文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的探讨银杏叶提取物对大鼠幽门结扎型胃溃疡的影响及其机制。方法采用结扎大鼠幽门的方法建立大鼠胃溃疡模型。45只Wistar大鼠随机分为3组，即正常对照组、溃疡模型组和银杏叶提取物（EGb）处理组。于造模术前第7天开始，EGb处理组大鼠通过胃管灌饲银杏叶提取物，1次/d，共7 d。在最后1次给药完毕1 h后，麻醉状态下，打开大鼠的腹腔，在幽门下穿线将幽门结扎，然后缝合腹壁切口。经13 h后各组大鼠处死，检测3组大鼠胃黏膜溃疡指数(UI)、胃液总酸度、胃蛋白酶活性和壁细胞H+，K+-ATP酶活性。结果溃疡模型组大鼠UI值（P<0.01）和胃液总酸度增大（P<0.01），同时胃液胃蛋白酶活性和壁细胞H+，K+-ATP酶活性升高（P<0.01）；而应用银杏叶提取物则减轻了大鼠应激性胃黏膜损伤（P<0.01），UI值（P<0.01）和胃液总酸度减小（P<0.01），胃液胃蛋白酶活性和壁细胞H+，K+-ATP酶活性降低（P<0.05）。结论银杏叶提取物具有抗大鼠幽门结扎型胃溃疡的作用，其机制可能是通过抑制胃酸及胃蛋白酶分泌有关。
       【关键词】  胃溃疡； 幽门； 大鼠； 银杏叶提取物； 胃酸； 胃蛋白酶； ATP酶
       Effects of Ginkgo biloba Extract on Pylorus Ligated Gastric Ulcer in Rats
       YU Liangzhu, HUANG Bilan, WANG Banghua, DING Jieqiong, TANG Qiong
       （Department of Physiology, Medical School of Xianning College, Xianning Hubei, 437100 China）
       Abstract：ObjectiveTo explore the effects of Ginkgo biloba extract on pylorus ligated gastric ulcer in rats and its mechanism. MethodsRat gastric ulcer model was made by ligating pylorus method．45 wistar rats were randomly divided into three groups(n=15 per group)：① the normal control group；② the ulcer model group and③ the group orally pretreated with Ginkgo biloba extract for 7 days before modeling. The pylorus was ligated 1h under anesthesia after the last administration. Then the abdominal wall was closed with sutures. Thirteen hours later, the rats were killed. The gastric mucosal ulcer index(UI),total acidity of gastric juice, pepsin activity of gastric juice and H+，K+-ATPase activity of parietal cells were measured in rats of every group. ResultsCompared with the normal control group，the ulcer model group showed increase in UI（P<0.01）, total acidity of gastric juice（P<0.01）, pepsin activity of gastric juice and H+，K+-ATPase activity of parietal cells（P<0.01）. In the treated group, the gastric mucosal injury was attenuated, and the gastric mucosal ulcer index(UI)（P<0.01）,total acidity of gastric juice（P<0.01）,pepsin activity of gastric juice and H+，K+-ATPase activity of parietal cells decreased（P<0.05）. ConclusionGinkgo biloba extract can improve pylorus ligated gastric ulcer in rats, whose mechanism can be related to its inhibition of the secretion of gastric acid and pepsin.
       Key words：Gastric ulcer；  Pylorus；  Rats；  Extracts of Ginkgo biloba；  Gastric acid；  Pepsin;  ATPase
       
