薄荷油β
作者：张幸生
《时珍国医国药》 2005年 第12期
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【关键词】 薄荷油；,,,β
摘要：目的：研究薄荷油β 环糊精包合物的最佳制备工艺。方法：用正交实验法研究配比、温度、时间三个因素对薄荷油β 环糊精包合物的饱和水溶液法的制备工艺的影响，考察包合物的收率，并用TLC、显微影像验证包合物的形成。结果：最佳的工艺条件薄荷油2.5 ml，包合温度50℃，包合时间3.5 h。结论：此方法可用于制备薄荷油β 环糊精包合物。
关键词：薄荷油； β 环糊精包合物； 正交实验； 薄层色谱法； 显微影像
Study on Preparation Procedure of β cyclodextrin Inclusion Compound for Pennyroyal
ZHANG Xing sheng
(Shenzhen Polytechnic Technology College, Shenzhen 518055, China)
Abstract:Objective:To study optimum inclusion process for β cyclodextrin inclusion compound of Pennyroyal. Methods:The preparation procedure of β cyclodextrin inclusion compound of pennyroyal was studied by orthogonal test with 3 factors: Pennyroyal, temperature and time.The inclusion compound was proved by thin layer chromatography and microscope.Results:The optimum preparation conditions for inclusion compound were established as ：pennyroyal 2.5 ml ,inclusion temperature was at 50℃ and for 3.5hr. Conclusion:The method can be used for preparation of the inclusion compound.
Key words:Pennyroyal; β Cyclodextrin inclusion compound; Orthogonal test; TLC; Microscope
薄荷油为唇形科植物薄荷Mentha haplocalyx Briq.的新鲜茎叶经蒸馏、冷冻、部分脱脂加工而得到的挥发油，为无色或淡黄色的澄清液体。油中主含L-薄荷醇（薄荷脑，L－menthol）约77%～87%， L-薄荷酮（L-menthone）约10%，薄荷酯类约3%～6%，及乙基-n-戊酮等。薄荷油具有宣散风热、清头目、透疹等功效［1，2］。由于薄荷油中的成分极易挥发，所以常制成液体制剂，如：芳香剂、醑剂等制成包含物。为了更好地发挥其疗效，提高其稳定性，可使其粉末化以便于制备各种剂型。常用的制备方法包括饱和水溶液法、溶液搅拌法、研磨法、冷冻干燥法、混合溶剂法、共沉法等。本文使用饱和水溶液法制备了薄荷油β 环糊精包合物并用正交实验法筛选工艺条件，得出最佳工艺条件，并对包合物进行了薄层层析鉴别和显微影像鉴定。
1 仪器和试药
1.1 仪器95-1恒温磁力搅拌器（上海司乐仪器厂）；SHZ-C型循环水试多用真空泵（ 河南省巩义市英峪市予华仪器厂）； 101-3型电热鼓风干燥箱（上海浦东跃欣科学仪器厂）；显微影像系统（LETCA DM4）。
1.2 试药薄荷油（深圳市宝丰鑫四野有限公司南北玻商行，批号010328）；β 环糊精（广东省郁南县环状糊精厂，批号010402）； 无水乙醇（广州化学试剂厂，批号2001100901-1）；95%乙醇（广州化学试剂二厂，批号2001121501）；羧甲基纤维素钠（广州市化学试剂玻璃仪器批发部，批号910918）；硅胶G（青岛海洋化工有限公司，批号010402）；醋酸乙酯（广州化学试剂厂，批号20000601-2）； 石油醚（广州化学试剂厂，批号99121601）；香兰素（中国医药集团上海化学试剂公司，批号20010208）；
2 方法与结果
2.1 饱和水溶液法制备β 环糊精包合物［3～5］
2.1.1 β 环糊精饱和水溶液的制备称取β 环糊精8.0 g，加水100 ml。加热至61℃制成饱和溶液。
