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       【摘要】 
       目的建立银黄颗粒中绿原酸的含量测定方法。方法HPLC 法测定银黄颗粒中绿原酸的含量。采用C18柱,以乙腈0.4%磷酸（10∶90）为流动相，检测波长为327nm。结果在0.164～0.984 μg·ml-1范围内线性关系良好（r=1，n=6），平均回收率为100.0% ,RSD= 0.8% (n=4)。结论 该方法简便、准确，可为标准的修订提供可行的依据。
       【关键词】  高效液相色谱法； 银黄颗粒； 绿原酸
       
       Determination of Chlorogenic Acid in Yinhuang Particle by HPLC
       WEI Qing , KANG Hongying
       （The First College of Clinical  Medical Science,China Three Gorges University & Yichang Central People" s Hospital,Yichang 443003,China；Laboratory for the Control of Drugs of Yichang 443000, China）
       Abstract:ObjectiveTo establish the determination method for chlorogenic acid in Yinhuang Particle.MethodsDetermination of Chlorogenic Acid in Yinhuang Particle by HPLC with C18column and acetonitrile-0.4%phosphoric acid(10∶90)as the mobile phase.The detection wavelengh was 327nm.ResultsThe linear range was 0.164～0.984 μg·ml-1（r=1，n=6）.The average recovery was 100.0% ,RSD= 0.8%(n=4).ConclusionThe method is simple and accurate.It can offer the feasible basis for revision of the standard.
       Key words:HPLC;  Yinhuang particle;  Chlorogenic acid
       
       银黄颗粒是由金银花提取物和黄芩提取物制成的颗粒，具有清热、解毒、消炎的功能。用于急慢性咽炎、上呼吸道感染。但该制剂现行质量标准无含量测定项目［1］，为了有效控制药品质量，确保该制剂的疗效，本文以方中主药金银花的有效成分绿原酸为定量控制指标，采用HPLC测定银黄颗粒中绿原酸的含量，方法简便、准确。
       1  仪器和试药
       
       Agilent 1100 Series高效液相色谱仪；METTLER AE240电子分析天平;SB3200超声波清洗器。
       
       绿原酸对照品由中国药品生物制品检定所提供（批号110753200212，供含量测定用）；流动相所用乙腈为色谱纯；水为重蒸馏水；其它试剂均为分析纯。
       
       银黄颗粒3批（湖南三九南开制药有限公司，批号20050101；成都市湔江制药厂，批号 050401492；南昌济顺制药有限公司，批号 20050401）。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱为NUCLEOSIL C18(10 μm，4.6  mm×250 mm)；流动相为乙腈0.4%磷酸（10∶90）；检测波长327 nm；流速1.0 ml·min-1；柱温25℃；进样量10 μl。
       2.2  溶液的制备与测定
       2.2.1  对照品溶液的制备取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每毫升含40 μg的溶液，即得。
       2.2.2  供试品溶液的制备取装量差异项下的本品，研细，取约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加50%甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用50%甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，再精密量取续滤液5 ml，置25 ml棕色量瓶中，加50%甲醇至刻度，摇匀，即得［2］。
       2.2.3  空白对照溶液的制备以相同的处方比例，制得不含金银花的空白样品。按“2.2.2”项下方法制成空白对照溶液。
       2.2.4  测定分别精密吸取上述3种溶液各10 μl，按上述色谱条件分别测定，见图1。结果表明供试品色谱图中呈现与绿原酸对照品保留时间相应的色谱峰，而空白对照无干扰。
       a-对照品  b-供试品  c-空白对照
       图1  HPLC色谱图（略）
       2.3  线性关系考察精密称取绿原酸对照品4.10 mg，置25 ml棕色量瓶中，加50%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；精密吸取对照品贮备液2 ml，置10 ml量瓶中，加50%甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。精密吸取上述溶液5，10，15，20，25，30 μl进样测定，记录峰面积。以浓度（C）对峰面积（A）进行线性回归，得回归方程为A＝69.285 7C-3.095 2(r=1,n=6)。结果表明绿原酸在0.164～0.984 μg·ml-1范围内线性关系良好。
       2.4  精密度实验精密吸取同一对照品溶液10 μl，连续进样5次，分别得峰面积积分值693，692，691，689，689，结果峰面积平均值为691，RSD=0.3%。
       2.5   稳定性实验精密吸取上述供试品溶液10 μl，于8 h后测定峰面积，结果峰面积几乎不变，表明供试品溶液至少在8 h内稳定。
       2.6   重复性实验精密量取同一样品（成都市湔江制药厂）3份，照“2.2.2”项下操作，测得含量平均值为8.03 mg·g-1,RSD为0.6%（n=4）表明本法重复性好。
       2.7  回收率实验精密称取同一已知含量样品（成都市湔江制药厂）约0.5 g共4份，定量加入适量的绿原酸对照品，照“2.2.2”项下操作，并按上述色谱条件测定。结果见表1，平均回收率为100.0%，RSD为0.8%（n=4）。
       表1  加样回收率实验结果（略）
       2.8   样品测定按上述测定方法对3个厂家样品中绿原酸含量进行测定，结果见表2。
       表2  样品测定结果（略）
       3  讨论
          
       取绿原酸对照品进行紫外扫描（200～400 nm）,结果在327.0 nm波长处有最大吸收，实验选择327 nm作为检测波长。
       
       本文参照银黄口服液的色谱条件进行检测，其流动相中乙腈的比例不得大于10%，否则样品色谱图的分离效果差。
       
       由表2可见不同厂家的样品中绿原酸的含量差异太大，而现在对其含量没有统一的限度标准，作者建议今后在修改标准时应考虑增加含量测定项，以确保药品的质量，保证临床用药安全有效。
       
       方法学研究表明，本文报道的测定方法操作简单，结果准确，重复性好，空白无干扰，可作为银黄颗粒质量标准含量测定方法。
       【参考文献】
         　　［1］ 中华人民共和国卫生部.药品标准中药成方制剂,第6册［S］.1992：169.
       
       ［2］ 中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：177.