       胃溃疡(gastric ulcer，GU)是临床上的常见疾病，其发生机制比较复杂，研究认为是由于胃腔内损伤因子与胃十二指肠黏膜内保护机制间作用失衡所致［1］。这些局部损伤因子包括胃酸分泌过多和胃蛋白酶自消化作用。近年来研究表明，银杏叶提取物（Extracts of Ginkgo biloba，EGb）具有清除自由基、抗氧化［2］和特异性拮抗血小板活化因子(PAF)［3］等作用，并可影响肾上腺皮质激素的代谢和对抗胃肠局部缺血引起的黏膜损伤［4］。在此，通过采用结扎幽门建立大鼠胃溃疡模型，观察银杏叶提取物对幽门结扎型大鼠胃溃疡的影响，探讨其防治原理，为临床防治GU和开发新药提供线索。
       1  材料和方法
       1.1  材料45只健康雄性Wistar大鼠(由咸宁学院实验动物中心提供)，体重 250～300 g，常规饲料喂养，自由进水。721型分光光度计（上海第三分析仪器厂），银杏叶提取物 (EGb为贵州信邦制药股份有限公司生产)，H+，K+-ATP酶活性测定试剂盒及胃蛋白酶活性测定试剂盒均由南京建成生物工程研究所提供。
       1.2  方法45只健康雄性Wistar大鼠随机分为正常对照组(n=15)，溃疡模型组(n=15)及EGb处理组(n=15)。各组大鼠实验前禁食24 h。溃疡模型参照Shay et al［5］方法，即于造模术前第7天开始，EGb处理组大鼠通过胃管灌饲银杏叶提取物，剂量为200 mg/kg体重，此剂量系参照姚新生等［3］实验，1次/d，共7 d；正常对照组和溃疡模型组灌饲同等容积的生理盐水。在最后一次给药完毕的1 h后，麻醉状态下，打开大鼠的腹腔，暴露胃，在幽门下穿线将幽门结扎；正常对照组大鼠不作结扎，其它操作同溃疡模型组。结扎后各组大鼠均经十二指肠注射药液1次，正常对照组和溃疡模型组注射同等容积的生理盐水，然后缝合腹壁切口，常规消毒。放回饲养笼，禁食水，经6 h后各组大鼠处死，结扎贲门，将胃取出，沿胃大弯侧剪开后展开，用小棉球轻轻将胃黏液及血凝块擦掉，观察胃黏膜损伤的程度和形态。胃黏膜溃疡指数（ulcer index，UI）测定：按Guth标准［6］计算溃疡指数。溃疡指数按黏膜溃疡或糜烂长度（mm）计算 ：斑点状糜烂为1分，糜烂<1 mm为2分，糜烂介于1～2 mm为3分，糜烂2～4 mm为4分，糜烂>4 mm为5分。糜烂宽度>1 mm则分值×2。胃液总酸度值测定：取胃时，将全部胃液抽出置于离心管中离心，3 000 r/min，20 min，取部分上清液(其余部分上清液用于胃蛋白酶活性测定)，用0.1 mol／L NaOH溶液滴定测量胃液的总酸度［7］。胃液胃蛋白酶活性测定：取部分上清胃液, 按照试剂盒说明测定胃蛋白酶活性(氨基酸还原法)。壁细胞H+，K+-ATP酶活性测定：用玻璃片刮下胃黏膜放入冻存管内，于－70℃保存待测，用于测定 H+，K+-ATP酶活性。将已制备的胃黏膜准确称重后加49倍生理盐水，用组织匀浆机制成2％的胃黏膜匀浆。按照H+，K+-ATP酶活性测定试剂盒说明进行操作。
       1.3  统计学处理所有资料均用（±s）表示，应用SPSS10.0统计软件进行分析，多组均数比较采用ANOVA检验。P<0.05为有显著性差异。
       2  结果
       2.1  银杏叶提取物对大鼠UI的影响溃疡模型组UI值较正常对照组显著升高(P<0.01)；与溃疡模型组相比，EGb处理组UI值明显下降(P<0.01，见表1)。提示幽门结扎可致胃黏膜损伤，而银杏叶提取物可以明显减轻幽门结扎对胃黏膜的损伤作用。
       2.2  银杏叶提取物对大鼠胃液总酸度值及壁细胞H+，K+-ATP酶活性的影响溃疡模型组大鼠胃液总酸度值较正常对照组明显增大(P<0.01),而壁细胞H+，K+-ATP酶活性较之后者明显升高(P<0.01)；与溃疡模型组相比，EGb处理组胃液总酸度值明显减小(P<0.01)，H+，K+-ATP酶活性降低(P<0.05，见表1)。提示幽门结扎后大鼠胃壁细胞H+，K+-ATP酶活性升高，胃泌酸功能增强，泌酸增多；而银杏叶提取物可以对抗幽门结扎所致的壁细胞H+，K+-ATP酶活性升高，削弱胃泌酸功能，减少胃酸分泌。
       2.3  银杏叶提取物对大鼠胃液胃蛋白酶活性的影响溃疡模型组大鼠胃液胃蛋白酶活性较正常对照组明显升高 (P<0.01)；与溃疡模型组相比，EGb处理组胃液胃蛋白酶活性明显降低(P<0.05，见表1)。提示幽门结扎后大鼠胃液胃蛋白酶活性升高、分泌增多；而银杏叶提取物可以降低胃液胃蛋白酶活性，减少胃液胃蛋白酶分泌。
       表1  各组溃疡指数（UI）、胃液总酸度值、壁细胞H+，K+-ATP酶活性和胃液胃蛋白酶活性的测定结果（略）  
       与正常对照组比较，※※P<0.01，与溃疡模型组比较，△△P<0.01,△P<0.05;n=15
       3  讨论
         
