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       【摘要】 
       目的应用高效液相色谱法测定栽培射干中次野鸢尾黄素的含量，考察其药材的内在质量。方法采用高效液相色谱法，色谱柱为TSK ge1 ODS 80 TS250 mm×4.6 mm；流动相为甲醇磷酸水溶液（pH=3）∶53%∶47%；流速为1 ml/min；检测波长为266 nm；柱温35℃。结果次野鸢尾黄素在0.0118～0.118 μg范围内与色谱峰面积呈线性关系（r=0.999 9）；平均加样回收率为99.84%，RSD为2.059%，次野鸢尾黄素的含量为0.1252%。结论该法简便、准确、灵敏度高，栽培射干中的次野鸢尾黄素的含量大于0.10%，符合《中国药典》要求。
       【关键词】  高效液相色谱法 射干 次野鸢尾黄素
       
       Determination of Irisflorerntin in Cultivated Belamcanda chinensis(L.)DC by HPLC
       CHEN Yinhua,MENG Junhua,HOU Junjie,LIU Hegang
       1.Hubei College of TCM,Wuhan 430065,China
       2.Third Hospital of Wuhan,430061,China
       Abstract：ObjectiveTo determine irisflorentin in cultivated Belamcanda chinensis(L.)DC by HPLC,and to inspect the quality of its ingredients.MethodsUsing HPLC with TSK ge1 ODS Column80(250 mm×4.6 mm),the mobile phase was composed of a mixture of methanol-phosphoric aicd aqueous soluton (pH=3)∶53%∶47%,the flow rate was 1 ml/min,the UV detection wavelength was set at 265 nm,and the temperature was at 35℃.ResultsIrisflorentin showed linear relationship with peak areas in the range of 0.0118～0.118 μg(r=0.999 9).The average recovery was 99.84%,RSD was 2.509%.ConclusionThe method is simple,rapid and accurate.The quantity of irisflorentin in Cultivated Belamcanda Chinensis(L.)DC exceeds 0.10% and meets the Chinese Pharmacopoeia.
       Key words：HPLC;  Belamcanda chinensis(L.)DC ;  Irisflorentin
        射干是鸢尾科射干属植物射干的干燥根茎，为常用中药，始载于《神农本草经》，列为下品。味苦、性寒，入肝、肺经。具有清热解毒，利咽祛痰的功效，主要用于咽喉疼痛，肺痈，痰咳气喘等症，为治疗喉痹咽痛之要药［1］。射干中异黄酮类成分具有抗炎、抗病毒、抑菌和消除自由基作用。次野鸢尾黄素为射干中有效成分之一。随着射干野生资源的日益减少，为保护资源，近年来对射干的生物学、引种和栽培已有越来越多的研究。本文采用HPLC法测定了栽培射干中次野鸢尾黄素的含量。根据测量结果，对其进行质量评价。
       1  器材和试药
        戴安P680高效液相色谱仪，UVD170U检测器，四元梯度泵，HKZJZ-830171BAF；戴安变色龙高效液相数据处理系统；色谱柱：TSK ge1 ODS 80TS（250 mm×4.6 mm）；预处理柱：Allechc18（美国）；AP-9908S滤过器（Automatic Science Lastrument Co.Ltd）;BP-211D型十万分之一分析天平 （西德Sartorius）；甲醇、磷酸：分析纯；重蒸馏水。
        对照品：次野鸢尾黄素（批号：1557-200101 20 mg/支）购自中国药品生物制品检定所。
        药材来源：20051112采自团凤县射干GAP种植基地的栽培射干，经本院刘合刚教授鉴定，原植物为鸢尾科植物射干Belamcanda chinensis(L.)DC。
       2  方法与结果
       2.1  色谱分离条件流动相：甲醇磷酸水溶液（pH=3）：53%∶47%；流速：1 ml/min；柱温35℃。检测波长：266 nm；进样量：5 μl［2］。
       2.2  对照品溶液的制备精密称取次野鸢尾黄素对照品1.47 mg，置25 ml容量瓶中，加入适量甲醇充分溶解后，定容至刻度，得对照品溶液浓度为58.8 μg/ml，精密吸取以上对照品溶液1～5 ml容量瓶中，加甲醇定容至刻度，配成11.76 μg/ml的溶液，作为对照品溶液。
       2.3  供试品溶液的制备药材经干燥后粉碎，过四号筛，取样品约0.1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量，加热回流1 h，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液［3］。
       2.4  方法学考察
       2.4.1  标准曲线及线性范围分别精密吸取上述对照品溶液1，2，4，6，8，10 μl进样，按以上色谱分离条件，进行HPLC测定。以对照品进样量与峰面积作图，呈线性关系，见图1。回归方程为Y=0.829 3X-0.060 4，r=0.999 9。线性范围在0.011 8～0.118 μg之间。
       2.4.2  精密度实验精密吸取对照品溶液5 μl重复进样5次，分别记录峰面积，计算RSD为1.3%，表明仪器精密度良好。结果见表1。表1  精密度实验（略）
       2.4.3  稳定性实验按供试品样品溶液的制备方法制备栽培射干1的溶液，分别在0，2，4，6，8 h各进样5 μl。结果见表2。计算RSD为1.4%，表明样品溶液至少在8 h内稳定。表2  稳定性实验（略）
       2.4.4  重现性实验精密称取同一批的射干粉末5份，按供试品样品溶液的制备方法制备样品溶液，进样5 μl，测定次野鸢尾黄素的含量。结果见表3。计算RSD为1.1%，表明本方法重现性良好。表3  重现性实验（略）
       2.4.5  加样回收率实验精密称取5份已知含量的射干样品粉末各0.1 g，分别加入次野鸢尾黄素对照品溶液2 ml（浓度为58.8 μg/ml），按样品的制备方法制备供试品样品溶液，测定次野鸢尾黄素的含量，计算回收率，平均回收率为99.84%，RSD为2.509%，证明该方法稳定可靠。结果见表4。表4  加样回收率实验（略）
       2.5  样品的含量测定按上述供试品样品溶液的制备方法和色谱分离条件，进样5 μl，测得团凤GAP种植基地的3批不同批号的栽培射干中的次野鸢尾黄素的含量。结果见表5及图2～3。表5  药材中次野鸢尾黄素的含量（略）
       3  讨论
        本实验说明用HPLC法测得射干中次野鸢尾黄素的含量，重现性好、回收率高、稳定可靠，此法可用于测定射干中次野鸢尾黄素的含量。根据测定结果，栽培射干中的次野鸢尾黄素含量＞0.10%，符合《中国药典》规定。
       【参考文献】
         　　［1］钟 鸣.中药射干现代研究进展［J］.中药材，2001，24（12）：904.
       
       ［2］万月生，孙国祥.RP-HPLC测定射干抗病毒注射液中次鸢尾黄素含量［J］.中南药学，2004，2（3）：133.
       
       ［3］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：200.