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       【摘要】 
       目的探讨翻白草对实验性糖尿病大鼠的降血糖作用。方法动物灌胃给药，用四氧嘧啶制备实验性糖尿病大鼠模型。应用免疫组织化学方法观察胰岛B细胞形态学改变，比色分析法检测血糖、胆固醇及甘油三酯的含量。结果翻白草对四氧嘧啶性糖尿病大鼠的胰岛B细胞有明显的修复作用并可以降低血糖、胆固醇及甘油三酯的含量。结论 翻白草对实验性糖尿病大鼠具有降血糖作用。
       【关键词】  翻白草； 降血糖； 胰岛B细胞； 大鼠
       The Effects of Potentilla discolor Bunge on Blood Sugar and Pathology of Pancreas Islet in Diabetic Rats Induced by Alloxan
       PIAO Lihua，HONG Hua， JIN Zheng, CAI Yinglan
       (Yanbian University，Yanji 133000 China)
       Abstract：ObjectiveTo investigate the hypoglycemic effects of extract of Potentilla discolor Bunge on experimental diabetes in rats. MethodsExperimental diabetic rats model was induced by alloxan. The pancreas islet B cells were detected by immunohistochemistry technology. The contents of blood sugar and TG, cholesterol were investigated by colorimetric method.ResultsPDB had repair effect on pancreas islet B cells, and it decreased the contents of blood sugar and TG. ConclusionThe Potentilla discolor Bunge has the effect of decreasing blood sugar in diabetic rats.
       Key words：Potentilla discolor Bunge；   Decrease blood sugar；  Pancreas islet B cell；  Rats
       
