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       【摘要】 
       目的优选半边旗的超声提取工艺。方法采用L9（34）正交实验，考察乙醇浓度（A）、提取时间（B）、提取次数（C）和料液比（D）4个影响因素，以5 F含量为评价指标，并采用薄层扫描法进行测定。结果半边旗超声提取的最佳工艺为A2B2C3D3，即加10倍量70%乙醇，超声提取3次，30 min/次。结论优选得到的工艺稳定可行。
       【关键词】  正交实验 超声波提取 半边旗
       
       Studies on Ultrasonic Extraction Process in Pteris semipinnata L.
       DIAN Linghui,LIANG Nianci, GONG Xianling
       Guangdong Medical College，Key Laboratory of Natural Drug Research and Development of Guangdong,Zhanjiang 524023,China
       Abstract：ObjectiveTo optimize the conditions of ultrasonic extraction of Pteris semipinnata L.MethodsThe four factors-alcohol content(A) ,ultrasonic time(B)，ultrasonic times(C) and solvent volume(D) were investigated by L9(34) orthogonal design,and  the content of 5F were defined as the standard index.5F was determined by TLCScanning .ResultsA2B2C3D3 was the optimum condition of the ultrasonic extraction,which was adding 10 times amount of 70% alcohol and extracting for 30  min（totally extracting for 3 times）.ConclusionThe optimized process is stable and available.
       Key words：Orthogonal test；  Ultrasonic extraction；  Pteris semipinnata L.
        半边旗为凤尾蕨科植物半边旗Pteris semipinnata L.干燥的全草，具有清热、解毒、消肿、止痢之功效，民间用于吐血、外伤出血、发背、跌打损伤、目赤肿痛［1］。张晓等［2］从增边旗乙醇提取物中分离得到极性较小的具有显著抗肿瘤作用的5F（11 βHydroxy15oxoentkaur16en19 oic acid）等二萜类化全物。二萜类化合物是半边旗的主要有效部位之一，由于二萜类化合物不易溶于水，故宜用醇提取。关于中药有效成分的提取一般是采用传统的溶剂回流法，目前超声提取技术因具有设备简单、操作方便、提取时间短、效率高、节能等优点，已被广泛应用于中药有效成分的提取［3］。近年来，关于半边旗的研究报道较多，但主要集中在其化学成分和药理作用方面［2］。而有关超声提取半边旗二萜类化合物的研究尚未见报道。本实验以半边旗中5F含量为评价指标，首次采用正交实验考察溶剂浓度、提取时间、提取次数和料液比对超声提取效果的影响，优选出了最佳提取方案。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器岛津CS9301型双波长飞点薄层扫描仪（日本岛津公司）；微量定量毛细管点样管；METTLER AE240全自动分析天平（梅特勒-托利多上海有限公司）；三用恒温水浴锅（华北实验仪品有限公司）；SB3200型超声仪（上海必能信仪器厂）；高效层析硅胶GF254板（青岛海洋化工厂）。
       1.2  试药5F对照品（本课题组分离纯化，由日本东京理科大学药学部和广东医学院生化研究所鉴定）。所用化学试剂均为分析纯。半边旗药材采于广州市效区。
       2  方法与结果
       2.1  供试品溶液的制备
       2.1.1  正交表的设计为全面考察超声提取法对5F提取效果的影响，笔者根据预试验结果进行分析，认为影响提取的主要因素有：乙醇浓度（A）、提取时间（B）、提取次数（C）和料液比（D）四个影响因素，设计实验因素和水平见表1。表1  实验因素水平L9（略）
