医学院实验动物中心提供。
       1.1.4  仪器   400型全自动生化仪，日本奥林巴斯公司；721型分光光度计,上海精密科学仪器有限公司。
       1.2  实验方法
       1.2.1  急性毒性实验健康昆明种小鼠50只，均衡随机分为5组，每组10只。按急性毒性实验方法［2］设计药物剂量的组间距为1∶0.9。一次性ip0.2 ml/10g佛甲草提取液后,观察小鼠运动、呼吸、皮毛反应、进食等情况并记录3 d内死亡数。
       1.2.2  CCl4造模与检测48只昆明种小鼠，每组12只，随机分成4组，分别为对照组，CCl4模型组，治疗Ⅰ组，治疗Ⅱ组。对照组和模型组分别灌胃生理盐水10 ml/kg；治疗Ⅰ组小鼠灌胃佛甲草提取液4 g/kg；治疗Ⅱ组灌胃佛甲草提取液5 g/kg。1次/d，连续15 d。末次给药后2 h，正常组腹腔注射等容量花生油，其余各组均腹腔注射0.1%CCl4花生油溶液10 ml/kg一次。禁食，自由饮水。16 h后各组小鼠断头取血。以12 000 r/min离心5min，取血清，采用400型全自动生化分析仪测定ALT活性；采用分光光度法测定MDA，SOD，NO稳定终产物硝酸盐/亚硝酸盐水平（NO3/NO2）。MDA 含量测定采用硫代巴比妥酸法，SOD活力测定采用黄嘌呤氧化酶法， NO测定采用硝酸还原酶法。取适量肝组织用冰冷生理盐水冲洗，置冰浴中匀化制得10%肝匀浆，以3 500 r/min离心10min，取上清液测定MDA，SOD，NO3/NO2水平，蛋白定量采用考马斯亮兰法,以牛血清白蛋白为标准。具体步骤均按各试剂盒说明书操作。另取各鼠相同部位的肝脏用10%福尔马林溶液固定，采用常规石蜡切片，HE染色，光镜下观察肝细胞变性坏死程度。分级标准：在1个肝小叶中，（+）表示只有几个细胞发生相应的病理改变，分布散在；（++）表示50%左右细胞发生相应的病理改变，分布较广；（+++）表示绝大多数细胞发生相应的病理改变，分布弥散；（）表示未发生相应的病理改变。
       1.2.3  ANIT造模与检测昆明种小鼠60只，每组15只，分组及用药处理同前。除正常组外，其余各组分别于第13天给药后2 h 灌胃ANIT花生油溶液60 mg/kg一次。所有小鼠在ANIT中毒前和处死前分别禁食18 h，自由饮水。ANIT中毒48h后断头取血。离心，取血清，采用400型全自动生化分析仪测定TBil含量，具体步骤按试剂盒说明书操作。
       1.2.4  统计方法 数据以 ±s表示，采用双侧t检验进行统计处理。
       　　2  结果
       2.1  佛甲草提取液对小鼠的急性毒性实验 结果见表1。由表1可见，最高剂量组（25.74 g/kg）小鼠ip给药后不久即活动增加、兴奋燥动、呼吸急促、惊厥，最后相继全部死亡；最低剂量组（16.89 g/kg）小鼠活动、呼吸、进食等均正常，全部存活。
       2.2  佛甲草提取液对CCl4肝损伤小鼠肝脏组织学的影响表2可知，与正常组相比，模型组出现以肝细胞弥漫性变性、坏死、炎症细胞浸润为特点的急性肝损伤表现；与模型组相比，治疗Ⅰ、Ⅱ组病变明显减轻。提示佛甲草提取液对CCl4中毒所致小鼠肝细胞损伤有明显保护作用。
       2.3  佛甲草提取液对CCl4，ANIT中毒小鼠血清ALT，TBil 含量的影响表3可见，与正常组比较，模型组小鼠血清ALT，TBil含量显著增高（P<0.001）；治疗Ⅰ，Ⅱ组小鼠血清ALT，TBil含量均明显低于模型组（P<0.01，P<0.0５）。提示佛甲草提取液能明显降低CCl4，ANIT中毒小鼠血清ALT，TBil含量。
       表1  佛甲草提取液对小鼠急性毒性的影响（略）
       用寇氏法计数算出LD50为21.5±0.001 75 g/kg
       表2  佛甲草提取液对CCl4肝损伤小鼠肝脏组织学的影响（略）
       表3  佛甲草提取液对CCl4、ANIT中毒小鼠血清ALTTBil 含量的影响（略）
       与正常组比较，a P<0.01；与模型组比较， b P<0.001，c P<0.01，d P<0.05
       表4  佛甲草提取液对CCl4中毒小鼠血清、肝组织MDA、SOD、NO3/NO2水平的影响（略）
       与正常组比较，a P<0.01；与模型组比较，b P<0.001，cP<0.01，dP<0.05；n=12  
　　
　　2.4  佛甲草提取液对CCl4中毒小鼠血清、肝组织MDA，SOD，NO3/NO2水平的影响结果见表4。与正常组比较，模型组小鼠血清、肝组织MDA含量显著升高，SOD，NO3/NO2水平显著降低（P<0.001，P<0.01）；治疗Ⅰ、Ⅱ组小鼠血清、肝组织MDA含量均明显低于模型组（P<0.01，P<0.05），SOD，NO3/NO2水平明显高于模型组（P<0.001，P<0.01，P<0.05）。提示佛甲草提取液对CCl4中毒小鼠血清、肝组织MDA含量具有显著的抑制作用，对SOD，NO3/NO2水平具有显著的提高作用。