2.1.2 薄荷油β 环糊精包合物的制备取以上饱和水溶液。放置于适当的温度下恒温。取薄荷油适量，缓缓滴入β 环糊精饱和溶液中，恒温搅拌适当的时间。过滤，滤饼用无水乙醇洗涤至无油渍为止。将包合物置干燥器中干燥24 h，即得薄荷油β 环糊精包合物，称重，计算包合物的收率。
包合物的收率按下式计算［4］
包合物的收率（%）=包合物的投入量(g） β 环糊精投入量（g）+薄荷油投入量(g）×100%
2.1.3 正交实验及结果根据预实验结果，选择β 环糊精（8 g）与薄荷油的配比，包合的温度，包合的时间3项考察因素，各取3个水平进行L9（34）正交实验, 因素水平见表1，并以薄荷油的包合物的收率为考察指标，筛选出最佳的工艺条件。结果见表2。
表1 正交实验因素水平（略）
表2 正交实验设计表及结果（略）
2.1.4 正交实验结果直观分析由表2可知：①ⅢA/3>ⅡA/3>ⅠA/3，即最佳配比为8∶2.5，②ⅡB/3>ⅢB/3>ⅠB/3，即最佳温度为50℃，③ⅢC/3>ⅡC/3>ⅠC/3，即最佳时间为3.5 h。因RA>RC>RB，即实验中主要因素为A，即配比，其次为B,C。
2.1.5 正交实验交互作用结果分析［6］考虑各因素交互作用对工艺条件的影响。结果见表3。
表3 交互作用实验数据（略）
从表3可知,各因素及交互作用对工艺条件的影响结果的大小次序为B*C→A→A*C→B→C→A*B。可见B*C是影响结果的重要的因素，而B*C的实验结果是B与C相互搭配产生的，此两因素各水平搭配下实验的平均结果列于表4。
表4 B和C搭配结果（略）
从表4中可知B和C的最佳搭配为B2C3，即50℃ 3.5 h。
2.1.6 正交实验交互作用结果的方差分析方差分析结果见表5。
表5 方差分析方差来源（略）
*为显著性
由表5可知，交互作用B*C有显著影响,因素A有影响。由表2，表3，表4，表5可知，最优工艺条件为 A3B2C3，即配比为8∶2.5，最佳温度为50℃，最佳时间为3.5 h。
3 薄荷油β 环糊精包合物薄层层析鉴别与显微成像鉴别
3.1 硅胶G板的制作将硅胶G和3 g/L羧甲基纤维素钠水溶液按1 g∶3 ml的比例，调匀，铺板，110℃活化30 min备用。
3.2 样品的制备(1）取环糊精饱和水溶液，为样品a。（2）取薄荷油2滴，加95%乙醇2 ml溶解，为样品b。（3）取饱和水溶液法制得的薄荷油β 环糊精包合物0.5 g，加95%乙醇2 ml溶解，过滤，滤液为样品c。
3.3 TLC层析图取样品a，b，c点于同一硅胶板上，以含15%石油醚的乙酸乙酯为展开剂，以5%香兰醛硫酸乙酸混合溶液为显色剂，喷雾后于己105℃烘10 min显色。结果见图1。
图1 薄荷油β 环糊精包合物TLC层析图（略）
3.4 显微成像鉴别将薄荷油、β 环糊精、β 环糊精包合物用水溶解，然后用胶头滴管吸取少量溶液滴到载玻片上，盖上玻璃片，用显微成像仪观察其成像（结果见图2～3）。
图2 β 环糊精显微成像图（略）
图3 β 环糊精包合物显微成像图（略）
4 讨论
4.1 实验结果表明，最佳的工艺条件为A3B2C3，即薄荷油为2.5 ml(配比为8∶2.5)、温度50℃、时间3.5 h，影响最大的因素为β 环糊精与薄荷油的配比。
4.2 薄荷油因挥发性较强，包合温度不宜过高，温度高薄荷油易挥发逸出，影响包合物的收率，但温度低β CD的溶解度降低，不利于与薄荷油接触也会影响包合物的收率。
4.3 温度和时间的交互作用也对实验结果有很大影响，以B2C3的收率较高。
4.4 TLC层析图显示β 环糊精、薄荷油、β 环糊精包合物的层析结果各不相同，且薄荷油β 环糊精包合物仅显示一个斑点，说明薄荷油β 环糊精包合物已形成了一个新的物相，薄荷油β 环糊精包合物已形成。显微成像图显示β 环糊精与β 环糊精包合物显微成像晶型明显不同，说明β 环糊精与β 环糊精包合物是不同的物相。
参考文献：
［1］ 徐国钧.生药学，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，1996：290 291.
［2］ 国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：310 312.
［3］ 张幸生.药剂学［M］.北京：中国轻工出版社，2004：475 476.
［4］ 张 彦，金向群，丛登立，等.薄荷β 环糊精包合物的研究［J］.长春中医学院学报，2001，17（4）：40 41.
［5］ 高素琴，朱春林.莪术挥发油提取工艺优化实验研究［J］.时珍国医国药，2000，11（10）：878 878.
［6］ 刘定远.医药数理统计方法，第3版［M］.北京：人民卫生出版社，1999：172 178.
(深圳职业技术学院，广东 深圳 518055)