       溃疡病是一种以疼痛为主要临床表现的病症，其病因病机至今尚未完全阐明。但普遍认为其形成主要是攻击因子与防御因子之间失衡所致［1］。攻击因子主要指胃酸、胃蛋白酶、幽门螺杆菌、药物损害及氧自由基等；防御因子通常有胃黏液-碳酸氢盐屏障、胃黏膜屏障、黏膜血流、细胞更新、前列腺素及表皮生长因子等。胃酸和胃蛋白酶是主要的攻击因子，可直接对胃黏膜产生损害［8］；同时，胃酸能激活已分泌的胃蛋白酶，两者协同作用，对胃黏膜进行侵蚀和破坏。另外，胃黏膜血流量 (GMBF)的改变在应激性溃疡发生机制中的作用近十多年来日益得到重视。大多数学者认为GMBF的减少是导致应激性胃黏膜糜烂出血和溃疡形成的主要原因［9，10］。而氧化应激产生时，氧自由基产生增加，可导致胃黏膜细胞凋亡率增加，加重胃黏膜损害和促进溃疡形成［11］。因此，胃溃疡的发生是由多因素造成的，针对这些因素设定相应的治疗策略成为当前防治溃疡病的热点。    我们当前实验即是以幽门结扎型大鼠胃溃疡模型，观察银杏叶提取物对大鼠胃溃疡中胃酸和胃蛋白酶分泌的影响。我们观察到，在幽门被结扎后大鼠胃黏膜溃疡指数增大，同时伴胃酸和胃蛋白酶分泌增多，以及胃黏膜壁细胞H+，K+-ATP酶活性升高。因此，幽门被结扎后大鼠确实产生了胃溃疡性黏膜损伤；同时胃壁细胞被激活，H+，K+-ATP酶对H+转运功能增强，故胃酸分泌增多。而在大鼠溃疡发生前预先给予灌饲银杏叶提取物，则降低了溃疡发生后大鼠胃黏膜溃疡指数(UI)，使其胃酸和胃蛋白酶分泌减少，并伴壁细胞H+，K+-ATP酶活性降低。由此我们推测，预先给予银杏叶提取物可防治大鼠胃溃疡性黏膜损伤，其机制与抑制胃酸、胃蛋白酶分泌有关。总之，银杏叶提取物防治大鼠胃溃疡的作用机制有待进一步探索。
       【参考文献】
         　　［1］ Synnerstad I,Johnson M,Nylander O,et al. Intraluminal acid and gastric mucosal integrity: the importance of blood-borne bicarbonate［J］. Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2001，280(1):G121.
       
       ［2］ 刘诗权，于皆平，罗和生,等. 银杏叶萃取物对大鼠纤维化肝脏NF-κB的影响［J］.世界华人消化杂志，2002，10(8)：922.
       
       ［3］ 姚新生,孙万邦,谢政军. 应激性溃疡中血小板活化因子的变化及银杏叶提取物的防治作用的实验研究［J］.中华消化杂志，2002，22(5):319.
       
       ［4］ 张根葆,钱大青,孙 俊,等. 银杏叶提取物对大鼠应激性溃疡的保护作用［J］. 世界华人消化杂志，1999，7(10)：869.
       
       ［5］ Ye RD, Yang QZ, Xiao W, et al. Antiulcer effects of lycium barbarum polysaccharide in rats［J］. Journal of Medical College of PLA 2005，20:161.
       
       ［6］ Guth PH，Aures D，Paulsen G. Topical aspirin plus HCl gastric lesions in the rat. Cytoprotective effect of prostaglandin, cimetidine, and probanthine［J］. Gastroenterology，1979，76(1):88.
       
       ［7］ 向 明，袁继红，储 潼,等.乙酰酪氨酰胺锌抗实验性胃溃疡的作用研究［J］.中国药学杂志，2001，36：666.
       
       ［8］ 陆国明，李玉梅，章 明，等.L-精氨酸对应激状态下大鼠胃黏膜损伤及壁细胞泌酸的影响［J］.中国药学杂志，2005，40：1797.
       
       ［9］ Kawano S，Tsuji S．Role of mucosal blood flow：a conceptional review in gastric mucosal injury and protection［J］.J Gastroenterol Hepatol，2000，15：D1.
       
       ［10］ 罗燕军，于皆平．胃黏膜血流变化的影响因素［J］.世界华人消化杂志，2001，9：671.
       
       ［11］ 汤 净.消化性溃疡患者血中LPO含量,SOD及GSH-PX活性观察［J］.世界华人消化杂志,2000，9：487.