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       【摘要】 
       目的建立童康片中黄芪甲苷的含量测定方法。方法采用HPLCELSD法测定童康片中黄芪甲苷的含量；色谱柱为Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相∶水乙腈（34∶66），流速：0.8 ml·min-1，ELSD 参数：漂移管温度：95℃,N2 流速：2.4 mol·min-1。结果平均加样回收率为100.6%，RSD为2.06%，回归方程：Y = 1.626 6X + 4.060 3，相关系数：r=0.999 1。结论 经过系统的方法学考察，所建立的测定方法具有操作简便、稳定、专属、可重复的特点，可用于童康片的质量控制。
       【关键词】  童康片 黄芪甲苷 高效液相-蒸发光散射检测
       Determination of Astragaloside Ⅳ in Tongkang Tablets by HPLCELSD
       LIN Chaozhan, YANG Jinyan, BAI Ningning, ZHU Chenchen
       School of Pharmacy, Guangzhou University of TCM, Guangzhou  510006， China
       Abstract：ObjectiveTo establish the determination of astragaloside Ⅳ in Tongkang Tablets. MethodsHPLCELSD method was developed for the determination of astragaloside Ⅳ in Tongkang Tablets by using  Kromasil C18 (250 mm ×4. 6 mm, 5μm) column, a mixture of acetonitrileH2O (34∶66) as mobile phase at the flow rate of 0.80 ml·min-1.The parameters of drift tube and gas flow rate of the detector were set at 95℃and 2.4 L·min-1,respectively.ResultsThe average recovery was 100. 6% and the linear equation was Y= 1.626 6X+ 4.060 3. The correlation coefficient was 0.999 1.ConclusionThe method is simple, stable, accurate and repeatable, and can be applied to quality control of Tongkang Tablets.
       Key words：Tongkang Tablets；  Astragaloside Ⅳ；  HPLCELSD
        童康片由黄芪、白术、山药、牡蛎、防风、陈皮等药味组成，具有补肺固表、健脾益胃、提高机体免疫力的功效。主要用于体虚多汗、易患感冒、倦怠乏力、食欲不振等证。中国药品标准上尚未有关于童康片的质量控制方法。童康片中黄芪为君药，因此建立针对黄芪的含量测定方法，可有效控制童康片的质量。本文采用HPLCELSD方法对童康片中的黄芪甲苷进行了含量测定的方法学研究，为童康片的质量控制提供了准确、有效的方法。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器 
       Waters高效液相色谱仪，配置600E四元梯度泵，7725i手动进样系统，996 二极管阵列检测器，氦气在线脱气，柱温箱及色谱工作站；Alltech ELSD 2000蒸发光散射检测器；Sartorius 电子分析天平（Sartorius Co. Ltd. Germany）；艾科普纯净水发生器。
       1.2  试剂 
       乙腈为色谱纯，水为超纯水，其余试剂均为分析纯。
       1.3  药品 
       童康片（市售），黄芪甲苷由中国药品生物制品检定所提供（含量测定用，批号0781200109）。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件 
       色谱柱为Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈水（34∶66）；流速为0.8 ml·min-1。
        ELSD参数：气体流速2.4 L·min-1；漂移管温度95℃。
       2.2  标准曲线的制备及线性范围考察 
       精密称取黄芪甲苷对照品1.2 mg，置2 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制得0.60 mg·ml-1的黄芪甲苷标准储备液。精密吸取上述标准品溶液6，8，10，12，16，18 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积（见图1）。以峰面积的常用对数值为纵坐标（Y＝ln A），以进样量（μg）的常用对数值为横坐标（X＝ln m），进行线性回归，得回归方程如下：Y = 1.626 6X + 4.060 3，r=0.999 1。
       2.3  供试样品溶液的制备 
       取已刮去糖衣的童康片粉末5g，精密称定，置索氏提取器中加甲醇50 ml冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流8 h，提取液回收甲醇并浓缩至干，残渣加水20ml，微热使其溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，20 ml/次。合并正丁醇提取液，然后用氨试液提取3次，20 ml/次。弃去氨液，正丁醇液蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至10 ml容量瓶内，加甲醇至刻度，摇匀，即得［1］。进样前过0.45 μm微孔滤膜。
       2.4  阴性样品溶液的制备 
       取阴性样品（不含黄芪）约5 g，精密称定，按“供试样品溶液的制备”项下依法制备，即得阴性样品液。进样10 μl，按上述色谱条件测定。结果见图2，阴性样品在黄芪甲苷峰相应位置无干扰。
       2.5  精密度实验 
       精密吸取同一对照品溶液10 μl，连续进样5次，以峰面积计算精密度，结果黄芪甲苷峰面积的RSD为1.52%，表明仪器的精密度良好。
       2.6  重复性实验 
       精密称取同一批号（20050406）样品6份，按“供试样品溶液的制备”项下依法制备，并进行测定，结果各份测得黄芪甲苷含量差异较小，RSD为3.07%，表明方法具有良好的重现性。
       2.7  稳定性实验 
       精密吸取样品溶液 (20050406)10 μl，分别于0，2，4，8，12，24 h进样，测定峰面积，结果峰面积的RSD为2.09%。表明供试品溶液在24 h内稳定。
       2.8  加样回收率 
       精密称取同一批号成品（20050406）已知含量的样品5份，分别加入适量对照品，按“供试样品溶液的制备”项下制备供试品溶液。各供试品溶液分别进样，测定峰面积，计算各样品中黄芪甲苷的含量，计算回收率。结果平均回收率为100.6%，RSD为2.06%。见表1。表1  童康片加样回收率结果（略）
       2.9  童康片制剂的含量测定 
       分别取不同批次的童康片5 g，精密称定，按“供试样品溶液的制备”项下依法制备，按上述色谱条件测定（图3）。结果见表2。表2  童康片中黄芪甲苷的含量测定结果（略）
       3  讨论
        黄芪甲苷系四环三萜类皂苷［2］，紫外末端吸收，因此紫外检测灵敏度低，干扰因素多。本文作者曾尝试用薄层色谱扫描法［3］建立童康片中黄芪甲苷的含量测定方法，终因繁琐的操作步骤和较低的灵敏度而放弃。
        蒸发光散射检测器（ELSD）是近几年应用在中药质量分析方面的新型检测器，特别是对无紫外吸收或紫外末端吸收的物质具有较高的灵敏度，不受外界环境干扰，试剂在检测器中全部蒸发，不干扰检测，且灵敏度、稳定性及重复性均能够符合含量测定的要求［4］。经过系统的方法学考察，本实验所建立的方法具有稳定、简便、可重复的特点，可用于童康片的质量控制。
        
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：213.
       
       ［2］肖培根.新编中药志，第1卷［M］.北京：化学工业出版社，2002：876.
       
       ［3］林朝展，祝晨蔯，黄 琳,等.薄层扫描法测定广州黄芪商品药材中黄芪甲苷的含量［J］.广东药学,2002, 12(5)：26.
       
       ［4］冯埃生,邹汉法,汪海林，等.高效液相色谱-挥发激光散射检测器检测性能基本因素的考察［J］.药物分析杂志,1996,16(6) ：414.