       2.1.2  工艺过程精密称取9份半边旗药材粉末2 g，分别按L9（34）正交表实验，浸泡30 min超声提取，合并提取液，过滤，蒸干溶剂，用甲醇溶解并定容至5 ml，得1～9号供试品溶液，冷藏，备用。
       2.2  对照品溶液的制备精密称取5F对照品适量，加甲醇配制成每毫升含0.252 mg的溶液，作为对照品溶液。
       2.3  含量测定
       2.3.1  薄层色谱及扫描条件薄层色谱条件：高效层析硅胶GF254板；展开剂∶石油醚∶丙酮∶冰醋酸（7∶3∶0.05）；展开方式：预饱和15 min，上行展开，展距8 cm；薄层板置紫外灯下（254 nm）检视，定位。扫描条件：采用双波长反射法直线扫描法；λS=237 nm，λR=285 nm；线性参数SX=3；灵敏度中等。
       2.3.2  线性关系考察吸取对照品溶液2，4，6，8，10 μl分别点于同一硅胶GF254薄层板上，按“2.3.1”项下点样、展开、扫描，测定各斑点峰面积积分值。以对照品点样量（X）对斑点峰面积分值（Y）进行回归，得回归方程Y=31.046 1X-7.689 9，r=0.999 4。可见，对照品在0.504～2.520 μg范围内与峰面积积分值具有良好线性关系。
       2.3.3  稳定性实验精密吸取对照品溶液6 μl点于薄层板上，展开，晾干，在不同的时间（0，2，4，8，12，24 h）扫描1次，其峰面积积分值的RSD=1.26%，结果表明5F斑点在24 h内基本稳定。
       2.3.4  精密度实验精密吸取对照品溶液6 μl，在同一薄层板上点6个相同量的点，按“2.3.1”项下条件测定各斑点的峰面积，其峰面积积分值的RSD=1.39%（n=6）。异板精密度实验：精密吸取对照品溶液6 μl点在6块不同薄层析上，按“2.3.1”项下条件测定各斑点的峰面积，其峰面积积分值的RSD=4.75%(n=6)，结果表明精密度良好。
       2.3.5  加样回收率实验采用加样回收法，精密称取已知含量的药材，精密加入5F对照品溶液2 ml，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，按“2.3.1”项下条件点样，展开，扫描，测定，计算加样回收率，结果平均回收率为97.24%，RSD=2.53%(n=3)。
       2.3.6 样品含量测定将供试品溶液和5F对照品溶液点在同一硅胶GF254板上，采用外标两点法计算5F含量。结果见表2。表2  L9(34)正交实验方案与结果（略）
       2.3.7  结果分析由表2直观分析R值可知，超声影响因素主次顺序为CADB，超声次数是超声提取的关键因素，乙醇浓度和料液比次之，提取时间影响最小。所以最佳提取工艺是A2B2C3D3。
       2.3.8  工艺的细微调节及验证实验根据正交实验的结果，将最佳条件中的乙醇浓度、超声时间、料液比固定，优选提取次数（3次、4次和5次）的水平，其结果分别为0.651 2，0.653 9和0.650 8 mg·g-1。以上数据表明，提取3次基本提取完全，故确定提取3次。
       3  讨论
       3.1  本实验通过正交实验考察了乙醇浓度、提取时间、提取次数和料液比四个影响因素对半边旗提取效果的影响，通过对半边旗中5F含量的测定，优选出最佳提取工艺条件，并对其进行了验证实验，结果表明该工艺稳定，省时，简便，为半边旗指纹图谱的研究提供了参考依据。根据直观分析和验证实验，最佳提取工艺确定为浸泡30 min，10倍用量70%乙醇超声提取3次，30 min/次。
       3.2  超声提取法近几年新的提取方法，其理论依据是根据超声具有空化、粉碎、搅拌等特殊作用，对植物药材的细胞有破坏现象，使其溶媒渗透到药材的细胞中，以便使药材中的化学成分溶于溶媒之中。该法具有实验设备简单，操作方便，提取时间短，提取率较高，无需加热等优点。作为中药提取的新工艺，具有良好的应用前景。
       【参考文献】
         　　［1］江苏新医学院.中药大辞典，上册［M］.上海：上海科技出版社，1973：782.
       
       ［2］张 晓，崔 燎，梁念慈，等.半边旗有效成分及抗肿瘤活性研究［J］.中国药学杂志，1997，32（1）：37.
       
       ［3］张晓东，潘国凤，吕圭源.超声提取在中药化学成分提取中的应用研究进展［J］.时珍国医国药，2004，15（12）：861.