       随着社会的进步与发展，糖尿病的发病率日趋增高，中国在近20年内糖尿病患病率增加了3倍多［1］。虽然糖尿病的病因尚未被阐明，但目前认为胰岛素绝对或相对不足或胰岛素抵抗是糖尿病的主要病理基础。胰岛素的主要作用是促进细胞吸收血液内的葡萄糖作为细胞代谢的主要能量来源，同时也促进肝细胞将葡萄糖合成糖原或转化为脂肪。胰岛素的这种作用受阻、胰岛素分泌不足或两者同时存在缺陷，可导致血糖增高。目前，尚缺乏针对病因的有效治疗手段，因此，糖尿病的治疗中最关键的环节还是降血糖。目前，用于糖尿病治疗的药物大部分为西药。西药的降糖作用是肯定的，但其不良反应也是有目共睹。而中药在这方面有相对的优势，它不良反应少，能有效防治并发症且疗效肯定。在民间用翻白草泡水口服降糖的偏方，具有良好的临床效果［2］。
       1  材料
       1.1   翻白草 由延边大学医学部药学院天然药物教研室分离提取。
       1.2  美吡达 海南金晓制药有限公司。
       1.3  试剂 四氧嘧啶为HONG  KONG  FARCO  Chemical  Supplies公司产品；小鼠抗大鼠胰岛素血清为武汉博士德生物工程有限公司产品；血糖试剂盒为北京北化康临床试剂有限公司提供；甘油三酯试剂盒为浙江东瓯生物工程有限公司提供；总胆固醇试剂盒为上海荣盛生物技术有限公司提供；其他试剂均为国产分析纯。
       1.4   动物 实验动物采用实验用Wistar雄性大鼠，体重为190～230 g，由延边大学医学部实验动物科提供。
       2  方法
       2.1  四氧嘧啶性糖尿病大鼠模型的制备 采取两次给药法［3］，将四氧嘧啶用生理盐水配成2%注射液（四氧嘧啶现配现用）。第1次禁食不禁水12 h后腹腔注射四氧嘧啶120 mg/kg，15 min后腹腔注射胰岛素0.1 ml，并分别于给四氧嘧啶后2.5 h和5 h灌胃给予25%葡萄糖1 ml/100 g。第2次禁食不禁水12 h后腹腔注射四氧嘧啶100 mg/kg。15 min后腹腔注射胰岛素0.1 ml，并分别于给四氧嘧啶后2.5 h和5 h灌胃给予25%葡萄糖1 ml/100 g。实验采用葡萄糖氧化酶法取眼眶后静脉丛血测末次给药后72h的空腹血糖值，以空腹血糖 >11.1 mmol/L作为糖尿病大鼠。
       2.2   动物分组及给药方法 正常大鼠60只按随机数字表法分为正常对照组、糖尿病对照组、药物对照组、实验（大、中、小3个剂量）组。实验期间各组大鼠均给予普通饲料喂养自由饮水，实验组每日分别灌胃翻白草9，4.5，2.25 g/kg；药物对照组每日灌胃美吡达5 mg/kg；糖尿病对照组和正常对照组每日灌胃相应体积的蒸馏水，实验周期为4周。
       2.3  生化检测 实验前后实验动物禁食12 h，分别取眼眶后静脉丛血，分离血清，分别测空腹血糖、总胆固醇、甘油三酯。血糖测定采用葡萄糖氧化酶法，总胆固醇与甘油三酯测定各采用CHOD-PAP法和酶偶联比色法。
       2.4  免疫组织化学观察 实验4周后大鼠脱颈处死，迅速剖取胰尾，应用免疫组织化学SABC法显示胰岛B细胞。
       2.5  统计学处理 用SPSS10.0统计软件处理，进行配对t检验及方差分析。
       3  结果
       3.1  免疫组织化学观察结果  正常对照组胰岛多为圆形、椭圆形、多边形或不规则形，大小不一。SABC法染色后胰岛B细胞为棕褐色的免疫反应阳性，多位于胰岛中央，占据胰岛的绝大部分，排列紧密，细胞界限较清楚，多数呈圆形或椭圆形，免疫反应阳性物质分布于细胞质内，胰岛素分泌颗粒呈颗粒状，细胞质内分泌颗粒丰富，界限较清楚，着色深，未经染色的核呈空泡状，呈圆形或椭圆形，居中。B细胞群中存在的少量空白区为胰岛其他细胞所在位置。胰腺外分泌部的腺泡细胞间偶见单个免疫反应阳性细胞。糖尿病对照组胰岛形状多不规则，边缘不整齐。胰岛内免疫反应阳性细胞数量明显减少，每个胰岛内仅见数个散在的免疫反应阳性细胞，细胞之间出现较大的不规则空白区域，细胞质内分泌颗粒明显减少甚至缺失，颗粒着色浅，界限模糊，分布不均匀，空泡状的核界限不清甚至固缩。外分泌部腺泡细胞间很难见到单个免疫反应阳性细胞。实验大剂量组胰岛B细胞免疫组织化学改变与正常对照组相比，胰岛形状不规则，胰岛内免疫反应阳性细胞数量亦明显减少，界限不清，但部分细胞胞质内分泌颗粒与糖尿病对照组相比数量较多，着色深，界限较清楚，分布较均匀。少数细胞核界限清楚。实验中剂量组与药物对照组和糖尿病对照组相比胰岛内免疫反应阳性细胞数量相对较多，但细胞间仍有较大的空白区域，细胞轮廓较清楚，胞质内分泌颗粒较多，着色深，界限较清楚，分布较均匀。少数细胞核界限清楚。实验组小剂量组与糖尿病对照组相比免疫组织化学改变相近。实验组及药物对照组外分泌部腺泡细胞间亦可见到单个免疫反应阳性细胞。
       3.2  生化指标检测结果 实验前后血糖、总胆固醇及甘油三酯的含量结果见表1～3。
       表1  实验前后血糖水平的比较（略）
       与实验前比较，*P＜ 0.05，与糖尿病对照组比较，#P＜ 0.05，与正常组比较，※P＜0.05
       表2  实验前后血清胆固醇含量的比较（略）
       与实验前比较，*P＜0.05，与糖尿病对照组比较，#P＜0.05;n=10
           
