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       【摘要】 
       目的建立高效液相-蒸发光散射检测法测定龙生蛭胶囊中黄芪甲苷的含量。方法色谱柱为Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）。流动相为乙腈-水(33∶67),流速1.0 ml/min。ELSD参数：漂移管温度105℃，气体流量2.8 ml/min。结果黄芪甲苷在2.45～10.64 μg的线性关系良好(r=0.999 2,n=5)。结论方法简便准确，重现性好，灵敏度高。
       【关键词】  蒸发光散射检测高效液相色谱； 龙生蛭胶囊； 黄芪甲苷
       Determination of Astragaloside in Longshengzhi Capsules by HPLCELSD
       WANG Qiaoling, LEI Yaxian, YAO Wei，GAO Xiangxiang
       (Xianyang Buchang Pharmaceutical Co., Ltd. 712000, China)
       Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC-ELSD method for determining the contents of astragaloside in Longshengzhi capsules.MethodsThe chromatographic column was Diamosil C18(250 mn×4.6 mm,5 μm). The mobile phase was ace tonitrile-water(33∶67)and the flow rate was 1.0 ml/min.The drift tube temperature was at 105℃.The gas flow rate was at 2.8 ml/min.ResultsWithin the range of 2.45～10.64 μg, the content of astragaloside had a good linear ratationship (r=0.999 2,n=5).ConclusionThe method is easy,reliable,sensitive and reproducibile.
       Key words：HPLC-ELSD；  Longshengzhi capsules；  Astragaloaside
       
       龙生蛭胶囊是由黄芪、地龙、水蛭、赤芍等药材组成，具有补气活血、逐淤通络的功效。黄芪为其君药，所含黄芪甲苷为其主要活性成分。目前质量标准多采用薄层扫描法，考虑到薄层扫描操作繁琐，引起误差环节比较多，本文改用HPLC-ELSD法测定黄芪甲苷含量。以期为有效控制黄芪甲苷含量提供有效依据。
       1  仪器与试药
       
       本岛津LC-10AT高效液相色谱仪。Alltech 2000ES型检测器。黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号0781-200210，乙腈为色谱纯，水为高纯水，其它试剂均为分析纯。龙生蛭胶囊由咸阳步长制药有限公司提供。
       2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm） 流动相∶乙腈-水(33∶67),V=1.0 ml/min,ELSD参数：漂移管温度：105℃，气体流量:2.8 ml/min。
       2.2  对照品溶液的制备精密称取黄芪甲苷对照品12.25 mg，置5 ml量瓶中，加甲醇溶解后稀释至刻度（2.45 mg/ml）,摇匀，精密量取1 ml，置5 ml量瓶加甲醇至刻度，作为对照品溶液（0.490 mg/ml）。
       2.3  供试品溶液的制备精密称取3.0 g本品，加70%甲醇回流提取1 h，滤过，滤渣用70%甲醇分次洗涤，合并滤液，水浴蒸干。残渣用水10 ml溶解，移至分液漏斗中，用水饱和的正丁醇提取4次（20，20，15，15 ml），合并提取液，用1%NaOH液洗涤2次（15 ，15 ml），弃去洗涤液，再用正丁醇饱和水洗至中性，正丁醇液水浴蒸干，用甲醇定容至5 ml量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。
       2.4  线性关系考察精密吸取黄芪甲苷对照品溶液（0.490 mg/ml）5，10，15，20，25μl，进样，按上述色谱条件测定，以峰面积的自然对数为纵坐标，以进样量的自然对数为横坐标，进行线性回归，得回归方程：Y=1.120 87X+5.912 53，r=0.999 2，线性范围为2.45～12.45μg，线性关系良好。
       2.5  精密度实验对同一对照品溶液，连续测定5次，计算得黄芪甲苷峰面积积分值的RSD为1.02%。
       2.6  稳定性实验取上述供试品30 μl，分别在0，2，4，6，8，12 h进样测定，其平均峰面积为4 719 003.500，RSD=1.68%，表明供试品溶液在12 h内稳定。
       2.7  重复性实验对同一批样品（050805）5份，分别测定，结果黄芪甲苷平均含量为100.26μg/粒，RSD为1.70%。
       2.8  加样回收试验精密称取黄芪甲苷对照品5.25 mg，置50 ml量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得对照品溶液（0.105 mg/ml），取已知含量的样品5份，加入上述对照品1.0 ml，依法测定，并计算加样回收率。结果见表1。
       表1  加样回收率实验结果（略）
       2.9  样品测定取样品3批，依法测定，得黄芪甲苷含量为111.32，108.33,109.68 μg/粒。结果见图1。
       图1  黄芪甲苷的HPLC色谱图（略）
       3  讨论
          
       含黄芪制剂中黄芪甲苷含量多采用薄层扫描法，但其操作繁琐，重现性差，而高效液相分离效果好，但黄芪甲苷最大吸收波长为200.8 nm，如用紫外检测试剂影响较大，分析很难进行。ELSD检测器为质量型检测器，不受外部环境干扰，试剂在检测器中全部蒸发，不干扰测定，灵敏度、稳定性及重复性能够符合测定要求，故本实验采用HPLC-ELSD法测定，效果良好。
       
       由于处方成分复杂，在样品处理过程中曾采用D101树脂过柱，用未过柱与过柱处理的样品进行了比较，结果表明两种方法色谱图基本一致，但过柱处理含量远低于未过柱样品，所以在处理样品时取消了过柱步骤，经考察，可操作性强。
       
       流动相选择：将流动相按不同比例调节，经对比，乙腈水（33∶67）作为流动相，分离效果好。