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       【摘要】 
       目的建立护肝胶囊中五味子醇甲的含量测定方法。方法比较甲醇索氏、甲醇超声、醋酸乙酯回流提取方法的提取效率，采用高效液相色谱法进行五味子醇甲的含量测定 。结果高效液相色谱法测定五味子醇甲，线性为58～2320 μg/ml，r=0.999 9，n=6，平均加样回收率98.53%，RSD为1.39%（n=9）。结论高效液相色谱法测定五味子醇甲，方法灵敏，重现性好。
       【关键词】  护肝胶囊； 五味子醇甲； 含量测定
       Determination of Schisandrol A in Hu Gan Capsules by HPLC
       SHA Mei, SHI Daofen, OUYANG Qiang
       (Nanjing Suzhong Pharmaceutical Research Limited Company 210016,China)
       Abstract：ObjectiveTo establish the methods for determination of schisandrol A in Hu Gan capsules.MethodsSchisandrol A was extracted by methanol soxhlet, methanol ultrasonic extraction and ethyl acetate reflux. Schisandrol A was determined by high performance liguid chromatography. ResultsThere were good linear relationships between the peak area and concentration,r=0.999 9 (n=6). Recovery of schisandrol A was above 98%,RSD=1.39% (n=9).ConclusionThe method is accurate and can be used for quality control for the preparation.
       Key words：Hu Gan capsules;  Schisandral A;  Determination
       护肝胶囊由柴胡、五味子等药材组成，有疏肝理气，健脾消食的功效。具有降低转氨酶作用，用于慢性肝炎、迁延性肝炎及早期肝硬化等［1］。我们对其中的有效成分五味子醇甲的提取方法以及含量测定方法进行了研究，其中提取方法采用甲醇超声、甲醇索提、醋酸乙酯回流3种提取方法进行提取，结果醋酸乙酯回流提取效率最高，高效液相含量测定中，对流动相进行了筛选，并进行了含量测定方法学研究。
       1  器材
       1.1  仪器岛津高效液相色谱仪，SPD10ADvp 检测器  Ajilent C18色谱柱（250 mm×4.6 mm）。
       1.2  制剂护肝胶囊，江苏苏中药业集团股份有限公司生产，批号20051017，20051226，20060327，20060621；规格0.35 g/粒。五味子醇甲对照品，中国药品生物制品检定所提供，批号110857200507。
       1.3  试剂甲醇，分析纯；醋酸乙酯，分析纯；乙腈，色谱纯；水，纯净水。
       2  方法
       2.1  提取方法的考察
       2.1.1  甲醇超声取20060621批护肝胶囊内容物研匀，取2 g，精密称定，加甲醇15，10，10 ml，超声（频率100 Hz,功率200 W）提取3次，滤过，滤渣用甲醇5 ml洗涤，滤过，合并滤液，回收至小体积，甲醇定容至25 ml量瓶。上述药渣再加甲醇10 ml依法提取2次，同法操作。结果表明3次提取完全。
       2.1.2  甲醇索氏提取取20060621批护肝胶囊内容物，研匀，取2 g，精密称定，加甲醇60 ml，索氏提取60 min，滤过，滤渣用甲醇10 ml洗涤，滤过，合并滤液，回收至小体积，甲醇定容至25 ml。上述药渣用甲醇60 ml提取2次，同上操作。结果表明，1次提取完全。
       2.1.3  醋酸乙酯加热回流取20060621批护肝胶囊内容物研匀，取700 mg，按照2005版《中国药典》Ⅰ部护肝片［2］下五味子醇甲含量测定项下操作。上述3种提取方法及结果见表1。
       表1  提取方法及结果（略）
       结果表明，醋酸乙酯加热回流提取效果最好。
       2.2  含量测定方法学研究
       2.2.1  测定波长选择将五味子醇甲对照品加甲醇制成0.1 mg/ml的溶液，紫外线扫描，结果在250 nm处有最大吸收。
       2.2.2  流动相筛选参照文献［3］采用甲醇∶水系统(63∶37)作为流动相，结果五味子醇甲对照品主峰比较宽，且峰的对称性不佳。改用乙腈∶水(50∶50)系统作为流动相，五味子醇甲峰理论塔板数高，峰的对称因子较好，且主峰和其它峰的分离较好。所以流动相为乙腈∶水（50∶50）。
       2.2.3  系统适应性五味子醇甲对照品溶液在此色谱条件下，理论踏板数为4 000以上，拖尾因子1.02。
       2.2.4  线性和进样精密度精密称取五味子醇甲对照品23.20 mg置10 ml量瓶，加甲醇溶解定容至刻度，精密吸取此溶液0.25，0.5，1.0，2，5 ml置10 ml量瓶，甲醇稀释至刻度，分别精密吸取上述6种浓度的对照品溶液20μl进高效液相色谱仪，记录峰面积，以峰面积和浓度进行直线回归，得回归方程A（峰面积）＝6 050.1C(浓度)＋66 344（r=0.999 9）。结果表明五味子醇甲浓度在58～2 320 μg/ml之间时，峰面积与浓度呈良好的线性关系。取浓度为0.116 mg/ml的对照品溶液连续进样5次，记录峰面积，结果进样的相对标准偏差为0.095%。
       2.2.5  重复性实验及中间精密度实验取护肝胶囊的内容物研匀，取700 mg，加入醋酸乙酯25 ml，加热回流30 min，冷却，滤过，醋酸乙酯30 ml洗涤药渣，滤过，合并滤液，减压浓缩至干，甲醇溶解定容至10 ml量瓶中，0.45 μm微孔滤过，取续滤液作为供试品溶液。取五味子醇甲对照品平行操作6份，结果见表2，加甲醇制成0.1 mg/ml的对照品溶液。按照外标法计算含量3人在不同的时间按照上述方法对20060621批护肝胶囊中的五味子醇甲进行含量测定。结果见表3。
       2.2.6  回收率实验取五味子醇甲对照品12.45 mg置25 ml量瓶中，醋酸乙酯溶解定容，制成浓度为0.498 mg/ml的对照品溶液。取20060621批护肝胶囊的内容物研匀，分别取350，700，1 050 mg各3份置100 ml圆底烧瓶中，分别加入对照品溶液1，2，3 ml，再分别加入醋酸乙酯25 ml，水浴加热回流提取30 min，冷却，滤过，滤渣用30 ml醋酸乙酯洗涤，滤过，滤液合并浓缩至干，甲醇溶解转移定容至10 ml量瓶，0.45 μm微孔滤过，取续滤液作为供试品溶液。结果见表4。
       表2  重复性实验结果（略）
       表3  五味子醇甲含量测定（略）
       表4  回收率实验结果（略）
       2.2.7  供试品溶液的稳定性实验取含量测定项下供试品溶液分别于0，2，4，6，8 h进样，记录峰面积，计算RSD值。结果见表5。
       表5  供试品溶液稳定性实验（略）
       说明供试品溶液在8 h内稳定。
       3  讨论
       
       以上方法专属性较好，适合于护肝胶囊中五味子醇甲的含量测定。
       【参考文献】
         　　［1］ 国家药典委员.新药转正标准［S］.
       
       ［2］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：北京化学工业出版社，2005：472.
       
       ［3］ 李 娜,刘亚英.护肝软胶囊的质量研究［J］.武警医学,2006,17（3）：195.