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       【摘要】 
       目的建立以高效液相色谱法同时测定复方坎地沙坦酯片剂中坎地沙坦酯和氢氯噻嗪含量的方法。方法色谱柱为Nucleosil C18柱，流动相为乙腈∶水（40∶60）磷酸调pH至4.0，流速1.0 ml/min，测定波长210 nm，柱温为室温。结果坎地沙坦酯、氢氯噻嗪浓度分别在1～16，1.25～20 μg/ml范围内线性关系良好（r=0.999 9），平均回收率分别为100.02%，100.12%。结论 该法测定简便、快速、重现性好、回收率高，且可同时测定复方坎地沙坦酯片中两组分的含量，并可用于其质量控制。
       【关键词】  复方坎地沙坦酯片 高效液相色谱法 坎地沙坦酯 氢氯噻嗪 含量
       Determination of Two Components in Compound Candesartan Cilexetil Tablets by High Performance Liquid Chromatography
       HAN Jun
       Department of Pharmacy,Xiangfan No.1 People"s Hospital,Xiangfan,441000,China
       Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the simultaneous assaying of candeasrtan cilexetil and hydrochlorothiazide in compound candesartan cilexetil tablets.MethodsThe chromatographic column was Nucleosil C18with room temperature.The mobile phase was composed of acetonitrile-water(40∶60,pH was adjusted to 4.0 with phosphoric acid)with detection wavelength at 210 nm and flow rate was 1 ml/min.ResultsGood linear relationship was achieved when the concentration ranges of candesartan cilexetil and hydrochlorothiazide were withim 1～16,1.25～20 μg/ml,respectively,the recovery rates were 100.02% and 100.12% respectively.ConclusionThe method is convenient,fast,reproducible and with high recovery rates,which can be used to determine the two constituents simultaneously of compound candesartan cilexetil tablet and control its quality.
       Key words：Compound candesartan cilexetil tablet;  HPLC;  Candesartan;  Content
        坎地沙坦酯(Candesartan Cilexetil)为二苯四咪唑类血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂,能够有效地降低轻、中度高血压患者的血压,致咳等不良反应发生率低［1，2］；氢氯噻嗪(Hydrochlorothiazide)是常用的中效利尿类降压药，其通过作用于髓袢升枝皮质部和远曲小管，抑制这些部位对氯离子，钠离子的重吸收产生利尿作用。本文研究的复方制剂组分坎地沙坦酯与氢氯噻嗪可产生协同作用并减少单用氢氯噻嗪时引发的低血钾症［3］，从而提高高血压治疗的顺从性。血管紧张素转换酶抑制剂(ACEI)与氢氯噻嗪类利尿药合用已广泛应用于高血压病、充血性心力衰竭以及与高血压相关的各种并发症和合并症的治疗。　
       