       　　3  讨论
       肝脏是外源性过氧化物在体内转化与排泄的主要场所，肝内经氧化还原后产生多种自由基，后者可引起组织过氧化损伤。近年来，对有毒基团在肝损伤中的作用十分重视，据文献报道，有毒氧基在肝细胞损伤过程中发挥着重要作用［3］。氧自由基主要通过脂质过氧化损伤肝细胞。CCl4是一种常用的肝毒剂，用CCl4诱导小鼠肝损伤，其致毒机理［4］是CCl4经肝微粒体细胞色素P450代谢生成自由基（・CCl3），攻击肝细胞膜上磷脂分子引起脂质过氧化，或与肝微粒体脂质和蛋白质发生共价结合，破坏肝细胞膜结构和功能的完整，蛋白合成障碍，甘油三脂蓄积，胞浆中可溶性酶如ALT溶入血中使ALT升高，造成肝细胞严重空泡变性、嗜酸性变、坏死和炎症细胞浸润。血清、肝脏脂质过氧化的程度可通过测定脂质过氧化物等来评价。MDA是不饱和脂肪酸过氧化作用的终产物，可严重破坏细胞膜结构，导致细胞肿胀、坏死，它在血清及组织中的含量，间接反映了自由基反应时组织的破坏程度。SOD是动物机体内的抗氧化酶，其作用是清除自由基，防止自由基对细胞结构的损伤。体内SOD活性愈高，自由基清除速度愈快［5］。
       NO对肝脏既参与各种生理过程，又参与许多病理过程。NO在不同原因所致的肝损伤中所起的作用是不同的。在CCl4诱导小鼠急性肝损伤中，CCl4抑制NO的产生可明显地增加肝内的脂质过氧化并加重肝损伤。而NO对急性肝损伤则可改善微循环，维持肝脏血液灌注，防止血栓形成，灭活氧自由基，可防止肝细胞凋亡［6，7］，从而减轻肝脏损伤，起到保护作用。
       ANIT是一种造成胆汁瘀积的毒物。据文献报道，ANIT于小鼠中毒后48~72 h肝损伤明显，肝细胞变性坏死，小叶间胆管增生，胆管上皮细胞肿胀，部分坏死的上皮细胞脱落后阻塞胆管，导致血清AST，ALT ，TBil显著升高，故可作为退黄药物研究的模型［8］。
       在本研究中，佛甲草提取液能有效地降低CCl4、ANIT所致急性肝损伤小鼠血清ALT，TBil含量，明显减轻肝脏病理变化，说明受损的肝细胞得以恢复。表明佛甲草提取液能使肝细胞得以保护和修复，使间质细胞的解毒和清除功能加强，具有显著的抗肝损伤作用；佛甲草提取液能显著降低CCl4所致急性肝损伤小鼠血清、肝组织MDA含量，提高SOD活性和NO3/NO2水平，表明佛甲草对小鼠四氯化碳肝损伤的保护作用机制与其具有较强的清除体内增多的脂质过氧化物，促进体内抗氧化系统的功能有关。
       总之，佛甲草提取液对实验性肝损伤具有明显的降酶退黄保肝作用，可为临床使用佛甲草治疗肝病提供理论依据。
       　　参考文献：
       ［1］  江苏新医学院. 中药大辞典,上册［M］.上海：上海科学技术出版社，1990：11421142.
       ［2］  李仪奎. 中药药理实验方法学［M］.上海：上海科学技术出社，1990：529529.
       ［3］  严奉祥，朱炳阳，郑  兴，等.金粉蕨素对小鼠实验性肝损伤脂质过氧化的保护作用［J］.南华大学学报，2002，30(1)：44.
       ［4］  刘春宇，顾振纶，韩  蓉，等.沙苑子提取物对小鼠四氯化碳肝损伤的保护作用［J］.中草药，2002，33(12)：11041104.
       ［5］  李  锋，李宣海，谢良民.维生素E和硒对CC1、大鼠急性肝损伤和抗氧化功能的影响［J］.胃肠病学， 2002，7（6）：338338.
       ［6］  Marcelo NM, et al . Nitric oxide V Therapeutic potential of nitric oxide donors and  inhibitors［J］. Am J Physiol，1999，276(39)：G13113.
       ［7］  Jianrong L, et al . Nitric oxide Ⅳ Determinants of nitric oxide protection and toxicity  in liver［J］.Am J Physiol，1999， 276(39)：G106.
       ［8］  黄正明，杨新波，曹文斌.化学性及免疫性肝损伤模型的方法学研究［J］. 解放军药学学报， 2005，21(1)：4343.
       基金项目：赣南医学院资助项目（No.200007）
       (赣南医学院 ，江西  赣州  341000 )