       表3  实验前后血清甘油三酯含量的比较（略）
       与实验前比较，*P＜ 0.05，与糖尿病对照组比较，#P＜0.05
       4  讨论
       
       翻白草［2］始载于《救荒本草》，其味甘、微苦，性平，无毒，归肝、胃、大肠经，有清热润燥、凉血解毒、止血消肿、止痢之功效，多用于治疗痢疾、疟疾、肿痛、各种出血。而近年来翻白草在糖尿病的治疗中取得了良好的临床效果。本实验生化检测结果表明：实验组（大、中剂量组）经翻白草治疗4周后，与实验前相比各组空腹血糖均显著降低（P＜0.05）；与糖尿病对照组相比大、中、小剂量组空腹血糖亦显著降低（P＜0.05）。 在翻白草的3个剂量组与药物对照组（美吡达：与实验前相比P＜0.05，与糖尿病对照组相比P＜0.05）的降糖效果比较中，翻白草大、中剂量组的降血糖疗效比药物对照组好，接近正常对照组的血糖水平。比较翻白草三个剂量组之间的降糖效果，小剂量组与正常对照组相比空腹血糖有显著性差异（P＜0.05），而大、中剂量组与正常对照组相比空腹血糖无差异（P＞0.05），表明高剂量组降糖效果与中剂量组差不多，所以可用中剂量代替高剂量使用，可减少用药量。姜长玲等［4］在临床研究中证明翻白草能明显降低II型DM患者的TG，TC，LDL-C，ApoB，也通过降低纤维蛋白原和血小板的粘附聚集而全面改善其血液流变学差异。同年韩永明等［5］的在体实验也证实翻白草组体重明显增加（给药前后比较P＜0.05，给药前后体重差值与造模对照组比较（P＜0.01），翻白草组与实验对照组比较，两者之间无显著性差异（P＞0.05）。本实验生化检测结果表明，实验组（大、中剂量组）经翻白草治疗4周后，与实验前相比血脂（总胆固醇、甘油三酯）含量均显著减少（P＜0.05），而小剂量组实验前后血脂无显著差异（P＞0.05），表明翻白草在降低糖尿病动物血糖的同时可纠正其脂类代谢异常，翻白草对糖尿病动物降血脂疗效与所含黄酮类有关［5］。
       
       四氧嘧啶是一种特异性胰岛B细胞毒剂，可选择性破坏实验动物的胰岛B细胞引起实验性糖尿病。众多实验性研究表明，有些中药复方或单味药有刺激实验动物胰岛B细胞分泌胰岛素及促使受损的胰岛B细胞修复和再生等功能，从而降低血糖。本实验观察了经翻白草治疗4周后糖尿病大鼠胰岛B细胞免疫组化的形态学改变。结果表明，翻白草治疗组及药物对照组胰岛B细胞免疫组化显示结果相似，没有明显区别，B细胞数量减少，部分胞质内分泌颗粒明显减少甚至缺失，颗粒着色浅，但大剂量组、中剂量组及药物对照组与糖尿病对照组相比，部分B细胞胞质内分泌颗粒相对较多，着色较深，其中以实验大、中剂量组这种阳性细胞较多，翻白草治疗组及药物对照组外分泌部腺泡细胞间见到单个免疫反应阳性细胞，提示翻白草不仅对糖尿病大鼠受损的胰岛B细胞形态结构具有一定的改善作用，还可以使胰岛再生，而且大、中剂量组这种作用相等。
       【参考文献】
         　　［1］ 胡绍文，郭瑞林.实用糖尿病学，第1版［M］.北京：人民军医出版社，1998：18.
       
       ［2］ 刘金环，阮维国．翻白草水煎剂中微量元素的研究［J］.河北大学学报（自然科学版），2003(3)：337.
       
       ［3］ 艾 静，郭 键，张永春，等．四氧嘧啶致大鼠高血糖模型的实验研究［J］.哈尔滨医科大学学报，2001，35(2)：94.
       
       ［4］ 姜长玲，胡晓晨，赵晓刚.翻白草对2型糖尿病脂代谢和血液流变学的影响［J］.中国中医药信息杂志，2002,9（8）：41.
       
       ［5］ 韩永明，张业辉，熊迎春. 中药翻白草对糖尿病大鼠血糖的影响［J］.湖北中医学院学报，2002，4(1)：23.