       1  仪器与试药
       1.1  仪器
       Agilent 1100 Series（ISoCratic Pump）高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；Sepu 2000色谱工作站（杭州普惠科学仪器有限公司）；Nucleosil C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；AE200-S电子天平(瑞士METTLER公司)。
       1.2  试剂与药品
       乙腈（色谱纯，天津科密欧化学试剂开发中心）；磷酸二氢钾（分析纯，天津市化学试剂厂）；复方坎地沙坦酯片（武汉赛科医药生物有限公司研制，批号20050606，20050608，20050610）；坎地沙坦酯对照品（江苏苏中药业股份有限公司提供，纯度>99.8%）；氢氯噻嗪（苏州立新医药原料有限公司，纯度>99.6%）。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件的选择［4］
       色谱柱为Nucleosil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）,流动相为乙腈∶水 (40∶60，v/v)磷酸调pH 4.0,流速1.0 ml/min，测定波长210 nm,柱温为室温。
       2.2  辅料干扰性实验
       按处方比例配制不含两种主药成分的空白溶液，并分别取坎地沙坦酯和氢氯噻嗪原料药及辅料各适量按处方比例配成样品溶液,各取溶液20 μl注入色谱仪分析记录高效液相色谱图，色谱图见图1～2。结果表明辅料对两组分测定无干扰并且两组分分离度符合要求。
       2.3  标准曲线　
       精密称取坎地沙坦酯对照品约10 mg,氢氯噻嗪对照品约12.5 mg置100 ml容量瓶中,加流动相适量,超声15 min使溶解,稀释至刻度,得100μg/ml的坎地沙坦酯和125μg/ml的氢氯噻嗪混合对照品溶液,精密量取10 ml置50 ml量瓶中,定容,精密量取0.5，1，2，4，8 ml置10 ml量瓶中,加流动相稀释至刻度,取20 ml注入色谱仪中，分别以两组分的药物峰面积（A）对浓度（C）进行线性回归，得回归方程分别为Acand=12 300Ccand-5 658.9(r=0.999 9)，AHCT=42 075CHCT+104.05 (r=0.999 9)，线性范围分别为1～16，1.25～20 μg/ml。
       2.4  回收率实验分别称取一定量的坎地沙坦酯与氢氯噻嗪对照品，模拟处方比例加入其它辅料，制成供试品溶液。准确量取该供试品溶液10 ml，置于100 ml容量瓶中，加入流动相定容至刻度。用微孔滤膜过滤,取续滤液20 ml溶液注入色谱仪分析。记录峰面积，代入回归方程，计算回收率。结果见表1。表1  回收率实验结果（略）
       2.5  精密度实验 精密称定坎地沙坦酯与氢氯噻嗪对照品适量,按“2.4”项下方法制备分别约含坎地沙坦酯与氢氯噻嗪浓度为6.00与7.50 μg/ml，8.00与10.00 μg/ml，10.00与12.50 μg/ml的低中高3种不同浓度的坎地沙坦酯氢氯噻嗪混合溶液样品，取20 ml溶液注入色谱仪分析。低中高3种不同浓度的坎地沙坦酯样品精密度RSD分别为1.89%，1.57%，1.23%（n=5）；低中高3种不同浓度的氢氯噻嗪样品精密度RSD分别为1.67%，1.43%，0.98%（n=5）。
       2.6  溶液中稳定性实验精密称取坎地沙坦酯与氢氯噻嗪对照品适量，按“2.4”项下方法制备分别含坎地沙坦酯与氢氯噻嗪浓度为8.04与10.12μg/ml的混合溶液，于室温下放置6 h，每隔1 h取20 ml溶液注入色谱仪分析。结果RSD=0.57%。表明此供试品在溶液中6 h内稳定，完全可以满足样品含量测定的要求。
       2.7  样品含量测定取本品10片,研细,精密称取细粉适量(相当于坎地沙坦酯约8 mg，氢氯噻嗪12.5 mg), 置100 ml容量瓶中,加流动相适量,超声15 min使溶解,定容至刻度, 摇匀,过滤,精密量取10 ml置100 ml容量瓶中加流动相稀释至刻度,取20 ml注入色谱仪中，另取坎地沙坦酯与氢氯噻嗪对照品同法测定,按外标法以峰面积计算两组分平均标示量。结果见表2。表2  样品含量测定结果（略０
       3  讨论
        考虑到本制剂复方坎地沙坦酯片中含药量较少，采用紫外分光光度法不能准确定量测定,故选择高效液相色谱法，流动相的选择通过比较甲醇水系统与乙腈水系统， 考虑到选用乙腈水系统时氢氯噻嗪峰形较好，并调整pH至4.0时坎地沙坦酯出峰时间较适宜，且该色谱条件下测定时辅料对主药测定无干扰，两组分分离度好，专属性强且操作方法简便。坎地沙坦酯在紫外低波长段208 nm处具有较强的吸收峰，而氢氯噻嗪在228 nm与272 nm处具有最大紫外吸收，由于坎地沙坦酯在272 nm处没有紫外吸收并考虑提高坎地沙坦酯的响应值，本文选择检测波长为210 nm。
        本实验结果表明，采用高效液相色谱法同时测定复方坎地沙坦酯片中坎地沙坦酯与氢氯噻嗪的含量，方法简便、快速、线性关系良好、重现性好、回收率高，能够准确控制复方坎地沙坦酯片中两组分的含量。
        
       【参考文献】
         　　［1］李 琼，左明新，傅得兴. 坎地沙坦的药理与临床［J］.药物不良反应杂志，2000，3(3):202.
       
       ［2］黄建耿，李 高，斯陆勤，等.高效液相色谱法测定人血浆中坎地沙坦的含量［J］.中国药师,2005.8(4):293.
       
       ［3］郭得志，苏文举，郑开作.氢氯噻嗪治疗轻中度高血压
       的疗效和安全评价［J］.医学理论与实践,2001，14(4):296.
       
       ［4］张永东，魏秀华，王安发，等.HPLC法测定坎地沙坦酯及其有关物质［J］.中南药学,2004，2(2):80.